卫生检验IDAS及VITEK32的作用

卫生检验IDAS及VITEK32的作用

作者:仝志琴 单位:洛阳市疾病预防控制中心

随着我国人民生活水平的提高,对食品卫生的要求也越来越高。食品微生物检验是食品卫生监督的重要组成部分。传统的国标检验方法要经过增菌、分离培养、生化实验、血清学实验等,过程繁琐,需要耗费大量的人力物力。近年来,国内外学者在传统检验方法的基础上,研究和探索出了许多快速的仪器检验方法。本文应用VIDAS和VITEK32仪器对食品中致病菌进行检测,并与传统方法进行比较,以探索快速检验方法在食品检验中的应用。

1材料与方法

1.1样品来源样品为本单位公共卫生研究所无菌采集的全市超市、集贸市场、饭店及个体商店肉与肉制品,粮食加工品及米面制品、豆制品,动物性水产品,生食类蔬菜,婴儿配方食品,冷冻食品,餐饮食品,共257份,无菌包装,每件样品至少250g,及时送实验室进行增菌培养。

1.2检验项目沙门氏菌、单增李斯特菌。

1.3主要材料与仪器干燥培养基购自北京陆桥技术有限公司;致病菌显色平板由郑州贝瑞特公司提供;诊断血清由宁波天润生物药业有限公司生产;全自动荧光免疫分析仪(miniVIDAS)及试纸条由法国生物梅里埃公司生产;全自动微生物生化鉴定仪(VITEK32)及鉴定卡由法国生物梅里埃公司生产。

1.4检验方法国标法:按照国家标准GB4789-2010检验方法进行检验。VIDAS+VITEK32法:按照miniVIDAS操作手册,样品经过前增菌和后增菌,以无菌操作取1mL后增菌肉汤,在100℃水浴中加热15min,取出0.5mL煮沸灭活的肉汤加入VIDAS试剂条的样品孔中,根据VIDAS操作规程检验,得出结果。对于VIDAS检验结果阳性者,挑取后增菌液转种相应的致病菌显色平板经36℃、24h培养,再挑取可疑菌落转种营养琼脂36℃、24h纯化后,挑取菌落作革兰氏染色镜检及氧化酶或触酶、血浆凝固酶试验。根据细菌种类选卡片,作外部试验标记,然后按要求配置一定浊度的菌悬液填充鉴定卡,封口后,放入孵育箱孵育后自动判读。

2结果

2.1VIDAS法与国标法检测结果比较①VIDAS法与国标法检测沙门氏菌结果比较:共检测样品257份,VIDAS法检测沙门氏菌阳性样品11份,国标法检测沙门氏菌阳性样品8份,这8份VIDAS法都检出阳性。由此计算出检测沙门氏菌VIDAS的灵敏度=8/8×100%=100%,特异度=246/249×100%=98.80,表1。②VIDAS法与国标法检测单增李斯特菌结果比较:共检测样品257份,VIDAS法检测单增李斯特菌阳性样品17份,国标法检测单增李斯特菌阳性样品10份,这10份VIDAS法都检出阳性。由此计算出检测单增李斯特菌VIDAS的灵敏度=10/10×100%=100%,特异度=240/247×100%=97.17%,表2。

2.2VIDAS+VITEK32法与国标法检测沙门氏菌结果比较①VIDAS+VITEK32法与国标法检测沙门氏菌结果比较:共检测样品257份,国标法检测沙门氏菌阳性样品8份,检出率3.11%,VIDAS+VITEK32法检测沙门氏菌阳性样品9份检出率3.50%。为了验证VIDAS+VITEK法的可靠性,将VIDAS+VITEK法做出的阳性菌种再用国标方法进行生化鉴定,结果完全一致。②VIDAS+VITEK32法与国标法检测单增李斯特菌结果比较:共检测样品257份,国标法检测单增李斯特菌阳性样品10份,检出率3.89%,VIDAS+VITEK32法检测单增李斯特菌阳性样品12份,检出率4.67%。将VIDAS+VITEK法做出的阳性菌种再用国标方法进行生化鉴定,结果完全符合。

3讨论

VIDAS是联免疫吸附方法的全自动荧光免疫分析系统。它采用一系列增菌培养基和大量可供选择的选择性培养基,促进目标致病菌的生长,使其达到检测方法对检测限的要求。另外,针对不同致病菌,VIDAS采用不同抗体,抗体捕获样品目标致病菌的特异性抗原,捕获后进行洗涤,使抗原抗体复合物与液体中的其他物质分离,然后加入碱性磷酸酶标记的抗体,它只结合目标致病菌的特异性抗原,此时酶量与目标致病菌的量呈一特定比例。由于碱性磷酸酶可分解试剂条中的荧光底物,发出荧光,因此系统可通过检测荧光强度,判断致病菌的含量[1]。VIDAS检测能力强、速度快,一般上机后几十分钟可以得到初筛结果。从本研究可以看出,VIDAS法的灵敏度为100%,所以可以作为大批量样品的筛查,能有效地节约检验时间和工作量。

VITEK32对细菌的鉴定是以每种细菌的微量生化反应为基础。VITEK测试卡含有多种生化反应孔,内含不同反应所需要的底物。将手工分离的待检纯菌落制成符合规定浊度要求的菌悬液,经充填机将菌悬液注入测试卡内,封口后放入读数器中,由读数器按光学扫描原理,定时测定各生化介质中指示剂的显色并在电脑上自动打印[2]。VITEK32鉴定过程程序化、规范化,简便快捷。本研究表明,VITEK32鉴定结果准确,经国标法验证,结果完全一致,这与黄雪珍等人的研究结果一致[3]。而由于VIDAS存在一定的假阳性结果,需要进行进一步的鉴定,正好可以利用VITEK32鉴定快捷、准确的特点进行最终的鉴定[4]。国标检验方法在筛选可疑菌落的过程中,受许多人为因素的影响,比如平板划线技术、对可疑菌落的判定经验等,在筛查中难免遗漏。而VIDAS采用仪器化程序操作,去掉了人为因素,再经过VITEK32进一步的鉴定,检出率有可能高于国标法,从而提高了工作效率和结果的准确性[5]。