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免疫学防治范文1
东北师范大学人文学院毕业生就业指导中心相关教师认为，招聘面试时需注意：
一是个人信息要保护。
毕业生在填写个人 简历 时，不要在规定的表单以外的地方填写自己的联系方式，这样会导致不安全情况发生，其中尤其建议求职者只留本人联系电话并保持畅通，若非必要最好不留家庭电话。
二是面试地点要留意。
大学生在面试时一定要认真确认面试地点，正规单位招聘一般会将招聘地点设在单位的办公室、会议室，一些以租用房间作为应聘地点的单位要警惕。不要轻信招聘者在指定的街道或酒店接待，应该自己主动找到招聘单位所在办公地址或办事处。
三是遭遇“强制性”体检时要注意。
如遇到单位要求必须体检才能上岗的，提醒求职者注意：单位不应当指定某医院，而此类医院也不应该是私立医院或者诊所。如遇到此类情况，请不要相信，发现被骗应及时报警。
四是非法费用不要交。
任何招聘单位，以任何名义，向求职者收取抵押金、服装费、产品押金、风险金、报名费、 培训 费等行为都属非法行为。招聘单位 培训 本单位的职工，也不准收取 培训 费。求职者遇到此类情况，要坚持拒交，并向招聘单位所在地区举报，以确保自己的合法权益不受侵害。
五是不要轻信外地上岗的承诺。
对外地企业或某外地分公司、分厂、办事处的高薪招聘，不论其待遇多么好，求职者千万要保持清醒的头脑和高度的警惕，不要轻信他的口头许诺。一是不去，二是到劳动保障部门咨询，并办理相关的手续，否则会吃大亏，悔之晚矣。
免疫学防治范文2
比如说地理、历史、语文课件中，我们可以选择一些很好看的风景画，还可以插入一些有关的歌曲音乐、朗诵等，数学却不行，这样反而会分散学生的注意力；比如说输入一个分数或数学表达式很难，要在Word、PowerPoint、WPS、Flash、几何画板间来回复制粘贴，复制过来的内容都是图片形式的，排版时相当麻烦，一不小心就会串行和错位。
再比如说在几何画板中画一些数学图形很容易，也可做出一些有关点的轨迹方面的动画，有些光盘上已经有一些供我们参考和使用的几何画板文件，直接拿来用就可以，但PowerPoint中就不能直接插入几何画板文件，在Flash中也不能直接插入几何画板文件，只能利用超链接才能将它们整合。当然，在PowerPoint中插入Flash播放文件是可以的，在几何画板中插入Flash影片也是可以的。
一、图片和声音的处理
1、图片可加格式中的背景图案，如填充效果中的单色、双色、预设、纹理、图案等，或与本课有关的图片，但不能太显眼，不能过多地吸引学生的注意力。
2、自己通过画图程序制作一些有关的图片，既可以作背景也可以做适当的修饰。图片不能太多，以免影响学生的注意力。
3、在超链接和作按钮时，可加入一些简短的声音，可适当增加趣味性。另外，导入Flash播放文件时，Flash文件可自带一些声音。
二、PowerPoint文件、Flash文件、几何画板文件之间的整合
我们知道，制作课件时，PowerPoint就是一个最基本、最简单、很实用的应用软件。在这个应用程序中，可通过插入文本框的方式输入大量的文字内容，从而体现本节课的教学内容。对某个对象在播放过程中可利用自定义动画或预设动画适当加入一些简单动画和配上一部分声音，通过修饰就可达到一个很好的效果。但有些复杂的动画效果，如光线通过凸透镜形成聚焦效果的动画，太阳、地球、月亮的公转和自转的动画等，就没办法在PowerPoint中实现，而这种效果可以在Flash中轻而易举地完成。如果把Flash播放文件导入到PowerPoint文件中，补充了PowerPoint动画的单调性，就会使课件更加丰富、直观、生动、有效，为多媒体课起到良好的作用。在PowerPoint中如何插入Flash影片？在下面做详细的介绍。Flash文件中，作一些复杂的动画较好，但制作起来难度较大。像一些简单的动画如从左侧缓慢移入、飞入等，就没有必要在Flash中做。
几何画板是专门为数学课开发的一个应用软件，通过它可以做出一些数学方面的图形、点的轨迹动画等，数学公式表达式都可以在几何画板中实现，输入起来也比较方便，而其它软件中就很难。可利用几何画板文件将有关的数学内容做好，包括数学图形、表达式、轨迹动画等。 有些光盘上已经有一些供我们参考和使用的几何画板文件，直接拿来用就可以。但必须注意，在使用的计算机上必须装有几何画板的应用软件程序，即可执行文件。
