作者：刘 霞 胡兰贵 冯玛莉 席啸虎 张小慧 仝立国 单位：山西省中医药研究院
提取工艺考察及结果
以出膏率为评价指标，以加水倍数、浸泡时间、煎煮时间、煎煮次数为4因素。使用L9(34)正交试验优化4种不同辅料膏方的最佳提取工艺参数，结果见表1[3]。
辅料前处理
红糖：将红糖放入锅内加热炒之，用锅铲不断搅拌，以防滞底焦枯，待糖全部熔化呈老黄色时直接用来收膏，或继续加入适量的水沸腾后再收膏。胶类：阿胶、鹿角胶、龟甲胶等胶在加入膏前先打碎，加入适量黄酒浸泡过夜，另炖使熔化。
收膏工艺考察
1收膏工艺过程按照星点设计的方案收膏，分别取各处方药材20份，每份为15日汤药方剂量，按照优选的提取工艺提取，滤过，得到提取液。提取液于电磁灶上加热，随时除去浮沫，待药汁稍转浓时，如有需要加入人参生药细粉的在此时加入，搅匀，继续加热浓缩至设定的相对密度，即得“清膏”。清膏用文火加热，把按设定要求前处理好的辅料加入清膏内，不断搅拌，待浓缩至设定的相对密度，停火，收膏完成[4]。
2相对密度测定[1]本实验所测的相对密度是在清膏浓缩即成和膏方即将出锅时进行测试。取5～8g的清膏或膏滋，精密称定，精密加入两倍量的新鲜蒸馏水，搅匀，作为供试液，测定相对密度。
3不溶物检查[1]取不同辅料的膏方各5g，加热水200mL，搅拌使之溶化，放置3min后观察，结果均无焦屑等异物发现。
4薄层色谱检测清暑益气膏检测黄芪、人参、葛根；附桂六味鹿角膏检测附子、人参；镇肝熄风膏检测白芍；芪脉地黄膏检测黄芪、人参、黄连。药材TLC定性检测均按照《中国药典》2010年版方法。
5定量测定清暑益气膏检测葛根素；附桂六味鹿角膏检测桂皮醛；镇肝熄风膏检测芍药苷；芪脉地黄膏检测黄芪甲苷；试验结果用转移率表示。转移率＝膏方所检测药材有效成分质量/相同量单味药材有效成分质量（1）清暑益气膏中葛根素检测：①色谱条件：色谱柱为AgilentZorbaxSB-C18柱（250mm×4.6mm，5μm），柱温40℃，流动相为甲醇-水（25∶75），检测波长250nm，体积流量1.0mL/min，进样量10μL。②对照品溶液制备：取葛根素对照品用30%乙醇制成含葛根素55.0μg/mL的溶液。③供试品溶液制备：取本品约2g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入30%乙醇25mL，密塞，称定质量，超声处理45min，放冷，再称定质量，用30%乙醇补足减失的质量，滤过，取续滤液，即得。（2）附桂六味鹿角膏中桂皮醛检测：①色谱条件：色谱柱同上，柱温为30℃，流动相为乙腈-0.1%磷酸（35∶65），检测波长285nm，体积流量为1.0mL/min，进样量10μL。②对照品溶液制备：取桂皮醛对照品用甲醇制成10μg/mL的溶液。③供试品溶液制备：取本品约10g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定质量，加热回流30min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。（3）镇肝熄风膏检测芍药苷①色谱条件：色谱柱同上，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86），检测波长230nm；体积流量1.0mL/min，柱温25℃，进样量10μL。②对照品溶液制备：取芍药苷对照品加甲醇制成0.435mg/mL的溶液。③供试品溶液制备：称取3g镇肝熄风膏，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，加入50%乙醇25mL，称定质量，超声处理30min，冷却，用稀乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜滤过，即得。（4）芪脉地黄膏检测黄芪甲苷①色谱条件：色谱柱同上，流动相为乙腈-水溶液（30∶70），检测波长为200nm；流速为1.0mL/min，柱温20℃，进样量10μL。②对照品溶液制备：取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成76.0μg/mL的溶液。③供试品溶液制备：称取30g芪脉地黄膏，精密称定，置索氏提取器，加入甲醇150mL，加热回流至提取物无色，滤过，浓缩，残渣加水25mL，用乙醚洗2次，再用水饱和正丁醇提取3次，合并正丁醇部位，用氨试液洗2次，正丁醇部位蒸干，用5mL甲醇溶解，定容，即得。
