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造血干细胞范文1
【关键词】造血干细胞移植；淋巴瘤；淋巴细胞白血病
EffectofHematopoieticStemCellTransplantationinMalignantHematologicDiseaseofLymphaticSystem
AbstractThestudywasaimedtoinvestigatetheeffectofhematopoieticstemcellstransplantation(HSCT)intreatmentforhematologicmaglignaciesoflymphaticsystem.Throughobserving8patientswithnon-Hodgkin′slymphoma(NHL)and3patientswithlymphoblasticleukemia,whoreceivedautoorallo-HSCTafterchemotheraphy,thehematopoieticreconstitution,complicationandsurviraltimewereevaluated.Theresultsshowedthat11patients(7patientsafterauto-PBSCT,4patientsafterallo-PBSCT)allachievedhematopoieticreconstitutionandcompleteremission(CR).Withinthreeyearsfollowing-up,5patientswithNHLweresurvival,butonecaseofNHLdiedatthe2monthsafterauto-PBSCT,onepatientsuicided.From4casesreceivedallo-PBSCT,onepatiantwithNHL(NKcell)wasdiedat79dayslater,onepatientwithchroniclymphoblasticleukemiawassurviving,another2casesofacutelymphoblasticleukemiaweredeadat17monthsand54daysrespectivelyafterallo-PBSCT.InconclusionHSCTisaneffectivetreatmentforhematologicmaglignanciesoflymphaticsystem,butthereplasewouldoccurinsomepatientsreceivedauto-PBSCT.Theothersbyallo-PBSCTmightdieofseverecomplicationoftransplantation.
Keywordshematopoieticstemcellstransplantation;lymphoma;lymphoblasticleukemia
造血干细胞移植（HSCT）已被公认为是治疗恶性血液病的有效方法，特别是对急慢性白血病及中高度恶性、初治耐药、易于复发等预后不良淋巴瘤效果尤为突出［1］。外周血造血干细胞移植（PBHSCT）是HSCT中的一种类型，因其采集方法简便，移植后造血重建迅速，痛苦相对较少,易于被患者个人或供者接受，而广泛应用于临床治疗。本研究在已有的造血干细胞移植研究基础上［2-7］，重点探讨HSCT治疗淋巴系统恶性血液病的效果。
材料和方法
病种和移植类型
11例移植患者中，男6例，女5例，年龄15-56岁（中位年龄35岁），其中非霍奇金淋巴瘤8例（弥漫性大B细胞型5例，B细胞源性2例，NK细胞型1例），急性淋巴细胞白血病2例，慢性淋巴细胞白血病1例。移植类型：自体外周血干细胞移植7例，异基因HLA单倍相合亲缘移植4例（其中2例为非清髓移植，2例为清髓移植）（表1）。Table1.Informationof11patientswithmalignanthematologicdiseaseoflymphaticsystemafterHSCT（略）