一般的光盘上只有现成的几何画板文件，但没有应用软件程序。几何画板的应用程序软件可从因特网上下载，方法是在百度搜索中输入“几何画板”，搜索到的“教学软件库”中选择“sketch 4.03”下载，也可直接访问网址：bj101zx.com/software/software.htm。
因此，我们可选择PowerPoint软件作课件，需要时，在PowerPoint中插入Flash影片。有些纯数学方面的图形、轨迹动画都可做成几何画板文件，通过超链接的方法将几何画板文件链接到PowerPoint中来。
三、在PowerPoint中插入Flash影片的方法
第一步：打开PowerPoint应用程序。
第二步：选择菜单栏中的“视图”菜单，在下拉菜单中选择“工具栏”，继续在“工具栏”的下拉菜单中选择“控件工具箱”。
第三步：单击“控件工具箱”中的
工具，在下拉菜单中选择“Shockwave Flash Object”。
第四步：在PowerPoint的工作区内，按住鼠标左键拖动，直到屏幕上出现一个合适大小的
图形为止。
第五步：在
上单击右键选择属性，这时将弹出一个属性的对话框，对话框中左侧名称“movie”右边有一个空的正文框，输入要导入的Flash播放文件名称全称（包括扩展名）。
第六步：通过幻灯片放映中的观看放映可以看到效果。
要注意的几个关键问题：
1、正在使用的PowerPoint文件和要插入的Flash播放文件应放在同一目录下，即在同一位置。如：在D盘的名为“我的文件”的文件夹下有两个文件——《光线的聚焦.ppt》和《聚焦效果.swf》，在PowerPoint文件《光线的聚焦.ppt》中就可插入《聚焦效果.swf》文件。
免疫学防治范文3
关键词 免疫学 课堂教学 教学方法
随着现代免疫学的发展，免疫学不仅涉及医学各个领域，且逐步与理、工、农等学科相互渗透，并已成为生物类专业的学科基础课。但是免疫学的理论性很强，内容深奥抽象，免疫应答过程复杂，且知识点繁多，加上高职学生基础相对较薄弱，学习的主动性和毅力不够，初次接触免疫学知识反映课程难度较大，甚至逐渐失去对该门课程的学习兴趣。因此，如何帮助学生提高他们对免疫学的学习兴趣，从而使其更好的掌握免疫学内容，一直是提高免疫学教学质量的一个关键问题。笔者结合三年多的教学实践，总结了如下方法：
1优化教学内容
免疫学作为医学和生物学的基础学科之一，已涌现出了一些内容丰富、语言精炼的优秀教材。然而，目前大多数免疫学教材的编写模式都已基本趋于一致，适用于高职院校生物类专业的非医类免疫学教材不多。结合学生的具体情况，笔者在教学过程中选择华中师范大学出版的《免疫学》（非医类）作为本校生物技术及应用专业和微生物技术及应用专业免疫学理论教材。该教材涵盖了免疫学所涉及的免疫学基础、免疫学病理和免疫学应用的全部教学内容，语言简明扼要，论述深入浅出，更符合本专业学生的学习特点。通过对教材内容进行严格细致的剖析，结合生物专业其他课程的特点后对授课内容进行优化。比如对于偏向于医学生的免疫学病理板块内容则适当简化，通过给学生布置课后思考题并结合课堂讨论的方式完成相关内容的学习和考核。对于在生物专业其他可能涉及到的内容，如细胞凋亡与免疫则安排学生自学，该类知识点既要求学生有细胞生物学等生物学相关课程的扎实基础，同时还要对免疫系统和免疫应答的过程有全局意识，对于初次接触免疫学的高职学生来说，单纯在课堂上讲授很难达到效果。而对于免疫学基础（包括免疫细胞和免疫分子等）和免疫学应用（免疫学检测）等与生命科学密切相关的知识点进行详细讲述。尽可能的用简单的语言帮助学生掌握免疫学的基本概念，熟悉免疫系统的各个组分及特性，理解免疫应答的基本过程。
2理论联系实际
免疫学是生物类的基础课程，其学习内容与人类健康和许多临床现象，在讲课时可以联系实际生活，用学生感兴趣的事物或话题来吸引其注意力，既可调动学生学习的积极性，又将理论的知识生动化。例如，学生对于不同血型和献血的基本原则都很熟悉，在讲到“同种异型抗原”这个概念时以ABO血型作为例子进行说明：虽然同为人类，不同血型的个体之间进行输血会出现溶血反应，这种溶血反应实际上是受血个体对供血者的红细胞的一N免疫反应，因为供血者红细胞表面所含的决定血型的蛋白与受血者的不同，为此受血者的免疫系统将外来的红细胞表面蛋白识别为”异己”即抗原。这里决定血型的红细胞表面蛋白在不同个体（人）之间不相同，而这些血型蛋白正是“同种异型抗原”的典型代表。不仅让学生掌握了免疫学相关内容，同时还帮助他们理解常见临床现象的本质。类似的例子还有伤口为什么会出现红肿热痛？年老和年幼者为什么易患病？为什么兄弟姊妹间进行器官移植配型的成功率更高？等等。在教学过程中将这些临床现象与免疫学知识点联系起来，从现象到本质，能够加深学生对理论内容的印象，提高学生的学习兴趣，增强教学效果。
