基因多态性研究范文1
【关键词】 abcg2基因;单核苷酸多态性
abstractabcg2 protein is one of the atp-binding transporters expressed in human normal cells and tumor tissues,abcg2 can inhibit the gastrointestinal absorption of which can be exogenous substances,involved in many physiological functions such as the formation of the blood-brain and placental-blood barrier. abcg2 is a new drug efflux pump as well. it is one cause of multidrug resistance. abcg2 gene single nucleotide polymorphism may affect the expression and function of abcg2 protein. abcg2 gene snp is associated with disease susceptibility and pharmacokinetics. single nucleotide polymorphism of abcg2 is becoming a new hotspot. domestic and international research on the abcg2 gene snp is reviewed in this paper.
key words:abcg2 gene;single nucleotide polymorphism
1998 年doyle等[1]首先在乳腺癌细胞株mcf-7/adrvp 中检测到一种跨膜转运蛋白，称为乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein，bcrp)，系统发育分析该基因为abc转运蛋白超家族(atp-binding cassette transporter superfamily,abc transporter superfamily)g亚家族第2成员，命名为abcg2。abcg2定位于细胞膜，在正常组织中分布广泛，主要分布于具有分泌和排泄功能的组织如胎盘合体滋养层、小肠和结肠上皮、肝脏小管膜、胆小管膜、乳腺小叶及血管内皮细胞中。人类abcg2基因位于4q22～23，编码655个氨基酸残基。abcg2全长66 kb，由16个外显子和15个内含子组成，外显子为60～332 bp不等。abcg2在人体内承担着一定的生理功能，如维持细胞稳态、血脑屏障、胎血屏障等，同时与疾病的易感性及药动学等相关。
单核苷酸多态(single nucleotide polymorphisms,snp)是指基因组水平上由单个核苷酸变异引起的dna序列多态性，它是人类遗传变异中最常见的一种，占所有已知多态性的90%以上。作为“第三代dna遗传标记”的单核苷酸多态性标记具有位点丰富、具代表性、遗传稳定性和分析自动化的等特点，是研究药物基因组学的分子基础。研究单核苷酸多态性有助于解释个体的表型差异、不同群体和个体对疾病，特别是对复杂疾病的易感性以及对各种药物的耐受性和对环境因素反应的差异。单核苷酸多态性可应用于分子遗传标记，分子标记诊断，在流行病学调查中的高危人群筛查，以及进行患病危险程度评价。
近年来，一些研究资料显示，abcg2基因单核苷酸多态性可能与abcg2的表达水平和功能有着不可忽视的作用，此外abcg2基因单核苷酸多态性与耐药性也有着重大关联。因此，abcg2基因的单核苷酸多态性的研究引起了研究者的极大关注，本文从abcg2基因单核苷酸多态性的分布、对蛋白表达和功能的影响以及与肿瘤等疾病相关性的研究进展进行综述。
1abcg2基因的snps及其分布
目前已发现abcg2基因有40多个snps，其中最为常见的3个abcg2基因snps分别是c421a、g34a以及c376t。c421a是由abcg2第5个外显子的421位点碱基改变引起的，这个snp导致其编码的多肽141位谷氨酰胺变为赖氨酸(q141k);g34a位于abcg2基因第2外显子上，引起12位的缬氨酸变为甲硫氨酸 (v12m)，野生型和变异型氨基酸均不带电荷，呈疏水性，位于abcg2 n端细胞内区域;abcg2基因里的另一个单核苷酸多态是c376t(q126stop)，造成终止密码子代替126位的谷氨酰胺。表1为已报道的abcg2基因编码区snps。表1abcg2基因编码区单核苷酸多态研究者们已经对东亚人群、高加索人群以及非洲人群的abcg2 snps做了相关的研究，发现abcg2 snps的分布在不同人群中有显著的差异(表2)。c421a在所检测的人群中均可检测得到，a等位基因的发生频率在中国人群中高达29.0%~34.2%，日本人群为30.4%~35.5%，高加索人群为8.7%~11.9%，非洲人群中最为罕见，只有09%~53%;g34a多态性也分布于多种人群中，在瑞典人群中发生率仅为1.7%，而在越南人群中发生率高达36.0%，abcg2基因的另一常见snp(c376t)，仅在东亚人群可检测发现，发生频率为0.4%~1.9%。
2abcg2基因snps对abcg2蛋白表达及功能的影响
多项研究报道abcg2基因单核苷酸多态性影响abcg2蛋白的表达水平。imai等[10]对124名日本健康志愿者的血样作dna分析，显示c421a导致abcg2表达水平下降;furukawa等[11]用野生型和c421a重组flp-in-293细胞研究abcg2表达水平，结果显示c421a表达水平约为野生型的50%，但是mrna水平相同;kobayashi等[8]也得出了相似的结果，并进一步证实abcg2蛋白水平的差异由转录后调节而非abcg2 mrna水平变化所引起。poonkuzhali等[12]研究发现，具有g34a单核苷酸多态性的西班牙人abcg2 mrna的水平明显降低。tamura等[13]在研究中创建了7个abcg2 snps(v12m、q141k、f208s、s248p、f431l、s441n、f489l)重组flp-in-293细胞，其中f208s、s441n的表达水平下降最为明显;poonkuzhali等[12]对abcg2启动子和内含子1单核苷酸多态性进行研究，结果显示15622c>t携带者abcg2表达水平较低，12283t>c、16702c>t与肝脏abcg2高表达相关，1143g>a与小肠的低表达相关，15994c>t启动子snp显著提高bcrp的表达水平。abcg2基因c376t snp虽然发生频率较低,但由于376t等位基因不表达abcg2，因此c376t对abcg2功能有重要影响。
abcg2单核苷酸多态性还可能与abcg2蛋白的转运活性、膜定位、底物活性等功能有关。kondo等[14]用含有7个snps(v12m、q141k、a149p、r163k、q166e、p269s、s441n)和野生型的cdna质粒转染llc-pk1细胞，发现s441n对abcg2蛋白的膜定位有影响，s441n表现为abcg2定位于细胞内，其余六个snps及野生型abcg2均