干细胞的采集、动员、保存
对所有异基因造血干细胞供者均予粒细胞集落刺激因子（G-CSF）动员外周血干细胞，10μg/（kg·d）分2次皮下注射共5天，所有自体造血干细胞移植患者先予环磷酰胺（cyclophosphamide，CTX）联合G-CSF动员外周血干细胞，再用CS-3000plus(Baxter公司产品)分离外周血干细胞，每次循环血量10L左右，如1次采集干细胞数量不足，可于第2日重复采集直至CD34细胞数量超过3×106/kg，将采集到的外周血造血干细胞放置液氮中保存。
预处理方案及干细胞回输
自体造血干细胞移植（auto-HSCT)中，有6例采用CBV方案(CTX/VP-16/CCNU)，1例选用MA方案（MIT/Ara-C）进行移植术前预处理。异基因造血干细胞移植（allo-HSCT)中，2例非清髓干细胞移植者，1例采用环磷酰胺阿糖胞苷全身照射（CTX/Ara-C/TBI），1例采用氟达拉滨(fludarabine，FAMP)环磷酰胺进行预处理；2例清髓干细胞移植者，1例采用CTXTBI，1例采用CTX/VP-16/TBI进行术前预处理。所有患者在预处理结束后均予以输注含CD34细胞数平均为5.5×106/kg的未去T细胞的移植物，移植后即开始使用G-CSF（300μg/d），直至WBC＞3×109/L后停用。
结果
造血重建
11例患者中性粒细胞（ANC）＞0.5×109/L平均天数为11（8-18）天，血小板（Plt）＞20×109/L平均天数为12（8-23）天（表2）。Table2.Hematopoieticreconstitution,complicationandprognosisof11patientswithmalignanthematologicdiseaseoflymphaticsystemafterHSCT（略）
并发症
自体造血干细胞移植中，3例患者在骨髓抑制期间出现肛周、口咽部、颈静脉置管处感染，1例在造血功能恢复前因血小板低出现泌尿系出血。异基因造血干细胞移植中，1例出现移植物抗宿主病（GVHD）及肝静脉闭塞病（veno-occlusivediseease，VOD），1例出现移植物抗宿主病及出血性膀胱炎（hemorrhagiccystitis，HC）、间质性肺炎。
近期疗效
8例非霍奇金淋巴瘤患者中，5例为弥漫大B细胞型，2例为B细胞源性，1例为NK/T细胞型，移植前5例CR，3例PR，按文献［8］标准，外周血干细胞移植术后8例均为CR；3例淋巴细胞白血病患者中1例为CLLA期，2例为ALL，其中有1例多次复发，移植术后3例均达到CR。
生存期
随访3年，自体移植7例患者中，除1例自杀身亡，1例术后再次复发出现肝脏、中枢神经系统广泛浸润，于移植术后2月死亡外，其余5例均无病生存。异基因移植4例患者中，除1例CLL患者无病生存外，其余3例分别于移植后54天、2个月、17个月死亡。
讨论
上述7例auto-HSCT患者均为非霍奇金淋巴瘤弥漫大B细胞型或B细胞型，已有报道明确表明，放（化）疗大约可使30%的NHL病人长期存活，但对于中、高度恶性NHL病人的长期生存改善不明显，auto-PBSCT已成为中、高度恶性非霍奇金淋巴瘤病人治疗的标准方案之一［9］。对于初治未达到CR的侵袭性NHL病人，常规挽救治疗的效果比较差，长期无病生存率很低，而auto-PBSCT却能获得较高的CR率和PR率，5年生存率达37%［10］。我院所采用auto-PBSCT治疗的7例患者中，有3例为初治未达到CR的淋巴瘤，5例为中度恶性淋巴瘤，经过auto-PBSCT后7例均达到CR标准，其中1例弥漫大B细胞型患者移植前经CHOP方案、proMACE-cytoBOM方案、MACOP-B方案多次化疗后均不能缓解，行auto-PBSCT治疗后复查各项指标提示达到CR标准,但2月后再次复发，出现肝脏及中枢神经系统广泛侵润最终导致死亡。