3巧用比喻联想
免疫学是一门理论性很强的基础学科，且概念抽象难懂，在进行免疫学教学时，如果照本宣科，课堂气氛往往比较沉闷，且学生往往由于难以理解授课内容而逐渐失去学习的积极性。此时，在教学过程中以恰当而形象的比喻来解释专业术语和免疫现象，对提高学生的记忆效率和学习兴趣有很大的帮助。比如，在绪论讲解免疫的概念时，将抗原比喻为一个国家的敌对势力，那么看不见、摸不到的免疫系统比喻为国家机器，学生则能很好理解免疫应答就类似于革命战争，而生物学效应就是战争结局。这样的比喻不仅帮助学生快速理解了现代免疫学中的免疫概念，增强了绪论课的教学效果，并且对学生理解后期的免疫器官和免疫分子也有帮助作用。学生在后期相关知识点的学习中也可以触类旁通，例如在讲授多种免疫分子的时候，学生提出分泌型抗体就像是士兵（免疫细胞）掷出的手榴弹，而一些膜表面分子就类似于免疫细胞手上的各种武器，发挥着不同的作用。类似的比喻还有很多，例如将MHC分子拟人化，NHC-II类分子的两条肽链就类似于人的两条腿，站在细胞膜上（泥潭）上比较稳固，但MHC-I类分子只有一条腿（肽链），为了站的更稳，MHC-I类分子则需要找一个帮手即%[2微球蛋白的帮助；将五种免疫球蛋白比喻为五兄弟；将T淋巴细胞和B淋巴细胞的相互作用过程想象成2个人在进行信息交流和互动等等。通过类似的直观比喻，不仅可以吸引学生的注意力，更帮助学生更好的理解和记忆。
总之，免疫学作为生物专业的专业基础课，在具体教学过程中，教师应根据学科发展和学生特点，因材施教。教师应以充分调动学生的学习积极性为核心目的，通过多种教学手段，提高教学质量。
参考文献
免疫学防治范文4
【关键词】二胎；产科；继续医学教育；课程
我国乡镇人口众多，基层医院产科医生作为卫生计生管理队伍的重要力量，直接担负着母婴健康的重任[1]。随着2016年我国计划生育政策重大调整，全面放开二胎，一方面满足了很多家庭对二胎的需求，另一方面也导致高龄产妇比例徒然增加[2]。遗传性疾病、妊娠期代谢性疾病等发病率及瘢痕子宫、子宫破裂等高危妊娠风险也随之增高[3]，这都对产科医护人员构成了新的挑战。目前，基层医院产科业务培训内容比较单一，病例比较局限，单位的业务学习已经不能满足基层产科医生的需求。因此，本文旨在分析基层产科医生对二胎全面开放政策下产科继续医学教育课程设置的需求，从实际出发，设置更适合基层产科医生的继续教育培训课程，开展继续教育工作，助力国家全面开放二胎政策，为母婴安全保驾护航。
1对象与方法
1.1研究对象
本研究选择大型妇产科专科医院为调研现场。该院为三级甲等公立妇产科专科医院，开设了全国首家“再生育”咨询门诊，同时也开设各类高危妊娠专科门诊。医院国家级继续教育培训项目均以学科带头人、妇产科专家为师资，2010年至今已累计通过继续医学教育项目培训基层医生约25870人次。本研究选择该院2016年1—12月的继教培训学员进行问卷调查，发放问卷200份，回收189份，有效问卷179份，回收率为89.5%。
1.2研究方法
自行设计培训学员调查问卷，内容包括社会人口学特征、课程内容设置及组织形式需求等内容，采用5级Likert量表法，每个条目均分为很需要、较需要、一般、较不需要、完全不需要5个级别。医院产科专家参与设计完善问卷，保证问卷内容效度。对20名医院产科医生进行预调查，检定问卷的Alpha信度系数为0.82，表示问卷可信度较高。正式调查时采用现场问卷调查法，根据对各项课程内容“很需要”和“较需要”的占比之和反映课程内容的需求程度。
2结果与分析
2.1调查对象的一般情况
调查对象共179人，年龄分布在24～52岁，平均年龄（40.3±2.2）岁，女性152人，占84.9%。主要为本科以上学历（169人，占94.4%）、中级以上职称（162人，占90.5%）、主要来自综合医院（102人，占57%）、二级医院（96人，占53.6%）。
2.2课程内容需求
需求最大的三项课程内容依次为高龄再生育孕前评估（153人，85.4%）、高龄再生育辅助生育技术选择（132人，73.7%）、高龄再生育的围孕产期管理（151人，84.3%），随之依次为高龄再生育分娩方式的选择、高龄再生育孕妇妊娠期糖尿病筛查、高龄再生育孕妇合并妇科疾病的处理。有30人回答“希望增加的课程内容”，其中9人（30%）认为需要增加“高龄再生育产后避孕方式选择”课程。