定位于顶膜。用重组腺病毒感染hek293细胞确定abcg2表达水平和转运活性，发现这7个snps对脱氢表雄酮、甲氨蝶呤、多环芳烃等转运活性与野生无异;tamura等[13]研究证明f208s、s441n可能会影响蛋白的稳定性，并且f208s、s248p、f431l、s441n、f489l多态对sn-38、二羟蒽二酮、阿霉素、柔红霉素和依托泊苷的转运活性明显低于野生型;lee等[3]在韩国人群abcg2基因多态研究中发现，携带p269s多态者与野生型相比abcg2蛋白对底物的活性下降了35%~40%，同时还证明abcg2蛋白对底物活性下降与atp酶抑制没有关系;mizuarai等[6]发现导入421a的sf9细胞atp活性比野生型下降1.3倍。表2abcg2单核苷酸多态性位点在不同人群的分布
3abcg2基因snps与药动学
abcg2表达于胎盘、心脏、结肠、小肠、肾、肝等器官，影响着许多药物的体内药动学过程。abcg2 基因snps通过影响abcg2的表达水平、底物的转运效率、蛋白活性等，对许多药物在体内的药动学发挥着作用。urquhart等[15]在研究c421a对吉非替尼(gefitinib)的药动学的影响中，发现421a多态是导致abcg2蛋白活性减弱的原因，同时421a可能会增加药物毒性反应的风险，导致携带此多态的患者腹泻。zhang等[4]研究发现，421a等位基因导致abcg2蛋白表达下降会影响普伐他汀(pravastatin)的清除和吸收;同时还发现携带421a等位基因的中国健康男性血液中罗苏伐他汀(rosuvastatin)浓度比abcg2野生型高约80%。keskitalo等[16]用32位健康人，其中5个421aa，4个421ca，23个421cc基因型，分别注射单剂量40毫克氟伐他汀(fluvastatin)，普伐他汀和辛伐他汀(simvastatin)，洗脱期为1周。结果显示421cc、421ca基因型携带者血液中氟伐他汀浓度较421aa基因型携带者分别高出72%和97%,421cc基因型携带者血液辛伐他汀浓度比421aa基因型高111%,证明abcg2基因c421a snp显着影响氟伐他汀和辛伐他汀内酯的药动学，且对普伐他汀或辛伐他汀酸有显著影响。
abcg2转运蛋白的底物包括一些药物，因此abcg2基因snps可能会影响携带人群对某些药物的耐药性。cusatis等[17]体外试验显示421a携带者在细胞表面的蛋白表达降低，健康志愿者的体内试验结果显示携带34gg/421ca的个体柳氮磺吡啶(sulfasalazine)的药时曲线下面积(auc)比携带34gg/421cc 的个体的大2.4倍，表明abcg2单核苷酸多态影响体内药物处置，引起abcg2在肠道表达的个体差异，遗传性变异可能是药物个体间差异的决定因素。morisaki等[18]发现，421a对二羟蒽二酮(mitoxantrone)、托泊替康(topotecan)或sn-38耐药性有一定降低。imai等[10]研究表明421a细胞对二羟蒽二酮、盐酸托泊替康比野生型敏感2~3倍，421a表现为低耐药性;与前面的报道不同，de jong等[2]对84个欧洲患者血样dna测序，结果发现abcg2基因c421a对盐酸伊立替康药动学无影响。
4abcg2基因snps与疾病的关系
截至目前，已有成千上万个snps在人类基因组中被发现并且被证实可以通过改变相应蛋白质的表达和活性，从而影响人体对疾病或肿瘤的易感性，影响不同类型肿瘤的临床生物学行为。korenaga等[5]利用dna探针分析法，分析200个肾细胞癌(rcc)患者和200个健康者的dna样本，对比患者与健康者的abcg2基因c421a snp，结果显示421cc基因型在患者中频率明显高于健康者，表明421a等位基因是肾细胞癌的易感因素。hahn等[19]人在前列腺癌患者中作生存分析发现abcg2 421cc基因型携带者15个月生存率较421a等位基因携带者显著降低。王潇潇等[20]研究了abcg2基因的单核苷酸多态性与弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)的关系，以156例dlbcl患者作为实验组，376例健康人群作为对照组，统计分析bcrp基因g34a和c421a位点的snps分布频率。结果发现实验组421位点ca、aa、ca+aa基因型频率分别为51.3%、10.2%、61.5%;对照组ca、aa、ca+aa基因型频率分别为43.1%、8.8%、51.9%，abcg2基因421位点基因型ca、aa对比于野生的基因型cc，患弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)的风险增加，即a为相对不良因素，这种风险在年轻的病人表现更显著。此外，王潇潇等还发现abcg2基因g34a和c421a snps联合影响dlbcl的预后：g34a位点aa基因型与gg/ag基因型相比生存较差，421位点的cc基因型与较差的生存显著相关。对比于携带34位点(gg+ga)421位点(aa+ca)的基因型，那些带有34aa421cc显示出非常差的生存。胡丽莉等[21]对abcg2基因snps与弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)易感及预后的研究结果与王潇潇等的结果一致，同时胡丽莉等对abcg2基因snps与肝细胞肝癌(hcc)的预后分析显示携带abcg2 34aa基因型的患者比携带g等位基因的患者总生存差，携带bcrp 421cc基因型的hcc患者，其死亡危险度是含有a等位基因患者的2.85倍。
kim等[22]在预测伊马替尼治疗慢性髓性白血病效果的研究中，229个慢性髓性白血病患者基因分型结果显示，abcg2(g34a)gg基因型与伊马替尼治疗晚期不良反应显著相关。woodward等[23]对14783人研究发现c421a与血尿酸水平显著相关，421a使尿酸的转运速率下降53.0%，从而导致血尿酸水平升高，影响痛风的发生，其中在男性中表现更为明显。与上述的研究报道不同，在abcg2基因snps与疾病和肿瘤关系的研究中也存在一些阴性及相反的结果：胡丽莉等[21]构建了包括206个肝细胞肝癌(hcc)患者和265个健康人的病例—对照实验组，用于研究abcg2基因snps与肝细胞肝癌(hcc)易感性。结果发现abcg2基因c421a和g34a各基因型频率在对照组与hcc病例组差异不显著，证明abcg2基因c421a和g34a与hcc易感性无关。gardner等[24]研究发现c421a snp与前列腺癌的发病率无关联;但abcg2野生型的前列腺癌生存率明显要比携带421a的患者高，通过转染hek细胞的研究也证明421a导致phip转运下降。müller等[25]对以色列正常人群和急性骨髓性白血病(aml)患者的研究发现，abcg2 c421a与aml的易感性和预后均无关; stergaard等[26]在克罗恩病(cd)和溃疡性结肠炎(uc)丹麦病例对照研究使用373例cd，541例uc，796例健康人结果显示abcg2基因snp与cd和uc无关联。campa等和andersen等的研究发现abcg2 c421a与crc的易感性无关[27-28]。
5结语
目前对abcg2基因snps的研究结果出现了不一致的现象，例如大部分研究显示abcg2单核苷酸多态不影响mrna的表达水平，但也有一些研究证明mrna水平受到abcg2单核苷酸多态性影响;在与疾病相关的研究报道中也有类似的现象，例如c421a与前列腺癌的生存率的两个研究结果相反;此外一些abcg2基因snps与肿瘤等疾病易感性的研究显示，abcg2基因的某些snps在不同肿瘤及疾病中发挥着不尽相同的影响。总而言之，有关abcg2单核苷酸多态性的研究尚属初级阶段，其snps对abcg2功能的影响、药动学以及肿瘤等疾病的影响机制我们依然知之甚少。但是abcg2单核苷酸多态性的有关研究报告已经显示，abcg2单核苷酸多态性对疾病预防、诊断和患者药物的筛选的重要性是不可忽视的。abcg2的药物基因组学研究刚刚起步，需要对其深入研究以了解snps对abcg2功能、药动学以及肿瘤等疾病的影响。