因此可以说，自体干细胞移植无供受者之间的免疫排斥，合并症少，造血重建快，既使出现骨髓抑制引发的感染、出血、贫血症状，予以细胞因子刺激造血，同时加强抗感染、输红细胞悬液、血小板及对症处理后也可迅速恢复，确实是治疗中高度恶性、初治耐药难治性恶性淋巴瘤的有效方法，但同时也要看到因为自体干细胞移植缺乏GVL效应，易于在移植之后再次复发，降低了auto-PBSCT对该类疾病的总体有效率。鉴于auto-HSCT治疗NHL有一定的复发率，且国际上也存在采用异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）治疗侵袭性淋巴瘤的病例，遂予例8患者进行了非清髓allo-HSCT治疗，移植过程中患者造血重建恢复迅速，也未出现严重GVHD及其他相关移植并发症，可能与术中有效使用环孢素（CsA）、骁悉（MMF）进行移植物抗宿主病预防有关，但移植后患者再次复发，较术前有明显进展，出现颅内及脾脏多处浸润。有研究表明，对侵袭性淋巴瘤的治疗，可考虑采用allo-HSCT取代auto-HSCT,但采用allo-HSCT仍有25%复发率，且移植相关死亡率较高，使其总体生存率（OS）仅有18%-35%［11，12］，近年来有报道显示采用allo-HSCT治疗恶性淋巴瘤OS可升至76%［13］，所以allo-HSCT对NHL具有治愈潜能，但因其高移植相关死亡率，同时也存在移植后复发可能，因此需有选择地对该类患者进行allo-HSCT。目前，allo-HSCT在治疗急性白血病方面已得到公认。在上述11例患者中，有2例ALL患者进行了清髓allo-HSCT，分别采用CTXTBI、CTXVP16TBI作为预处理方案。例6患者造血重建略有延迟，例7造血重建迅速，分别出现Ⅱ度aGVHD和Ⅲ度aGVHD,移植后2例患者均完全缓解，但例7因同时存在出血性膀胱炎及巨细胞病毒感染导致的间质性肺炎于移植后第54天死亡，例6因广泛性cGVHD在移植17个月后死亡。虽然allo-HSCT治疗急性白血病效果已得到肯定，但上述2例患者无病生存时间较短可能与预处理强度、配型为单倍相合及严重移植相关并发症有关。此外，allo-HSCT在CLL中的应用也逐渐被重视起来。Pavletic等［14］报道了用allo-HSCT治疗23例CLL的情况，结果显示在这些移植后患者中完全缓解率达到87%，5年的无病生存率仅为65%，复发率为5%。虽然本研究中仅有1例为采用非清髓allo-HSCT治疗的CLL患者，但其移植后亦达到完全缓解并且无病生存。综上所述，虽然自体造血干细胞移植患者尚存在复发的可能，异基因造血干细胞移植患者有一定的移植相关死亡率，但造血干细胞移植仍然是治疗恶性淋巴系统血液疾病的一个有效方法，值得在临床工作中推广。
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造血干细胞范文2
关键词： 间充质干细胞；造血干细胞；Notch信号
人骨髓中的间充质干细胞（mesenchymal stem cells ，MSCs）是造血微环境的重要组成部分，分泌细胞外基质及多种细胞因子调控造血[1]，。大多数体外培养研究证明，骨髓MSC具有强大的扩增能力，能在体外大量扩增具有自我更新的能力[2]。MSC除分泌细胞因子外，还可通过细胞间的直接接触信号来发挥作用。Notch信号通路进化保守而重要，一些复杂而高级程序如细胞的增殖、分化、存活和凋亡的正常运行正是基于正确的Notch信号转导。造血系统中，造血干细胞高度表达Notch分子，而造血微环境中的骨髓基质细胞含大量的Notch配体【3-4】二者的正常表达及相互作用维持着机体正常的造血功能，当异常表达时可造成恶性增殖性疾病【5-6】。由此推测，MSC可能通过Notch通路调控CD34 +造血干细胞的增殖。该实验中将骨髓来源的MSC与脐血造血干细胞共培养，通过实时PCR分析Notch信号分子在培养前后表达对间充质干细胞的造血支持机制作初步探讨。