2.3课程组织形式需求
需求从大到小依次为与产科专家进行互动式的经验交流座谈（172人，96%）、由产科专家利用多媒体工具进行课程讲授（169人，94.4%）、到相关临床科室或职能处室现场参观（155人，86.6%）。
2.4现场参观需求
需求从大到小依次是制度、流程、规范文件（160人，89.3%），岗位人员配置（155人，86.6%），病案信息系统（151人，84.3%）。
3讨论
3.1大型公立妇产科专科医院是培训基层医院产科医生的有效平台
基层产科医生主动到大型妇产科专科医院学习产科经验的强大需求、医院开展继续医学教育培训课程的实践都表明，以大型公立妇产科专科医院为平台和培训基地，对基层进行产科医疗知识与经验的辐射和输出，已成为产科医生继续教育培训的探索趋势[4]。我国已经执行了近40年的《中华人民共和国人口与计划生育法》，即俗称的“独生子女”计划生育政策，基层医院的产科医生大部分对高龄再生育人群的孕产期管理缺乏经验[5]，到国内著名的大型公立妇产科专科医院学习先进的产科管理理念、诊疗经验是最有效的学习途径[6]。
3.2课后建立长期联系并及时反馈授课效果
基层医院产科医生由于各方面的限制不能参加长期培训，但短期的学习并不能完全满足基层医院产科医生的需求。本次调研发现基层产科医生除了参加短期授课外，还希望与大型公立妇产科专科医院建立长期联系，从而进一步开展产科业务的学习交流[7]。对于大型公立妇产科专科医院而言，充分发挥在医院产科管理、继续教育方面的资源优势，能通过电子邮件、即时通讯交流平台等方式对学员进行长效管理，可跟踪反馈评价培训效果[8]，针对每项课程对学员进行反馈意见调查，将学员对各门课程和教师的评价结果反馈给相应教师，也可改进课程设置，提高培训的质量。
参考文献
[1]顾梦薇，孙丽洲.关于单独二胎政策出台的思考[J].南京医科大学学报：社会科学版，2014，14（2）：109-111.
[2]杨澜帆.高龄妇女再生育的内科风险[J].中国计划生育和妇产科，2014，6（7）：1-6.
[3]汤雪娟，李雁霞，赵蔚，等.嘉兴市医疗保健机构应对单独二胎生育高峰的产科服务能力调查[J].上海预防医学，2016，28（8）：582-584.
[4]佟赤，马亚楠，闻德亮，等．基于某医科大学附属医院的继续医学教育满意度评价的调查分析[J]．中国卫生统计，2012，29（2）：262-263．
[5]石一复.开放“二胎”政策与妇产科的重任[J].中国计划生育和妇产科，2014，6（2）：3-5.
[6]乔娟，钟梅，汪丽萍，等.广东省妇产科医生静脉血栓栓塞症知识调查[J].广东医学，2013，34（19）：3015-3017.
[7]王沁萍，曲成毅．远程医学教育的现状与进展[J]．中国医学教育技术，2012，26（2）：119-123．
免疫学防治范文5
【摘要】 目的: 以流式细胞术(FCM)检测马传染性贫血病毒（EIAV）抗原特异性的T淋巴细胞增殖。方法: 将新鲜分离的马外周血单个核细胞（PBMC）进行CFSE 染色， 经纯化病毒体外刺激并培养5 d后， 进行T淋巴细胞亚型标记， 检测特异性增殖的CD4+和CD8+细胞比例。结果: 对马PBMC的染色浓度、 特异性刺激物的种类及反应时间等条件进行了优化。可对马外周血抗原特异性T淋巴细胞不同亚型的增殖水平进行定量评价 。结论: FCM检测方法为研究马传染性贫血病毒疫苗免疫保护机制提供了一个有效的手段; 该法也可以为其他病毒的免疫学研究提供借鉴。
【关键词】 T细胞增殖; CFSE; 马传染性贫血病毒
T淋巴细胞对抗原、 有丝分裂原(mitogen)和T淋巴细胞抗受体（antirecepter）抗体的反应能力是衡量机体免疫状况和淋巴细胞功能状态的重要指标。体外检测细胞分裂最常用的方法是MTT比色法和3HDNA掺入法， 这两种方法虽然能够提示细胞群体的分裂水平， 却不能反映单个细胞的分裂状况， 还存在放射性危害等局限性［1， 2］。随着流式细胞术（FCM）的发展， 多种荧光染料应用于细胞增殖的检测中， 其中以CFSE的应用最为广泛。CFSE为一种活体染料（羧甲基荧光素乙酰乙酸）， 可自发地与细胞表面或细胞内蛋白成分中的赖氨酸侧链以及其他氨基酸的侧链氨基形成稳定不可逆结合。当细胞分裂时， 其标记物可平均分配到两个子代细胞中， 具有荧光系列减半的特征， 可以从单细胞水平上检测淋巴细胞的增殖能力。