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基因多态性研究范文2
综上所述，本文结果提示Apelin-13有浓度依赖性舒张血管的作用，并且其扩血管作用依赖于内皮的完整性。本实验从细胞信号转导途径探讨了Apelin降压作用可能机制，初步阐明了Apelin与血管内皮之间的相互作用关系，有助于进一步加深对Apelin降压和扩张血管等生物学效应及作用机制的了解。但Apella对高血压大鼠的降压作用的机制仍尚未完全清楚，有待于进一步研究。35.3％比23.6％，P
[关键词]缝隙连接；C
中图分类号：R541.4 文献标识码：A 文章编号：1009-816X(2007)06-0390-03
组成缝隙连接(gap iunction intercellIllar communl―cation，GJIC)的蛋白亚单位称为Connexins，迄今已发现20余种不同的Connexins家族成员，血管细胞中主要有comaexiIl37，connexin40和connexin43的表达oConnexin37基因存在C1019T单核苷酸多态位点，引起eonnexin37分子的319位脯氨酸被丝氨酸所取代。国外研究表明这一多态位点与冠心病，心肌梗死的危险性相关，而国内尚少有研究报导。
1 对象与方法
1.1研究对象：收集在温州医学院附属第一医院心内科住院的冠心病患者173例(其中119例为急性心肌梗死患者)，平均年龄为68.03±10.85岁，男性136例，女性37例。急性心肌梗死的诊断符合2001年中华医学会心血病学分会急性心肌梗死诊断标准，非心肌梗死冠心病人均经冠状动脉造影证实，即一支以上的冠状动脉主干狭窄≥50％。对照组共有148例，平均年龄66.67±8.55岁，男性86例，女性62例，其中47例为经冠状动脉造影排除冠心病的同期住院病人，其余对象为同期在本院体检的健康对照(均无冠心病病史，常规心电图检查无冠心病证据，并且排除恶性肿瘤，免疫炎症性疾病)。
1.2血样采集和DNA的提取：抽取研究对象的空腹静脉血2ml，放在含有EDTA抗凝剂PCR管中。采用人类基因组DNA提取试剂盒(上海生工)从300va全血中提取基因组DAN，然后放在－70℃下保存。
1.3 PCR和基因定型：本研究采用聚合酶链反应一限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)方法来鉴定Con―nexin37基因的基因型。PcR引物序列为5’－CTA TcACCCI．cG CCC TGT AC,-3’(正义链)和5’－TAT TCA CGC CAC TGT GTG CT-3’(反义链)。反应体系为10ul，包含两条引物各O.5umol／L，0.25rrmaol／L的4种dNTP，2．5mmol／L的t,tgc_a2，O.5U Taq DAN聚合酶。PCR循环周期为96℃ 4min l循环，94℃ Imia。60℃lmin 30s，72℃ lmin共32循环，72℃ 5min 1循环，扩增出大小为275bp的DN段。扩增产物用限制性内切酶Drd I 37℃消化4小时后，3％的琼脂糖凝胶电泳判断酶切结果。
1.4统计方法：采用SPSS(11.5)统计软件包进行数据分析。连续性变量采用‘检验，频率采用X2检验分析。基因型与冠心病的相关性采用比数比(OFt，odds ratio)及其95％的可信区间(cI，confidence inter―vals)来表示。并用多因素Logistic回归分析来排除年龄、性别，以及冠心病的其他危险因素的影响。检验水准采用a=0.05。
2 结果
2.1两组临床特征的比较：见表1。两组基线特征(除年龄和高胆固醇血症外)具有显著性差异，(P
2.2 Connexin37基因型和等位基因频率在两组中的分布：表2和表3示Cormexin37等位基因和基因型在冠心病组和对照组中的分布情况，经过检验表明基因型和等位基因在两组的分布均具有显著性差异。同时对两组对象基因型的分布进行均Hardy-Weinberg(H-W)遗传平衡检验，表明两组均符合H-W平衡。
2.3 Logistic回归分析：经多因素Logistic回归分析以剔除年龄、性别和冠心病其他危险因素的影响后，表明在本研究人群中Connexin37基因TT+TC基因型是冠心病的独立危险因素。Cormexin37基因T等位基因携带者(Tf+TC基因型)患冠心病的危险性是不携带者(cc基因型)的2.339倍，95％的可信区间(cI)为1.028―5.324，P=0.043。
3 讨论
组成缝隙连接的蛋白亚单位称为Connexins。属于多基因家族。至今已发现20余种Connexins，其中Cormexin37基因在人类主要表达在血管内皮细胞，但在粥样斑块的淋巴细胞和单核细胞也有表达。研
究表明Cormexin37与内皮细胞的生长，损伤修复和衰老有关。因此，Cormexin37的改变可引起内皮细胞功能的改变，从而推测可能在血管病变的发生机制中起潜在作用。
Conenxin37基因定位在lp35.1，已发现密码子1019存在C／T单核苷酸多态性，这一多态性引起Connexin37蛋白的319位的脯氨酸(Pro)被丝氨酸(Ser)所取代。日本学者研究表明Connexin37基因C1019T单核苷酸多态性与急性心肌梗死的危险性相关，在男性中心肌梗死病人IT基因型和T等位基因的频率显著高于对照组。最近的一个前瞻性研究表明Conenxin37基因C1019T多态性能预测急性冠脉综合征后的长期死亡率，T等位基因携带者3年的死亡率是14％而不携带者(C,／C纯合子)是8.3％。调整后的危险比HI(hazard ratio)1.7，95％的cI 1.05―2.8，P
本文采用PCR-RFI方法对173例冠心病患者和148例对照的Cormexin37基因C1019T多态性进行了检测，并且经过检验表明基因型在两组对象中的分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律。在本文人群中，Connexin37基因C1019T单核苷酸酸多态性与冠心病的危险性相关，冠心病患者的T等位基因和1rr基因型的频率显著高于对照组。并且经过多因素Logistic回归分析排除了年龄、性别和冠心病其它危险因素的影响后，T等位基因携带者患冠心病的危险性为不携带者(C／C纯合子)的2.34倍。因此可以认为Connexin37基因T等位基因可能是中国人群冠心病的遗传危险因素。
基因多态性研究范文3
脑卒中已成为威胁我国人民健康的重大疾病。随着脑血管病分子生物学、遗传学等研究逐渐深入，寻找缺血性脑卒中相关致病基因成为近年研究重点，载脂蛋白E(ApoE)是血浆脂蛋白的重要组成成分，主要由肝脏合成和代谢，具有多种生物学活性，不仅与血脂代谢和动脉粥样硬化密切相关，而且还参与神经细胞的修复和免疫调节。关于ApoE基因多态性与缺血性脑卒中疾病的关系，尚存在争论〔1〕。近年研究发现，ApoE不同基因型对脂质代谢、动脉粥样硬化及冠状动脉粥样硬化性心脏病有影响，同时在脑缺血损伤中亦发挥重要作用，但其具体作用尚不清楚。本文就此方面研究进行简要综述。
1 ApoE生物学特点