1.材料和方法
1.1 材料 脐血来自郑州市妇幼保健医院，骨髓来自郑州大学第一附属医院。DMEM/F12（Hyclone公司）、胎牛血清（FBS Gibco公司） 、淋巴细胞分离液（密度1.077g/cm3 天津TBD公司）、诱导试剂：地塞米松、β-磷酸甘油钠、3-异丁酸-1-甲基黄瞟呤（ IBMX）、胰岛素、消炎痛均为Gibco公司产品，反转录试剂盒， DNA聚合酶，所用引物根据GenBank序列自行设计，引物由北京英俊公司合成。
1.2 方法
1.21 MSC的分离及培养 用无菌的PBS（PH=7.4）将采集的肝素抗凝骨髓1：1等体积稀释，轻轻摇匀后，缓慢叠加在密度为1.077g/cm3的淋巴细胞分离液上，离心，取单核细胞层， 用等体积PBS洗两遍. 在细胞沉淀中加入DMEM/F12培养液，计细胞数，调整细胞密度按1.0X107/ml接种于含15%胎牛血清的DMEM/F12培养液中，置于培养箱内培养.2d后全量换液，弃去未贴壁细胞，以后每2、3d全量换液一次，细胞达到90% 以上融合时用 0.25% 胰酶消化，冻存后用于实验。
1.22 脐血CD34+细胞的分离 脐血取自健康足月产妇，肝素抗凝后，利用淋巴细胞分离液（1.077g/mL）分离脐血单个核细胞，然后应用MiniMACS CD34+细胞免疫磁珠分选系统分离CD34 +细胞，具体操作见
产品说明书
1.23 共培养和诱导实验 1 x 105/孔MSC接种于24孔坂，待细胞贴壁后加入CD34+细胞1 x 105/孔，加入rhFL 55ng/mL，rhSCF55ng/mL，rhTPO25ng/mL共培养体系。实验分组为
MSC +CD34， 共培养6d后分别收集悬浮细胞与贴壁细胞提取总RNA。同时将共培养后MSC加入脂肪诱导体系和成骨诱导体系【7】，镜下观察。
1.24 PCR检测MSC表面的Notch配体以及CD34+细胞中Hes-1基因的表达 提取细胞总RNA， 以Oligo（dT）i8为引物，用M-MuLV逆转录酶于42℃逆转录为cDNA。以cDNA为模板用于PCR扩增目的基因，β-actin基因做内参照。
1.25 统计学分析 实验数据用均数土标准差表示，实验前后自身对照进行配对T检验，P
2 结果
2.1 骨髓来源MSC的培养
骨髓细胞接种于培养瓶后，细胞呈圆形，透亮，48h换液去除未贴壁细胞后，可见散在的贴壁细胞呈长梭形， 12～16d左右细胞达到80%～90%融合，传代后细胞24h内完全贴壁，形态与原代培养的细胞类似，生长迅速，8天达到完全融合.传至8代后细胞内颗粒增多，细胞逐渐老化。
2.2 BMSC向成骨细胞和脂肪细胞分化的检测
成骨诱导培养后进行ALP染色，倒置显微镜下观察结果显示，培养5天后，细胞变为多边形，4周后形态改变明显，出现大量灰黑色颗粒，（图2A）。脂肪诱导体系中培养7d后，胞体变大，细胞内出现脂滴，诱导至3周特异性油红0染色，将脂滴染成明亮的红色（图2B）。
3 讨论
Notch信号系统几乎涉及所有细胞的增殖、分化活动，遍及胚胎发育期的各种组织和各种成熟组织中未分化的具有增殖能力的细胞，是影响细胞命运的、保守而重要的信号通路之一[7]。Notch信号通路主要由受体、配体、CSL-DNA结合蛋白组成。当配体（如Delta）和相邻细胞的Notch受体结合后，Notch受体被蛋白酶体切割，释放出具有核定位信号的胞质区ICN（int racellular domain of Notch ），进入细胞核与CSL结合，调节基因表达。Notch信号的靶基因多为碱性螺旋-环一螺旋类转录因子（basic helix-loop-helix ， bHLH ），它们又调节其他与细胞分化直接相关的基因的转录[8]。邢莹等[9]通过Real timePCR检测发现BMSC，在向神经细胞诱导前后Notchl、Jaggedl表达显著改变。成软骨方面，Older-Shaw等【10】通过Real time PCR检测成软骨诱导后的hMSCs，发现Jagl基因在软骨形成早期增高，进而其将包含Jagl基因的腺病毒转染到hMSCs，通过提高Jagl蛋白的表达量，发现Notch下游靶基因 HES-1基因表达明显增加。以上实验均证实Notch信号通路可能参与间充质干细胞的多向分化过程。