CFSE可以较稳定的存在于细胞内长达数月之久， 并且不会改变细胞表面抗原， 影响细胞功能， 已经广泛应用于体内和体外细胞的示踪试验， 并取得了较好效果［3］。另外， CFSE可以联合其他荧光染料对T淋巴细胞不同亚型进行评价， 为机体免疫状态提供更全面的信息。
我国自主研制的马传贫弱毒疫苗是惟一大规模应用的慢病毒疫苗， 对其免疫保护机制的探讨将对研究慢病毒免疫提供重要的参考。抗原诱导T淋巴细胞的克隆扩增水平是反映机体免疫状态的重要指标之一［4， 5］。因此， 建立一种有效的， 稳定的检测细胞增殖的方法对机体免疫状态的衡量及疫苗的免疫评价尤为重要。本研究中， 我们建立了CFSE检测马不同T淋巴细胞亚型增殖的方法。并对强毒感染马和疫苗株免疫马CD4和CD8 T 淋巴细胞的增殖情况进行了初步检测， 验证了该方法的实用性和稳定性， 所建立的方法也将进一步应用于马传贫弱毒疫苗免疫机制的研究中。
1 材料和方法
1.1 材料 EIAV疫苗株FDDV， EIAV强毒株LV均由本试验室保存。FDDV经密度梯度离心纯化， EIAV p26和p15蛋白由本实验室用原核系统表达并纯化。含有EIAV 核心蛋白（gag）的重组痘苗病毒由中国疾病预防与控制中心性病艾滋病中心提供。直接加入的gag保守区短肽序列分别为KTWWAIAAVKMGLQINTVNGAK; STFSILKAKFERKTANTTKKQS; MGLQINTVNGAKSTFSILKAKFER和GPKEPYPEFVDRLLSQIKSEGHPADITKFLTD， 由西安美联公司合成。马匹购自通辽， 雄性， 2～3岁， 试验前经2次免疫琼扩检测均为EIAV 阴性。马匹随机分为EIAV强毒株（LV）、 疫苗株（DLV）和健康对照3个组。强毒株和疫苗（CFSE）日本三联室保存， kit购自Molecular Probe公司; 人重组IL2购自Roche公司; 马血清和细胞培养制剂RPMI1640购自北京原平浩生物技术公司; 马CD4和CD8抗体购自VMRD公司; PHA购自Sigma公司; 其余试剂均为国产分析纯。
1.2 方法
1.2.1 马外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells， PBMC）的制备 采集肝素抗凝马全血20 mL， 3 500 r/min离心15 min。吸取白细胞富集层与2倍体积的PBS（pH7.1）混匀后， 将PBS细胞混合液缓慢加入等量的淋巴细胞分离液中， 2 000 r/min离心10 min。吸取中间的白细胞富集层， 加入等体积的PBS， 1 500 r/min离心10 min。重悬细胞沉淀， PBS洗3次。用含有20万U/L IL2的RPMI1640完全培养液（100 mL/L 马血清， 100万U/L青霉素， 100 mg/L链霉素， 10 g/L 谷胺酰氨， 10 g/L HEPES）重悬细胞， 计数备用。
1.2.2 CFSE标记马外周血单个核细胞 新鲜分离的马外周血单个核细胞细胞数调至1×1010/L， CFSE（贮存浓度10 mmol/L）用DMSO稀释至5×10-6 mol/L， 逐滴的加入到细胞中， 混匀， 置37℃孵育10 min后加入等量灭活胎牛血清， 冰浴5 min， 1 000 r/ min 离心10 min。用RPMI1640(100 mL/L FBS)培养液清洗细胞3次。RPMI1640完全培养液悬浮细胞， 调整细胞数为2×106/L。接种96孔板， 每孔200 μL。每个样品各设3个病毒刺激孔（5×107 pfu EIAV）， 3个阴性对照孔（5 μL/孔马血清）和3个PHA刺激孔（25 mg/L）， 37℃、 60 mL/L CO2继续培养5 d。
1.2.3 细胞亚型的标记 将收获的细胞用PBS (含10 mL/L FBS)洗涤2次， 分别加入鼠抗马CD4和CD8 mAb（1 μL/孔）。混匀后室温孵育30 min， PBS (含10 mL/L FBS)清洗2次后加入APC标记抗鼠IgG的荧光二抗， 室温孵育30 min， PBS (含10 mL/L FBS)清洗2次后重悬。最后在每孔加入100 μL多聚甲醛（20 g/L）， 室温固定10 min后重悬细胞， 经FCM检测。
1.2.4 FCM检测及分析 应用流式细胞仪（Beckman FC500） 将每个样品分析10 000个细胞。获取的数据经Cell Quest软件分析。首先通过前散射（FS）和侧散射（SS）二维散点图， 划出淋巴细胞区。其他的多荧光标记和测定按常规进行。通过Fliter 1（494 nm）和Fliter 4（650 nm）进行光波收集。