载脂蛋白是从血浆中分离出的一类具有结合及转运脂质功能的特殊蛋白。ApoE是肝细胞和巨噬细胞合成的功能蛋白质〔2〕，主要存在于极低密度脂蛋白(VLDL)、乳糜微粒(CM)及CM残基中，也存于βvLDL、高密度脂蛋白(HDL)的亚类中。ApoE是由299个氨基酸组成的单链多肽糖蛋白，分子量为37 kD。人类ApoE存在3种异构体，即ApoE2、ApoE3和ApoE4。ApoE分子有两个结构域存在，羧基末端结构域具有结合脂质功能，氨基末端结构域能与低密度脂蛋白(LDL)受体完全结合。ApoE与LDL受体之间的相互作用对于富含ApoE的脂蛋白清除起着极为重要的作用，富含ApoE的脂蛋白作为配基还可以结合除LDL受体以外的受体，如LDL相关受体蛋白，vLDL受体和蛋白多糖等。
ApoE异构体的存在决定于ApoE基因的多态性。ApoE基因位于第19号染色体长臂13.2区(19q13.2)，含有4个外显子和3个内含子，其中外显子4中编码112位半胱氨酸(cysteine，Cys)与158位精氨酸(arginine，Arg)的DNA序列存在多态性。已经发现编码3种异构体有ε2、ε3、ε4三种等位基因，ε3在112位编码Cys，在158位编码Arg，ε2两个位上均为Cys，ε4则两个位上均为Arg。基因多态性导致了人群中存在6种不同的遗传表型，即3种杂合体(E2/3，E3/4，E2/4)和3种纯合体(E2/2，E3/3，E4/4)，其中ε3，E3/3分别是最常见的等位基因和遗传表型。ApoE等位基因频率分布具有年龄、种族和地区差异性。现在比较一致的认识是ε3为野生型基因，ε2和ε4为突变型基因，而后二种等位基因对血脂有重大影响。
2 缺血性脑卒中与基因多态性的关系
目前关于缺血性脑卒中与基因多态性的研究很多，研究者选择的基因主要有ApoE、FgBβ、亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)、血管紧张素转化酶(ACE)、血管紧张素原(AGT)、一氧化氮合成酶(NOS)、血小板胶原受体整合蛋白α2基因及前凝血酶。李才明等〔3〕研究发现ACE基因DD、TT基因型和T等位基因的缺血性脑卒中的易患因子，ACE基因与MTHFR基因在缺血性脑卒中发病过程中存在协同作用。孙慧等〔4〕研究提示提示β纤维蛋白原455G/A 基因多态性与血浆Fg水平升高有关，A等位基因可能是与缺血性脑卒中发病有关的遗传因素。在中国人中，血小板膜糖蛋白Ia基因转录区寡肽807T等位基因可能是年轻缺血性脑卒中和高危缺血性脑卒中病人的独立危险因素〔5〕。纵观此类研究，多没有提出明确论断缺血性脑卒中与研究基因的相关性，均认为可能存在相关性。缺血性脑卒中与ApoE基因多态性的相关性亦是研究的热点之一。
3 缺血性脑卒中与ApoE基因多态性的关系
诸多研究表明ApoE基因与缺血性脑卒中的发生有密切关系〔6〕。Kim等〔7〕认为ApoEε4是使缺血性脑血管病复发的一个重要指标。夏昱等〔8〕探讨了110例缺血性脑梗死患者ApoE基因型与60例健康对照者，结果发现脑梗死组ε4等位基因频率高于对照组，因此认为ε4等位基因与脑梗死的发病有关。马飞煜等〔9〕用PCRRFLP技术对对47急性动脉粥样硬化性脑梗死患者（ACI组）、48例腔隙性脑梗死患者、14 例急性栓塞性脑梗死组患者和50例对照ApoE基因多态性进行测定，结果显示ACI组ApoEε4等位基因频率明显高于其他脑卒中亚型及对照组，ApoEε4等位基因与急性动脉粥样硬化性脑梗死发病有关。多项国内外研究〔10～17〕均认为ε4等位基因是缺血性脑卒中的危险因素。另外，也有学者〔13，18，19〕研究均认为，ε3等位基因也可能是缺血性脑卒中的一种保护因素。有研究表明〔20〕，ε2基因增加了患缺血性脑卒中的危险性，但也有研究认为〔21〕它是缺血性脑卒中的保护因素。但是，也有研究认为ApoE等位基因与缺血性脑卒中无关，如周君等〔22〕采用PCRRFLP技术检测72例为缺血性脑卒中患者和68例为健康体格检查者ApoE基因多态性，结果显示两组ApoE基因型频率和等位基因频率无统计学差异，认为ApoE基因多态性与缺血性脑卒中无关。Nakata等〔23〕对缺血性脑卒中患者的检测表明ApoE基因与缺血性脑卒中无关，Kunisto〔24〕
、陈卫蓉等〔25〕研究也认为ε4等位基因频率的高低与缺血性脑卒中无明显关系。Apo E有3种异构体E2、E3和E4，研究发现，颈动脉内膜增厚与ApoE基因的表达相关，尤其与ApoE4基因型相关，并且与环境因素(吸烟、高血压等)相互作用增加脑卒中的发生率〔26〕。也有研究认为ApoE4与脑梗死关系密切，是一种遗传易感因子〔27〕。由此可见，有关ApoE基因多态性与缺血性脑卒中的关系的研究结果尚存在较大争论，这些研究结论之间的差异可能与研究方法、所选病例以及研究人群之间的差异有关。ApoE基因多态性与缺血性脑卒中关系并不确定，有待进一步深入研究。以ApoE基因多态性为手段研究该病有重要临床意义，通过探索不同ApoE亚型对脑梗死的关系，为脑梗死预防及治疗有重要的临床应用价值。
ApoE在缺血性脑卒中确切作用机制尚不十分清楚，可能与以下因素有关：① ApoE基因多态性影响血脂、脂蛋白水平从而促进动脉粥样硬化形成;② 通过刺激巨噬细胞、泡沫细胞的形成及作为脂蛋白的结构蛋白直接参与动脉粥样硬化斑块的形成;③ 影响神经细胞损伤后神经支配功能的恢复而导致神经功能障碍，不同表型的ApoE具有不同的效应，ε3可提高神经生长，而ε4降低神经生长;④ 在脑部，ApoE在突触可塑性有关的膜重建过程中发挥着胆固醇和磷脂调动和再配合的作用。因而目前有些学者认为ApoEε4基因携带者对脑血管疾病和痴呆有一种遗传易感性，即其脑组织可能因ApoEε4基因型发生改变而易于受到血管性及变性疾病的影响〔28〕。 参考文献
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基因多态性研究范文4
【关键词】 γ-干扰素； 白细胞介素-1受体拮抗； 基因多态性； 早产； 相关性
中图分类号 R725.6 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2014）13-0037-02
早产是指发生在28～37孕周时的分娩，会导致较高的围生儿发病率和病死率，对母婴的危害极大[1]。近些年来发现炎性细胞因子的大量增加会导致早产，是引发早产的主要因素之一。本研究选取2010年10月-2013年10月笔者所在医院收治的早产孕产妇60例进行研究，分析母体γ-干扰素（IFN-γ）与白细胞介素-1受体拮抗（IL-1RN）基因多态性与早产相关性。现将研究结果报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2010年10月-2013年10月笔者所在医院收治的60例早产孕产妇设为观察组，年龄（26.4±2.7）岁，孕龄（33.5±2.8）周。选取同期收治的足月孕产妇中50例设为对照组，年龄（27.4±2.3）岁，孕龄（38.5±1.7）周。两组产妇一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 方法
分娩前抽取两组研究对象的静脉血5 ml，置于含抗凝剂的试管中，摇匀后，留取 300 μl全血用于提取DNA，剩余离心后分装冻存，用于检测外周血IFN-γ与IL-1RN。利用PCR-RFLP技术检测两组的基因型频率。利用琼脂糖凝胶电泳IL-1RN基因多态性进行分析，并比较两组基因型频率和基因频率及相对危险度。并利用ELISA法，按照试剂盒步骤，测定外周血IFN-γ与IL-1RN水平。
1.3 统计学处理