多指标综合评分法
膏方成型质量指标有其客观评价的相对经验标准，依据这一标准及各指标的控制要求和经验值，权衡其对膏方成型性的贡献，对指标进行评分，越大越好者直接评分，越小越好者取倒数作为评分，适宜范围好者越接近范围评分越高，以使各指标评分结果越高表示成型性越好[5]。多指标综合评分法的内容见表2。
星点设计优化收膏工艺
试验设计根据预试验结果，选择辅料的使用量（A）、清膏相对密度（B）和成品膏的相对密度（C）为自变量，因素水平见表3～6。星点试验设计以红糖为辅料的膏方为例，其他辅料的星点设计与此类同，不再赘述。按照星点试验设计收膏。以膏方的性状特征、服药量、药材检出情况为指标，每个指标的评分均标准化为0～1之间的“归一值（OD）”，各指标OD按下式计算几何平均数，得总评OD。结果见表7。总评OD＝(d1d2……dk)1/k（k为指标数）。对取值越小越好的指标和取值越大越好的指标，分别采用Hassan方法进行数学转换求“归一值”dmin和dmax。
模型拟合根据结果，用SPSS10统计数据，以总评OD值为因变量对各因素进行多元线性回归和二项式方程拟合，模型的好坏通过相关系数（r）进行判断。拟合后所得多元线性拟合方程Y＝0.291＋0.021X1＋0.008X2－0.010X3（r＝0.072），二项式拟合方程Y＝417.697＋13151X1＋220.265X2＋41557X3－260.884X1X1－10701X2X2－167.772X3X3－8.571X1X2－1442X1X3＋25.597X2X3（r＝0.998）。多元线性回归拟合方程的r较低，表示自变量与因变量之间线性相关性较差，所以不宜用线性模型。而多元二项式回归方程的r较高，拟合度高，预测性较好，故选择二项式拟合模型为最佳模型。6.3效应面优化根据所拟合的二项式方程，应用Origin8.0统计软件绘制三维效应面，从中筛选出红糖辅料膏方的较佳工艺水平。同法得出其他3种辅料膏方制备的最佳工艺，结果见表8。
最佳工艺验证
文献报道，膏方处方中每味药的用量一般按每天汤药方剂量的1/2～1/3为宜[6]。分别取各处方药材3份，每份为15日汤药方剂量（膏方30日服用量），按照优选的最佳制备工艺条件重复3次，计算偏差[偏差＝(预测值－实测值)/预测值]，偏差均小于3%。经星点设计优选出的4种不同辅料的膏方均具有适宜的流动性和黏度，具光泽，口感润滑，味甜或微苦，适宜直接口服或用热水融化后再服用，且水溶解性较好。膏方服用质量及服药体积均适宜，结果见表9。主要药味定性检测均符合《中国药典》2010年版规定。#p#分页标题#e#
讨论
1辅料的选择和使用红糖为辅料时，膏方黏度较小，且受红糖用量及膏方相对密度的影响较小，收膏程度主要受口感和成膏率（影响每日服药量）的影响。阿胶为辅料时，膏方黏度较大，溶解速度较慢，且受阿胶用量和膏方相对密度的影响较大，受温度影响较敏感，低温时容易结冻；因此，收膏时需要综合考虑阿胶的药用剂量、膏方的相对密度、成膏率、温度等因素。鹿角胶和龟甲胶为辅料时，膏方黏度略显黏稠，但不及阿胶，且受温度影响略显小，低温不结冻或结冻后在室温下恢复流动性较快，收膏程度主要受辅料用量和成膏率的影响。
2膏方制备过程中控制指标的选择实验中发现，在保证膏方性状稳定的前提下，辅料使用量越多，膏方相对密度应越小，成膏率越大，病人每日服用量也应越大。因此，膏方制备应综合考虑膏方性状和成膏率两个因素，在辅料药用剂量范围内优选辅料最佳使用量。
3膏方制备过程中影响因素的选择课题组前期研究发现，膏方的含水量、动力黏度等数据波动较大，受处方药味数量、组成及性质等影响较大，故没列入正文。本实验选择数据相对稳定并且容易随时检测的相对密度这一参数来控制收膏的火候，结果较好。