BMSC是一群多潜能分化的成体干细胞，是骨髓中构成造血微环境的重要细胞成分， BMSC通过严格的细胞间接触，诱导造血干细胞表达并能分泌多种造血生长因子支持造血； Maitr。等【11】在体外扩增人BMSC后，将其与HSC共移植给NOD/SCID小鼠。结果显示，当HSC数量有限时，只有同时给予BM-SMC回输才能获得造血干细胞的成功植入。Muguruma等【12】将增强的绿色荧光蛋白标记的MSC＼移植给NOD/SCID小鼠，8周后，与宿主小鼠的造血微环境整合。这表明BMSC对造血微环境的重建起重要的滋养作用。
我们通过Real time PCR检测Notch信号受体及配体，是否表达于BMSC及脐血CD34+细胞表面，实验结果表明，Notch配体及受体在BMSC及脐血CD34十细胞表面均有表达，且共培养前后存在配体Jagl及受体Notchl表达的改变，同时下游靶基因HES-1表达明显增加。该实验结果提示BMSC和脐血CD34+细胞共培养后存在Notch信号通路的活化。该实验中我们发现BMSC与脐血造血干细胞共培养后伴随Notch信号的活化，提示Notch信号在BMSC造血支持方面发挥重要作用。造血干细胞移植是目前治愈恶性血液系统疾病唯一有效的方法，通过Notch信号的研究更好的为造血干细胞移植提供理论支持。每一种信号转导途径有多种机制的参与，Notch信号通路也是一个多步骤、多因素参与的信号转导过程，要全面了解Notch信号在BMSCs支持造血中的用，尚需做更深入和全面的研究。
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造血干细胞范文3
小细胞肺癌(sCLC)是一种高度恶性的肿瘤，早期出现区域淋巴结及远处转移。因此临床上以化疗为主要治疗手段[1]。该病对化疗敏感，单药有效率高，临床常用联合方案。本病例采用自体造血干细胞移植(aSCT)治疗取得很好疗效，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 临床资料 患者，女，58岁，与2006年8月21日入院，经过CT显示右肺占位，做病理后确诊为sCLC局限期。
1.2 aSCT动员、采集、保存及回输
1.2.1 aSCT动员 采用大剂量化疗加动员剂进行动员。方案：紫杉醇（135mg/m2）+卡铂(AUC=5)+VP-16(75mg/m2)，第1天至第3天，四个周期（每个周期10天）获得完全缓解后，给予动员剂重组粒细胞集落刺激因子rhG-CSF(Kirin公司产品)5～10μg/kg皮下注射，共5～10天[2]。
1.2.2 aSCT采集、保存及回输 当外周血WBC>1.0×109～5.0×109/L，PLT>20×109～50×109/L，外周血CD34(+)细胞>1%时开始采集。使用CS-3000plus细胞分离机（美国Baxter公司生产）。分离夹用GRANULO，收集夹用A-35，全血流速55mL/min，全血∶抗凝剂为10∶1，终点量值10 000mL（根据需要确定），1 000mL生理盐水，500mL抗凝剂（ACD-A），600mL转输袋，以及消耗品管路一套。按程序进行采集。采集的aSCT 200mL在4℃冰箱保存，待预处理72小时后经静脉回输。
1.3 预处理方案 基本方案为紫杉醇175mg/m2+卡铂(AUC=7)+VP-16(600mg/m2)，第1天至第3天。
1.4 支持治疗与并发症的防治 患者于预处理方案进行前一天住进无菌层流净化病房。根据患者进食情况适当给予肠外营养。强迫利尿，水化，5%碳酸氢钠化尿液及Mesna预防出血性膀胱炎，常规口腔及肛周护理，在粒细胞缺乏期防感染而用广谱抗生素[3]。