所得数据采用SPSS 15.0统计学软件进行处理，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，计数资料采用字2检验。用直接计数法计算基因型和等位基因频率，应用拟合优度字2检验判断两组各基因型分布是否符合Hardy-Weinberg平衡；采用字2检验比较两组各基因型频率和等位基因频率分布有无差异，以P
2 结果
2.1 两组基因型频率分布情况分析
两组研究对象IFN-γ和IL-1RN各基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡（P>0.05），具有群体代表性。两组IFN-γ和IL-1RN基因型和等位基因频率分布比较差异有统计学意义（P
表1 基因型和等位基因频率分布情况比较 例（%）
组别 基因型
等位基因
GG GT TT G T
观察组（n=60） 49（81.7） 10（16.7） 1（1.7） 54（90.0） 6（10.0）
对照组（n=50） 31（62.0） 18（36.0） 1（2.0） 41（82.0） 9（18.0）
2.2 两组IFN-γ与IL-1RN水平分析
经检验，两组研究对象的IFN-γ与IL-1RN水平比较差异有统计学意义（P
表2 两组IFN-γ与IL-1RN水平比较 ng/L
组别 IFN-γ IL-1RN
观察组（n=60） 102.3±2.3 43.5±6.7
对照组（n=50） 57.3±2.9 181.736.2
3 讨论
在妊娠期若孕妇体内出现一些炎性变化，极有可能导致早产。早产的危害较多，因此临床要注意积极的分析研究导致早产的相关因素，以延长孕周，保证母婴健康[2]。
细胞因子是一类具有较高的生物活性的物质，是由大量的免疫细胞，如T细胞和单核巨噬细胞，以及和各种非免疫细胞，如表皮细胞和成纤维细胞等，在受到刺激的情况下合成、分泌的[3]。细胞因子调节网络与一些感染性疾病的发展与转归过程局有较为密切的联系。大量的细胞因子会参与到各种炎性反应中，受到外来各种抗原的刺激，巨噬细胞和受破坏的细胞便会产生大量的细胞因子，发生炎性反应。于是各种促炎因子便会大量分泌，并非特异的引起组织损伤，前列腺素也会增加，产生全身和局部的各种炎性效应。近些年来发现细胞因子相关基因的多态性和早产之间存在一定的关系，母亲和胎儿的基因均与早产之间具有较为密切的联系，但母亲的基因型在其中起关键作用。细胞因子不是导致早产的病因，但其相关基因的多态性日益受到人们的关注。从基因角度来看，早产是由多个基因位点的多组基因进行控制的，并极易受到环境等诸多因素的影响，是一种多基因的遗传性疾病。在细胞因子的作用下，妊娠组织会合成大量的花生四烯酸，各种炎性因子，如IL-1β等会对妊娠组织产生强烈的刺激，并合成炎性反应最终产物前列腺素E2。从而进一步激活子宫肌层，导致子宫出现剧烈的收缩，宫颈管成熟，宫口出现扩张，最终出现早产。
在IL-1基因家族中，一共包括三种相关基因，即IL-1A和IL-1B以及IL-1RN。其中IL-1RN负责编码IL-1ra（IL-1受体拮抗剂）。IL-1RN基因具有多态性，目前很多研究都发现，IL-1RN基因多态性和早产之间存在较为密切的关系[4]。干扰素（IFN）是一种分泌性蛋白，具有较强的抗病毒功能。其中，IFN-γ主要由活化的T细胞和NK细胞产生，具有较高的特异性，可以有效的激活巨噬细胞，并提高其活性，进而促进多种细胞表达。并促进B细胞的活化，从而产生各种抗体以及培类型转化。同时还可以在抗胞内病原体的感染中发挥出较大的作用。本研究结果即显示，观察组IFN-γ与IL-1RN水平存在较大的差异，即母体IFN-γ和IL-1RN基因多态性和早产之间具有较强的相关性，并引起IFN-γ与IL-1RN水平的较大变化。
综上所述，母体IFN-γ与IL-1RN基因多态性与早产之间具有较强的相关性。因此，在临床研究中，如果可以深入分析IFN-γ与IL-1RN相关多基因和早产之间的内在联系，将可以为早产的临床预测和诊治等提供重要的理论基础，具有十分重要的现实意义。另外还需要注意的是，早产是一个复杂的疾病过程，大量的免疫细胞及其产生的细胞因子均会参与到具体的发病过程中。而本研究中，整体样本量偏小，研究属于小样本研究，因此难免存在一定的局限和误差。因此，在今后的研究中，还需要进一步扩大样本量，并进行精细的分层，以更加深入的探究母体IFN-γ与IL-1RN基因多态性和早产之间的相关性。
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基因多态性研究范文5
关键词：非创伤性股骨头坏死；ApoA1基因-75bp/+83bp位点；中医体质；血瘀质
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.11.005
中图分类号：R272.968.3 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）11-0017-05
Abstract： Objective To study the correlation between nontraumatic osteonecrosis of femoral head （NONFH） and ApoA1 polymorphism of blood stasis type. Methods Totally 93 cases of NONFH were selected as the case group， and 83 healthy volunteers were randomly selected as the control group. With TCM constitution questionnaire survey， the case group was screened out 32 cases of blood stasis NONFH type and 61 cases of non blood stasis NONFH type. In the case group and control group， the subjects took blood samples 2 mL， extracted DNA for PCR amplification， PCR products for DNA sequencing. G994T PAF-AH and rs9658282 gene NOS1 site polymorphism were detected for tatistical analysis. Results -75G/A gene AA ApoA1 genotype （OR： 2.578； 95%CI： 1.174-5.663； P=0.018） and A allele （OR： 1.726； 95%CI： 1.121-2.658； P=0.013） may be one of the risk factors of NONFH. Conclusion -75G/A gene ApoA1 may be related to the pathogenesis of NONFH. There was no correlation between the ApoA1 gene polymorphism of -75G/A gene and the pathogenesis of blood stasis NONFH. There was no correlation between the ApoA1 gene polymorphism of +83C/T gene and the pathogenesis of blood stasis NONFH.