2 结果
2.1 CFSE标记浓度对增殖检测的影响 CFSE标记效率对不同类型细胞存在差异。采用不同浓度的CFSE（5.0 μmol/L、 2.5 μmol/L和1.0 μmol/L）标记马的PBMC， 测定了不同时间点的马PBMC增殖水平。1 d 内CFSE在细胞内有一个平衡期， 2 d后细胞出现不同程度的增殖。随着刺激时间的延长， 增殖水平也逐渐增强， 并出现多个分裂周期。在相同刺激条件下， 5.0 μmol/L和2.5 μmol/L的染色浓度增殖水平要高于1.0 μmol/L， 而2.5 μmol/L也略高于 5.0 μmol/L(图1)。因此， 马PBMC增殖测定CFSE最佳使用浓度被确定为2.5 μmol/L。
2.2 有效刺激原的选择 有效的刺激原在体外能够被致敏的T细胞捕获、 加工和提呈， 刺激效应细胞产生免疫应答。本试验中， 分别选取了gag基因原核表达产物p15 (20 mg/L)和p26 (20 mg/L)、 表达gag基因的重组痘苗病毒 (RVV)和4种位于gag基因保守区的短肽 (20 mg/L)以及纯化的FDDV病毒 (5×107 pfu)作为体外刺激物。结果表明， 只有纯化的全病毒在体外能够有效的诱导T淋巴细胞增殖（图2）。
2.3 不同T细胞亚型增殖水平 采用双染法对不同T细胞亚型进行增殖检测。首先通过前散射（FS）和侧散射(SS)二维散点图圈定PBMC中的目的细胞， 再分别由马CD4+和CD8+T细胞标记抗体（APC）和CFSE进行亚型划分。设定FL1荧光通道检测CFSE的荧光强度， FL4荧光通道检测APC的荧光强度。(G+H)区为整体CD4+或CD8+T在PBMC中的比例， H区则为发生增殖的CD4+或CD8+T细胞， 因此， 我们用H/G+H来表示CD4+或CD8+ T细胞的增殖指数（cell pision index）CDI。疫苗免疫马诱导产生CD4+和CD8+ T细胞增殖比例均高于强毒感染马和健康马(图3)。
2.4 不同病毒接种马的T细胞亚型增殖比例 在建立了双染色流式分析术检测不同T细胞亚型增殖的方法之后， 我们采用该方法对同期疫苗免疫马， 强毒感染马（出现发热、 血小板减少等临床症状一次）和健康马进行了定点检测（2.5个月）， 以测试该方法在研究慢病毒感染免疫上的实用性。经体外病毒诱导的不同试验组马匹的CD4+及CD8+T淋巴细胞增殖情况（图4、 5）。各组实验马增殖细胞均以CD4+ 细胞为主。并随着免疫时间的延长呈现波动上升的趋势。免疫3个月时， 疫苗免疫马CD4+T细胞增殖比例为15.5%， 明显高于强毒感染马（6.7%）和健康马（3.9%）。不同试验组马匹病毒诱导的CD8+T淋巴细胞增殖情况， 也具有相同的趋势和特点（免疫马vs强毒马: 7.8 % vs 4.3%）。
3 讨论
在体外， 静止期T淋巴细胞可在多种因素诱导下活化分裂。这些因素包括TCRαβmAb、 抗CD3mAb、 超抗原及植物血凝素等。在同一刺激条件下， 功能越成熟的细胞分裂能力越强。然而， 细胞克隆扩增后简单的评价T细胞数量并不能够有效地反映细胞的分裂能力， 也无法区分这种扩增是由于分裂周期的增加， 还是存活率的增加［6， 7］。传统评价细胞增殖能力的MTT比色法、 3HTdR掺入法和BrdU标记法都无法实现对细胞分裂周期的定量检测。
CFSE是一种非极性分子， 可自由穿透细胞膜， 进入细胞内被酯酶转化成带负电荷的CFSE并释放荧光。一旦进入细胞后的CFSE不能从细胞中释放或被代谢降解， 因而随细胞的增殖分裂进入子代细胞， 使荧光强度呈对半递减。因此， 该种方法不但可以检测细胞的增殖水平， 还可以评价细胞的分裂周期［8］。此外， 传统的细胞增殖测定法只能对活细胞进行检测， 而无法与某些已经分裂又发生死亡的细胞区别。而使用CFSE标记， 死亡的细胞在几天内可保持荧光强度基本不变， 并可使用其他染料将其与活细胞区分开来， 为增殖分析提供了更加全面的资料［3， 9］。