2 结果
移植后患者获得了造血重现，MNC≥0.5×109/L及PLT≥20×109/L。没有出现预处理后的不良反应，也未出现严重感染及出血性膀胱炎等严重并发症。移植后的生存期已达300天。
3 讨论
近几年来aSCT正在越来越广泛地应用于治疗恶性肿瘤，而sCLC对化疗高度敏感，许多学者多选择局限期患者中诱导化疗达CR或接近CR的患者，将aSCT作为后强化治疗手段。这样它可以使肿瘤患者耐受大剂量化疗，最大限度杀伤肿瘤细胞，而且由于造血重建快，从而减少了出血感染的机会，降低了治疗费用，体现了aSCT的优越性[4]。有研究表明，采集的aSCT在4℃可以安全保存4～5天，期间患者可接受大剂量化疗。我们采集的aSCT也采取在4℃保存的方法，无需超低温保存设备及技术，这不仅可简化移植过程，降低医疗费用，也可减少aSCT在体外被污染的机会，该患者目前仍处于CR中。对于患者提高了其生存率，但aSCT治疗sCLC长期疗效还有待进一步观察[5]。
参考文献
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造血干细胞范文4
【摘要】
目的探讨人巨细胞病毒(human cytomeglavirus，HCMV)对造血干细胞的增殖和分化情况的影响。方法采用造血干细胞体外培养技术，研究HCMV -AD169株对脐血造血干细胞增殖和分化情况的影响，采用PCR技术检测干细胞中的HCMV DNA.。结果HCMV 在体外能明显抑制造血干细胞的增殖和分化，抑制程度随病毒浓度的升高而增大，经PCR检测病毒感染的细胞中有HCMV DNA的存在。结论HCMV-AD169对造血干细胞增殖和分化情况的有抑制作用。
【关键词】 巨细胞病毒 造血干细胞 增殖 分化
Abstract：ObjectiveTo investigate the effect of human cytomeglavirus（HCMV） on proliferation and differentiation of hematopoietic stem cell（HSC）. MethodsThe technology of cell culture was used to observe the effect of HCMV-169 strain on proliferation and differentiation of hematopoietic stem cell， and the technology of polymerase chain reaction(PCR) was used to detect the existence of HCMV DNA in HSC. ResultsHCMV AD169 suppressed the proliferation and differentiation of HSC in a dose-dependent manner. HCMV was successfully detected in HSC.ConclusionHCMV AD169 strain can suppress the proliferation and differentiation of HSC.
Key words：Cytomeglavirus; Hematopoietic stem cell; Proliferation; Differentiation
人巨细胞病毒(Human cytomeglavirus，HCMV)感染非常普遍，人是HCMV的唯一储存库，HCMV原发感染后以潜伏状态持续存在，在某些特殊条件下可以被激活，而引起造血功能紊乱，表现为骨髓抑制、血小板减少、粒细胞减少、单核细胞增多症、贫血、肝脾肿大和免疫功能紊乱等［1］。我们采用造血干细胞体外培养技术研究HCMV-AD169对脐血造血干细胞的影响，用聚合酶链反应(PCR)法检测细胞内HCMV DNA，以探讨HCMV对造血干细胞的作用。