Key words： nontraumatic osteonecrosis of femoral head （NONFH）； ApoA1 gene-75bp/+83bp point； TCM constitutions； blood stasis
非创伤性股骨头坏死（nontraumatic osteonecrosis of femoral head，NONFH）发病机制目前尚不完全清楚，其治疗有一定的盲目性和经验性。对其病因分子生物学机制及药物防治早期NONFH的研究是当今骨科研究热点之一。中医药防治NONFH显示出了一定的优势，主要体现在中医辨证论治的治疗原则重视对个体体质状态的辨析，在治疗过程中发挥“因人制宜”的防治思想。本课题组前期研究显示，血瘀质是NONFH的高发体质类型之一。本研究通过检测血瘀质NONFH患者ApoA1基因多态性，探讨中医血瘀体质与NONFH的相关性，为通过体质辨别运用中医药干预NONFH提供新的思路和依据。
1 资料与方法
1.1 病例选择标准
NONFH诊断、纳入及排除标准依据2006年中华医学会骨科学分会关节外科学组提出的《股骨头坏死诊断与治疗的专家建议》[1]及《中药新药临床研究指导原则》[2]制定。
1.2 中医体质判定标准
依据《中医体质分类与判定》[3]制订“非创伤性股骨头坏死中医体质类型及相关基因多态性研究”调查表，中医体质分为平和质、气虚质、阳虚质、阴虚质、痰湿质、湿热质、血瘀质、气郁质、特禀质9种类型。
1.3 一般资料
应用临床流行病学方法，于2011年1月-2013年8月在甘肃省中医院骨科门诊、住院部对NONFH患者及非血缘关系健康志愿者进行问卷调查，以NONFH患者作为病例组，无血缘关系健康志愿者为对照组。病例组93例，其中血瘀质32例，非血瘀质61例；对照组83例，与病例组在居住地分布上基本一致。2组性别、年龄比较差异无统计学意义（P>0.05），体质指数比较差异有统计学意义（P
1.4 病例调查与样本采集
对调查者进行相关理论知识、调查方法及实验方法培训。因NONFH分布不集中，故指定专职调查者进行病例的收集，并采取空腹外周血2 mL，置入装有EDTA抗凝剂的无菌管中，混匀，-80 ℃冰箱保存。
1.5 试验材料
TIANamp Blood DNA Kit血液基因组DNA提取试剂盒（离心柱型），Premix Ex Taq Version2.0，TaKaRa宝生物工程（大连）有限公司。引物1（10 ?mol/L）、引物2（10 ?mol/L），TaKaRa宝生物工程（大连）有限公司合成。QuickCutTM MspI限制性内切酶试剂盒，TaKaRa宝生物工程（大连）有限公司。灭菌蒸馏水，总医院水处理系统，高压灭菌。
1.6 试验方法
1.6.1 DNA提取 采用TIANamp Blood DNA Kit血液基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）自血液中提取DNA。
1.6.2 PCR扩增 ApoA1基因-75bp/+83bp位点引物序列：上游5'-AGGGACAGAGCTGATCCTTGAACT CTTAAG-3，下游5'-TTAGGGGACACCTAGCCCTCA GGAAGAGCA-3，扩增片段长度433 bp。PCR反应体系：Premix Ex Taq 25 ?L，上游引物（10 ?mol/L）2 ?L，下游引物（10 ?mol/L）2 ?L，模板DNA 4 ?L，灭菌三蒸水17 ?L，总体积50 ?L。将上述体系加入0.5 mL Eppendorf离心管后瞬时离心，防止体系内液体附壁。ApoA1基因-75bp/+83bp位点的PCR反应条件：95 ℃预变性5 min；95 ℃变性45 s，62 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，40个循环；72 ℃延伸7 min；保存温度4 ℃。琼脂糖水平平板凝胶电泳装置进行DNA电泳验证，结果见图1。
1.6.3 PCR扩增产物的酶切 ApoA1基因-75bp、+83bp位点的PCR扩增产物在快速酶切反应体系中37 ℃温浴30 min。①ApoA1基因-75bp位点酶切产物检测：配制1.5%琼脂糖凝胶。取5 ?L DL500 DNA Marker加入1.5%琼脂糖凝胶第一个样品槽中；因10×QuickCut Green Buffer中含有电泳时所必需的色素等试剂，酶切产物可直接进行电泳检测，取6 ?L酶切产物依次按标记序号直接加样于琼脂糖凝胶板其他样品槽中，电泳槽内加入1×TBE稀释缓冲液至液面恰好没过胶板上表面。设定电压为125 V，电流保持在80 mA以上进行电泳分离。20 min后，当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿约2 cm，DL500 DNA Marker条带散开可辨时停止电泳。电泳结果使用YLNCCAP OF OLP凝胶成像系统进行观察并拍照。ApoA1基因-75bp位点G被A取代，MspI酶切位点丢失，-75bp处由于碱基的变异而形成GG（113bp及66bp片段）、GA（179bp、113bp及66bp片段）和AA（179bp片段）3种等位基因型。②ApoA1基因+83bp位点酶切产物检测：方法同上。ApoA1基因+83bp处C被T取代后，MspI酶切位点丢失，+83bp处的碱基变异形成CC（209bp及45bp片段）、CT（209bp、254bp及45bp片段）、TT（254bp片段）或GG、GA、AA 3种等位基因型。
1.7 统计学方法
采用SPSS18.0统计软件进行分析。首先通过χ2检验分析总体上各基因型及等位基因分布差异（P
2 结果
2.1 基因检测及分型结果
176例样品中，MspI酶切共检测出6种基因型：GG（113bp及66bp片段）、GA（179bp、113bp及66bp片段）、AA（179bp片段）、CC（209bp及45bp片段）、CT（209bp、254bp及45bp）、TT（254bp片段）。结果见图2。
2.2 ApoA1基因-75G/A位点多态性与血瘀质非创伤性股骨头坏死的关系
ApoA1基因-75G/A位点病例组与对照组总体上各基因型及等位基因分布差异有统计学意义（χ2=7.391，P
将病例组血瘀质、非血瘀质与对照组两两比较，其中血瘀质与对照组总体上各基因型及等位基因分布差异无统计学意义（χ2=5.434，P>0.05；χ2=2.657，P>0.05），非血瘀质与对照组总体上各基因型及等位基因分布差异无统计学意义（χ2=5.848，P>0.05；χ2=2.377，P>0.05），血瘀质与非血瘀质总体上各基因型及等位基因分布差异无统计学意义（χ2=0.664，P>0.05；χ2=0.100，P>0.05），见表3。提示ApoA1基因-75G/A位点多态性与血瘀质高发NONFH不具有相关性。
2.3 ApoA1基因+83C/T位点多态性与血瘀质非创伤性股骨头坏死的关系
ApoA1基因+83C/T位点病例组与对照组总体上各基因型及等位基因分布差异无统计学意义（χ2=1.168，P>0.05；χ2=0.650，P>0.05），见表4。提示ApoA1基因+83C/T位点基因多态性与NONFH发病无相关性。
将病例组血瘀质、非血瘀质与对照组两两比较，其中血瘀质与对照组总体上各基因型及等位基因分布差异无统计学意义（χ2=0.353，P>0.05；χ2=0.345，P>0.05），非血瘀质与对照组总体上各基因型及等位基因分布差异无统计学意义（χ2=1.138，P>0.05；χ2=0.504，P>0.05），血瘀质与非血瘀质总体上各基因型及等位基因分布差异无统计学意义（χ2=0.141，P>0.05；χ2=0.000，P>0.05），见表5。提示ApoA1基因+83C/T位点多态性与血瘀质高发NONFH不具有相关性。
3 讨论