在获得性免疫应答中， 抗原特异性淋巴细胞的克隆扩增对于抵御病原体是非常必要的。克隆扩增的发生在初始免疫过程中可以产生大量效应细胞， 也可以提高抗原特异性记忆性细胞的数量［10］。初始致敏的T细胞克隆扩增的程度与长期免疫应答具有相关性［3， 11-13］。因此， 在疫苗的研究中， 就有应用提高抗原特异性淋巴细胞的增殖能力来提高机体免疫应答水平的方法。例如， 免疫佐剂的使用（通过诱导APC细胞分泌多种细胞因子来诱导淋巴细胞增殖）。研究发现， HIV的感染使得CD4+T淋巴细胞增殖能力的降低［4， 14］。尽管还没有明确的证据表明HIV感染者中CD4+T淋巴细胞功能的缺陷与病毒载量具有负相关性， 但可以肯定的是CD4+T淋巴细胞的增殖状态会对CD8+T淋巴细胞产生影响［12， 14］。另有报道CD4+T淋巴细胞对CD8+T淋巴细胞功能的发挥， 介导中和抗体及免疫记忆的维持都具有重要的作用［12， 13］。因此， 对T细胞不同亚型增殖的评价则更为重要。我们建立的双染法可检测EIAV弱毒疫苗诱导产生的不同T细胞亚型增殖水平， 为其免疫保护机制的研究提供有意义的数据。在本研究中， 我们比较了疫苗免疫马和强毒感染马不同T细胞亚型的增殖水平。结果显示， 随着免疫时间的延长疫苗免疫马与强毒感染马相比， 其CD4+T和CD8+T淋巴细胞受病毒特异性抗原刺激后的增殖能力明显提高。而这种优势并不仅体现在数量上的增加， 还表现在效应功能上。疫苗免疫马 CD4+T细胞的增殖优势是否对免疫记忆的维持具有重要作用及其与疫苗免疫保护的相关性还有待进一步探讨。综上所述， CFSE是一种理想的检测细胞增殖的标记物， 基于CFSE的淋巴细胞双染FCM检测法的建立也可以为其他疫苗的免疫评价提供有效方法。
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免疫学防治范文6
[关键词]血管基质层细胞（SVF）；脂肪颗粒移植；面部微整形。
[中图分类号]R622 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2014）04-0267-03
自体脂肪组织作为一种理想软组织填充材料，在整形与美容外科领域应用越来越广泛。其优点是植入自体脂肪组织没有排异，与周围组织质地相同，外观和手感良好。但由于脂肪细胞的耐缺血能力较差，失去了原有微血管结构的脂肪组织颗粒移植物，在与受区重新建立血运以前，常因局部血供不足而发生移植的脂肪细胞坏死、吸收，形成硬结、囊肿等。吸收率达到20%～90%，因此临床上往往需要重复脂肪移植注射2～3次才能达到满意的效果，给患者带来了巨大的痛苦和不便。本研究观察自体基质血管成分（stromal vascular fraction cells，SVF）对提高移植脂肪颗粒（adiposegranule，AG）成活率的作用，以大幅度提升面部微整形的临床效果。
1 临床资料
本临床组共24例，女性18，男性6例，年龄38～53岁。均愿意进行面部精雕塑形。其中有的患者颜面部各个部位均过度消瘦，感觉就像80岁一样，颜面部皮肤干燥甚至干裂，皱纹显著，皮肤表面触摸时感觉皮肤很松弛，非常自卑，从不敢出席各种社交活动，这些患者都非常羡慕别人有滋润的皮肤，但都拒绝多次面部手术，担心移植的脂肪被吸收，害怕进行多次填充手术。对照组是进行单纯脂肪移植的患者，共46例，女性36例，男性10例， 年龄32～60岁。
2 手术方法
2.1 脂肪颗粒的制备：采用脂肪抽吸的方法，肿胀液配方：2%利多卡因注射液25ml+0.9%生理盐水1000ml肾上腺素注射液1ml+8万单位庆大霉素2ml，注射肿胀液至局部发硬发白后，采用普通的注射器抽吸颗粒脂肪。用20ml注射器连接16～18号针头，将针头插入抽吸部位后回抽针芯，使针筒内形成负压，并保持负压，采用扇形往复抽吸技术。收集抽取的脂肪约200～250ml，注射前将收集的颗粒脂肪过滤筛选，排去肿胀液，再注入生理盐水，反复冲洗3～4次，充分去除肿胀液、血液、破碎的脂肪及纤维组织碎块，直至所供颗粒脂肪呈均匀黄色的纯净颗粒脂肪。
2.2 SVF的制备
2.2.1主要试剂：DMED 低糖培养基（美国GIBCO公司）；胚胎牛血清，磷酸盐缓冲液（PBS），牛血清白蛋白，Ⅰ型胶原酶，胰蛋白酶（美国 Sigma公司），25cm的培养瓶。
2.2.2 脂肪组织的消化：剪取脂肪组织约500mg，剔除肉眼可见的血管和纤维组织，PBS冲洗3次，剪切成约1cm×1cm×1cm的组织块，移入酶消化液4ml中，内含1% 和0.1% I型胶原酶，37℃消化60min，消化期间每间隔5min上下震荡1次，加入含15% 胎牛血清的DMEM-F12培养基终止消化。
2.2.3 SVF的分离：75UM网筛过滤组织消化液，去除未消化残余组织，将滤液移入新的10ml离心管， 1800r/min离心10min，可见离心管内液体分成4层，先吸除最上面的脂滴和第二层的乳状的成熟脂肪滴，和第三层的上清液，留下底层的沉淀物SVF，加入生理盐水3ml，吹打重悬，计数。