我们前期研究结果显示，NONFH的病因病机以过量摄入激素类药物及酒精中毒引起脂代谢紊乱为主[4]，脂代谢紊乱是NONFH发病的重要机制之一，血脂的异常升高可引起一系列的血管病变，如血管栓塞（脂肪滴随血流流经较细的股骨头微小动脉时，形成栓塞，阻断微循环血供）[5]、血管损伤（血液中游离脂肪酸增多造成微血管内皮细胞功能障碍，主要包括活性氧的产生、凋亡的诱导以及内皮细胞依赖性血管舒张功能的异常）[6]、血管修复功能异常（游离脂肪酸破坏血管内皮细胞增值与凋亡的平衡，导致血管修复功能减弱），以及凝血异常（游离脂肪酸引起促凝血状态，纤维溶解活性降低，血小板的活性和功能增强）。由此可见，脂代谢紊乱引起血脂增高是NONFH血管病变的重要因素。ApoA1作为构成高密度脂蛋白的重要载脂蛋白，是脂质代谢过程的关键调节因子。如果ApoA1的结构或表达量发生变化，则可引起血脂代谢的紊乱，导致血中脂肪酸含量异常，进一步引起上述的血管病变。ApoA1基因结构的改变影响着ApoA1的分子结构、生成和向血液中释放的速率，进而影响血中ApoA1与HDL的水平。本研究选取ApoA1 -75G/A和+83C/T多态性位点，以血瘀质NONFH患者为研究对象，并将血瘀质NONFH、非血瘀质NONFH及对照组进行两两比较，探讨血瘀质高发NONFH与ApoA1 -75G/A和+83C/T的相关性。结果表明，AA基因型及A等位基因可能是发生NONFH的分子生物学机制之一。但并未发现血瘀质NONFH与ApoA1 -75G/A和+83C/T具有相关性。
ApoA1-75G/A多态性不仅可以破坏MspI内切酶识别位点，还能够改变GGGCCGG序列，后者是ApoA1基因转录的调控元件，具有激活转录的作用。当该序列发生变化时，可能会影响基因的转录和表达，从而影响ApoA1的合成。早期报道显示，ApoA1基因启动子-75bp A等位基因与血浆ApoA1和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c）水平密切相关，并认为是A碱基的置换促进了ApoA1基因的表达及合成[7]。本研究发现，A等位基因分布频率低可能与NONFH的发病相关。说明ApoA1表达量过低可能与本病的发生相关。如ApoA1的表达及合成减少，首先影响血浆中脂类的传输，其次影响激活卵磷脂胆固醇脂酰基转移酶（LCAT），阻碍成熟HDL的形成，从而增加肝外组织细胞及血浆中脂类的沉积，进一步使血脂升高并引起血管病变。主要可导致血管内皮细胞凋亡，内皮依赖性舒张功能下降并形成高凝血、低纤溶的病理状态，脂质过氧化形成xo-LDL沉积于血管局部，参与脂质斑块的形成，最终阻塞微血管，血管局部氧化性损伤及舒张性降低可阻断微血管血流，是微循环障碍的重要因素。而这些血管病变有可能是股骨头局部血运障碍的主要因素，这与本课题组前期研究NONFH发病的重要机制“脂代谢紊乱-血管病变”一致。本研究结果亦显示，ApoA1-75G/A位点及A等位基因与NONFH相关。所以推断ApoA1基因-75G/A位点A等位基因可能与NONFH发病具有相关性。也有报道显示，ApoA1的生成率在GG纯合子中显著高于GA杂合子，同时体外观察发现A等位基因伴有启动子活性降低，并且表达水平降低[8]。本研究未发现GG、GA基因型与NONFH具有相关性。而A等位基因对ApoA1表达的影响，本课题组会在后续试验中进一步研究，并扩充样本量，探讨NONFH高发体质类型的分子生物学机制。
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基因多态性研究范文6
【关键词】 基因;血压;高血压
association among ace, cyp11b2 and α-adducin gene polymorphisms with pulse pressure
lin hui?zhong,chen hui,luo jie?wei,wu xiao?ying,chen yan,li de?yu,chen xi?jun
chinese journal of cardiovascular rehabilitation medicine,2009,18(3):204
abstract：objective:to investigate the association among ace, cyp11b2 and α-adducin gene polymorphisms with pulse pressure(pp) in primary hypertensive and normotensive subjects.methods:the primary hypertensive subjects(1081 cases) and normotensive subjects(604 cases) were divided respectively into three groups: pp<40mmhg, 40-59mmhg and ≥60mmhg.binary stepwise logistic regression was used to analyze the relationship between gene polymorphisms and pp, which being considered confounding factors like age, sex， etc.results:binary logistic stepwise regression results demonstrated that ace-dd+ cyp11b2 -cc/tc+ α-adducin-tt genotype and age entered the model after adjusting confounding factors.ace-dd+cyp11b2-cc/tc+ α-adducin-tt genotype was significantly associated with high pulse pressure(≥60mmhg)in both primary hypertensive(or=3.318,p=0.005) and normotensive groups (or=4.556,p=0.044).conclusion:the risk of high pp increased in both primary hypertensive and normotensive subjects whom carried ace-dd, cyp11b2-tc/cc and α-adducin-tt genotypes at the same time, and this combination of genotype is the independent risk factor of high pp.
key words：genes;blood pressure;hypertension
近年来，脉压(pp)这一大动脉弹性的指标正成为心血管病学研究领域的一个重要热点，研究提示pp的大小可预测动脉粥样硬化所导致的心脑血管疾病的发生，已被用作预测心脑血管疾病发生率与病死率的重要指标之一[1～4]。pp作为心血管危险因素的预测指标很大程度上受年龄、性别影响，但是，却很少有研究解释基因在pp变化中的影响和机制。血管紧张素转换酶(ace)、醛固酮合成酶(cyp11b2)、α-内收蛋白(adducin)三个基因通过不同机制影响血容量、血压水平，进而可能引起血管结构，pp变化。基因的作用多为微效，故本研究选择上述三个基因，研究其联合作用与pp的相关性。
1 资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1 高血压组：2004年10月～2006年10月在福建省立医院门诊及住院确诊的符合条件的高血压患者，共1081例，其中男女比例为662/418,平均年龄(60.9±12.33)岁。入选标准:符合2004年《中国高血压防治指南》高血压诊断标准：未治疗前，非同日3次测量血压均值：收缩压(sbp)≥140mmhg和(或)舒张压(dbp)≥90mmhg 者;或者既往有高血压史，正在服用降压药者，虽血压<140/90mmhg，也可入选。排除标准：①继发性高血压;②能引起脉压增高的疾病及患严重心、脑、肾疾病，不能耐受检查者。
1.1.2 血压正常组：同期福建省立医院门诊健康查体者，共604例,其中男女比例342/262，平均年龄(59.7±12.70)岁。入选标准：符合2004年《中国高血压防治指南》sbp<140 mmhg，dbp<90mmhg者，常规化验无异常，无各类心血管、脑血管及肾、内分泌等方面疾病。
1.2 方法
1.2.1 所有研究对象均测量血压、身高、体重(体重指数ibm=体重kg/身高m2)，检测空腹甘油三酯(tg)、空腹胆固醇(tc)、空腹血糖(glu)、肌酐cr)、尿酸(ua)、心率，询问吸烟史、饮酒史，高血压病人还记录服用降压药情况、高血压病史。
1.2.2 血压测量:共3次，取其均数。pp=sbp-dbp;平均动脉压(map)=1/3sbp+2/3dbp。
1.2.3 抽取外周血2ml，提取基因组dna。
1.2.4 检测：①ace基因多态性检测：目的片段多聚酶链反应(pcr)扩增参照rigat[5]首先设计的引物序列，上游引物：5′ctggagaccactcc catcctttct 3′，下游引物：5′gatgtggccatcacatt cgtcagat 3′。 pcr产物1.5%琼脂糖凝胶电泳判定基因型;② cyp11b2基因多态性检测：pcr扩增引物自行设计，上游引物: 5′caggagga gaccccatgtgac 3′，下游引物: 5′cctccacc ctgttcagccc 3′。将pcr产物用haeⅲ内切酶进行酶切，酶切位点为:
ggccccgg 。酶切产物3%琼脂糖凝胶电泳判定基因型;③α-adducin 基因多态性检测：pcr扩增引物自行设计，上游引物：5′cagcgatgtggaggtt cctg 3′，下游引物: 5′tgggactgcttccattcggc 3。将pcr产物用bmgt120 内切酶进行酶切，酶切位点为:ggnccccngg。酶切产物3%琼脂糖凝胶电泳判定基因型。
1.3 统计方法
所有数据用spss 13.0进行统计分析。多因素分析用二项logistic回归。用直接计数法计算高血压组不同pp组和正常人的基因型频率，性别、hardy-weinberg遗传平衡和组间基因型频率，用x2检验，p<0.05为差异有显著性。
2 结 果
2.1 高血压组和血压正常组基本资料比较
结果显示：年龄(60.9±12.33)∶(59.70±12.70)、pp[(54.70±14.42)∶(43.40±11.73)mmhg]、平均动脉压[(106.6±11.55)∶(89.40±9.97)mmhg]、肌酐[(182.90±22.29)∶(76.20±16.14)μmol]在两组之间差异有显著性(p<0.05)，其余无显著性差异。
2.2 不同pp水平年龄、性别比较
在高血压组和血压正常组中,不同pp组年龄有差异(p<0.05),平均年龄随着pp组的增大而增大,其他指标分布在不同pp组间无差异。
2.3 经检验三种基因基因型分布频率符合hardy-weinberg遗传平衡(p>0.05)。
2.4 不同pp水平组基因频率分布分析
以pp 40mmhg、60mmhg为界限将研究对象分为3组。cyp11b2基因的cc型例数较少(高血压组75例，血压正常组33例)，故将cc型与tc型合并，代表携带有c等位基因者，以减少因例数太少引起的误差。
2.4.1 高血压组：采用卡方检验比较不同pp水平组间基因型组合分布频率。ace-dd+cyp-tc/cc +add-tt型在各pp组分布频率有显著性差异，在≥60mmhg组分布频率最高(4.9%)，经 分割，与其他两组比较，差别有显著性(p=0.001)。
2.4.2 血压正常组：采用卡方检验比较不同pp水平组间基因型组合分布频率。ace-dd+ cyp-tc/cc +add-tt型在各pp组分布频率有显著性差异，其中在≥60mmhg组分布频率最高(8.2%)，经 分割，与其他两组比较，差别有显著性(p=0.002)。
2.5 二项logistic回归
将高血压组和血压正常组按pp是否>60 mmhg分别分为两组进行二项logistic回归分析。
2.5.1 高血压组：将可能影响pp的因素：性别、年龄、体重指数、吸烟(是与否)、饮酒(是与否)、用降压药(是与否)、高血压史(年)、tg、tc、glu水平、cr、ua、心率、map，三种基因型及其组合引入方程，采用逐步logistic回归方法，结果显示：最后进入方程的因素为年龄、map、ace-dd+ cyp-tc/cc+add-tt型。提示在调整了年龄和map因素后，同时携带三种基因突变型(ace-dd+ cyp-tc/cc+ add-tt)者仍与高脉压(≥60mmh)显著相关，是pp增高的独立危险因素。调整后的比值比(or)值为3.318 (95%ci: 1.432-7.684)，即同时具有ace基因dd型、cyp11b2基因tc/cc型和α-adducin基因tt型者高脉压的风险是其他基因型组合者的3.318倍(见表1)。
2.5.2 血压正常组：影响因素无高血压史、降压药，其余同上，结果显示：最后进入方程的因素为年龄、性别、ace-dd+cyp-tc/cc+add-tt型。提示在血压正常组中调整了年龄和性别因素后，同时携带三种基因突变型(ace-dd+ cyp-tc/cc+ add-tt)者也仍与高脉压显著相关，与高血压组结果一致，or值为4.556(95%ci:1.042-19.929)，即同时具有ace基因dd型、cyp11b2基因tc/cc型和α-adducin基因tt型者高脉压的风险是其他基因型组合者的4.556倍(见表1)。表1 高血压组与血压正常组logistic回归分析(略)
3 讨 论
影响pp的因素很多，但关于基因与pp关系的研究，目前国内、外还比较少。
cwynar m研究了642例西方白人，将α-adducin与γ-adducin协同分析，发现α-adducin t等位基因协同γ-adducin-gg型者周围与中心pp要高于协同γ-adducin-aa型者[6]。wang jg 分析了ace、cyp11b2、α-adducin三个基因协同作用与中国汉族人血压关系后得出，同时具有ace-dd型和cyp11b2-cc型或者同时具有ace-dd型和α-adducin-tt型者的sbp较高[7]。这些与本研究的结果部分相同。单基因和两基因型组合均未进入方程，此结果亦提示基因的联合作用能增大对pp的影响。
pp取决于心搏量、左心室射血速率、大动脉弹性和外周血管压力反射波。通常情况下，动脉顺应性是决定pp大小的主要因素。以往研究多得出dd型人群与循环及组织高ace水平有关[8，9]。dd型人的血管长期暴露在循环及局部组织高水平ace及ang ⅱ环境下，血管内皮容易受损，致其通透性增加，低密度脂蛋白氧化修饰加速，并易于沉积于血管内皮细胞，导致动脉粥样硬化形成。另有研究表明angⅱ可使血管内皮增生,血管壁增厚[10]，并且醛固酮的分泌也可使血管收缩和血管平滑肌细胞增殖，导致动脉管壁增厚，变硬，从而引起动脉顺应性减退。目前的研究多显示cyp11b2的c等位基因多与高醛固酮水平相关[11～13]。醛固酮的过度分泌可使水、钠潴留，血容量增加，外周动脉内压力增加，动脉内皮受机械剪应力增加、内皮功能减退。另外，醛固酮还可以改变血管平滑肌的张力，通过基因和非基因效应促使血管平滑肌肥大、增殖，使管壁增厚，从而降低动脉的顺应性。α-adducin氨基酸替换( gly trp) 的结果可能影响内收蛋白组装或其稳定性,从而改变了细胞膜骨架结构和钠离子跨膜转运,引起近端肾小管钠离子重吸收增加,水钠潴留,循环血容量增加,表现为血压水平升高。长期发展可导致小动脉痉挛、管壁剪切应力增加、缺氧、内皮功能减退,从而使血浆纤维蛋白、脂质渗入内皮下间隙,产生玻璃样变性;还可使细胞外基质(包括胶原纤维) 增多,排列紊乱。最后导致管壁增厚、变硬,动脉顺应性减低，引起pp增大。上述三个基因在机制上可有互相协同的作用。
本研究结果显示单基因分析与pp高低无显著性相关，在将基因型联合分析后，显示出它与pp高低的相关性，这与基因的协同作用有关。本研究结果说明今后对于基因与pp的研究应多着重于联合基因的分析，以利于pp水平的预测及预防。
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