2.2.4 SVF和脂肪颗粒混合液的制备：将吸脂所得新鲜脂肪颗粒约200ml倒入3个25cm的培养瓶中，将上述SVF液3ml加入200ml的脂肪颗粒中，充分混合，制成混合液。将培养瓶安置入37℃的无菌培养箱中培养2h，待用。
2.3 SVF和脂肪颗粒混合液移植的方法：注射时可用30cm长的圆头16～18号针头，自凹陷的一端沿长轴穿刺全凹陷的另一端，边退针边缓慢注射，注射时脂肪SVF混合液应被间断注射成扇形的线状柱体。避免注射较大的团块状，以防血运不佳，注意凹陷处的皮肤逐渐丰满起来，该处皮肤由红变白，此时即为理想的注射量。可边注射边用手轻轻的推匀，整体注射完毕后，用滚轮轻推，再用平纱轻轻揉表面，使其尽可能平坦，注意不要用力挤压，以免脂肪颗粒从注射针眼处溢出。缝合后加压包扎。注射完毕，针眼处可用5-0线缝合。
3 结果
手术效果通过临床观察和满意度进行打分。
临床观察的区域，包括颧骨周围组织、眶下区、鼻唇沟和下巴4个部位。打分内容分别为脂肪移植量手术前后的一致性、柔软性、规则性、自然性和医患整体满意度等5个类别。每个类别有1到10之间的评价得分，分数越高表示手术效果越好（表1）。
24名患者实施脂肪移植术后，经过3～24个月的随访，结果如下：经过一次手术后3个月颜面部皮肤细腻、较以前颜色明显白嫩，全部患者对手术后效果都感到满意， 12个月后随访感觉良好，没有要求再次进行脂肪移植术，占100%；24个月后随访证明只有2例患者自述移植的脂肪部分被吸收，占8.3%；其中1名患者实施脂肪移植术后移植区出现硬结，经热敷、理疗后硬结消失。24名患者术后无一例出现坏死、液化、感染等感觉异常的并发症发生。
而进行单纯脂肪移植的46例患者，术后6个月回访时，6例发现移植的脂肪不同程度的被吸收，最多的1例诉说被吸收超过50%，不得不进行第2次脂肪填充（术后6个月）。术后12个月随访16患者诉说的脂肪移植部位重新变得凹陷，有10例不得不进行第2 次脂肪移植。术后24个月随访几乎50%患者都诉说的脂肪移植部位不同程度被吸收，变得凹陷，有8例不得不进行第3次脂肪移植。
评分标准：0分：移植的脂肪被完全吸收，移植区皮肤表面不平，手感粗糙，表情僵硬，需要第2次手术；2分：移植的脂肪被吸收80%，移植区皮肤表面平整，手感有大颗粒，表情不对称，需要第2次手术；4分：移植的脂肪被吸收50%，移植区皮肤表面平整，手感有小颗粒，表情呆板。满意度50% 以下；6分：移植的脂肪被吸收40%，移植区皮肤表面光洁，手感有层状，表情不自然；8分：移植的脂肪被吸收20%，移植区皮肤表面光洁如玉，皮肤柔软，表情自然；满意度90%以上；10分：移植的脂肪被吸收低于5%，移植区皮肤表面光洁，柔软，手感与周围组织无异，非常满意。
4 讨论
自体脂肪移植具有的低免疫原性、供区低损伤、操作简便等优点使得这项技术被广泛应用于整形外科，用来治疗面部凹陷、隆胸等方面已有许多报道，但移植后游离颗粒脂肪往往不同程度被吸收。一般脂肪移植充填量为实际缺少量的1.6～2倍左右，术后的一年的脂肪吸收率为50%左右，必须多次注射，这是这项技术的缺点。
移植早期，脂肪移植物缺乏有效的血液供应而处于急性缺血缺氧状态。在移植物与宿主建立充分的血供之前，脂肪组织只能靠周围组织液的浸润和渗透来维持营养供应，这时中央部分的脂肪组织已经由于缺血缺氧时间过长，发生了坏死、液化。由此可见，在自体颗粒脂肪移植后的转归过程中，移植早期建立及时、充分的血供，移植物及时地再血管化是影响其成活体积的关键。因此，如何促进移植物在短时间内血管化以提高移植脂肪的存活率是笔者要研究的重点。
在本研究中，笔者通过混合SVF细胞与脂肪组织移植，促进移植脂肪的新生血管生长，以延缓或阻止脂肪吸收。术后3个月、12个月、24个月随访，观察患者眼眶下脂肪、颧骨周围组织、鼻唇沟、下巴4个部位，比较移植前后的脂肪体积、柔软性、规则性、自然性和患者整体满意度5项指标。临床证明SVF细胞可以促进移植的脂肪组织的生长，保护移植的脂肪不被吸收的良好方法。
根据本研究中，脂肪移植用的SVF细胞混合后效果最好的注射部位是鼻唇沟，其次是颧骨周围和眶下区。这项发现大大提高了鼻唇沟的美容效果，特别是， SVF细胞的作用在面部深皱纹的区域比在其它区域更明显。然而，该方法是患者或医生所进行的主观评价。在未来，测量脂肪移植量的客观和定量的方法应该发展为计算机影像定量处理。
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