1 材料与方法
1.1 材料
脐血标本均来自于附属医院及妇幼保健院，病毒株HCMV-AD169株由湖南师范大学提供，造血干细胞免疫磁珠分离试剂盒购于宁波新芝科技有限公司，DMEM及IMDM培养基购于GIBCOBRL公司。
1.2 方法
1.2.1 脐血单个核细胞［2］及CD+34细胞的分离
无菌法采集健康新生儿脐血，用DMEM培养液按1:1稀释，混匀后用吸管沿管壁缓慢叠加于淋巴分离液面上，水平离心2 000 r/min，30 min，在上、中层界面处有一白色云雾层狭窄带仔细吸取单个核细胞，用5倍体积的DMEM培养液洗涤，1 500 r/min离心10 min，重复两次。细胞沉淀用DMEM均匀配成单个核细胞悬液并记数。通过造血干细胞免疫磁珠分离系统分离CD+34细胞。
1.2.2 感染方式及分组
采用持续性感染方式，即HCMV直接加入到培养体系中混合培养。实验分对照组两组，分别是①空白对照组:不加HCMV病毒液，加入同体积的IMDM；②灭活对照组：加入同体积灭活HCMV病毒液（病毒液在紫外灯下照射15 min灭活）；感染组分3组即1∶10，1∶100，1∶1 000；分别直接加入0.1 ml的1∶10，1∶100，1∶1 000的HCMV-AD169DNA株病毒液与细胞混合培养。
1.2.3 细胞培养将上步收集的细胞进行培养，按106/ml CD+34细胞密度培养，1 ml体系中含有12.5%胎血清、100 μg/ml链霉素、100 U/ml青霉素，IL-3，SCF各100 ng/ml，5×10-7/ml氢化可的松，余体积用IMDM补充。培养于24孔板，每孔1 ml，37℃培养于50 mmol/L CO2及饱和湿度的培养箱中。每3 d半量换液1次，在培养5，10，15，20 d和30 d时，用血细胞记数板分别计数细胞的增殖情况，染色后镜下观察细胞的分化情况。
1.2.4 应用PCR技术检测造血干细胞中的HCMV-AD169DNA 取上述培养液低速离心沉淀细胞弃上清液，用磷酸盐缓冲液低速离心洗涤2次，再用双蒸水洗1次，弃上清液，以去除细胞外残留病毒，提取DNA按PCR试剂盒说明书进行，在紫外灯下观察，有无特异的阳性扩增带。
1.2.5 统计学分析
各组属数值型资料，应用sas软件方差分析和q检验。
2 结果
2.1 造血干细胞形态及增殖和分化情况的影响
观察:两对照组中使用的培养体系质量稳定，细胞生长良好，培养21 d以后，台盼蓝活体染色细胞存活率>98%。病毒感染组正常细胞数目明显减少，并出现形态学异常，经Winght-Giemsa染色，观察可见一些细胞体积增大，包膜不完整，胞核大，折光性强。增殖情况见表1。表1 细胞增殖数目的组间比较(略)
2.2 干细胞内HCMV-AD169DNA检测
采用普通PCR技术检测5组细胞内HCMV-AD169DNA，在3个滴度病毒感染组均出现特异扩增带，空白对照组和灭活对照组无阳性扩增带。
方差分析：多组间有统计学意义(F=31.51，P
3 讨论
人群中HCMV感染较为常见［3，4］，已有学者研究发现HCMV感染可伴随有血小板和粒细胞减少等造血系统异常的表现［5，6］但并未引起重视，后来一些学者证实，HCMV抑制机体晚期的造血作用，但HCMV是否直接感染早期造血细胞未见报道，本实验前，脐血标本经严格的检测，未检测到HCMV-DNA，本实验采用病毒直接感染细胞的混合培养的方法，用不同浓度的巨细胞病毒HCMV-AD169体外培养感染人脐血造血干细胞，结果显示对脐血造血干细胞的增殖和分化有明显的抑制作用。
实验采用PCR检测技术检测干细胞中的HCMV-DNA的结果在各培养体系中HCMV感染组均能检测到相应的阳性扩增带，表明干细胞可能是HCMV潜伏的最主要细胞之一，HCMV-AD169株能直接感染脐血造血干细胞抑制其增殖和分化，这与临床上出现的造血功能紊乱可能有关。
【参考文献】
［1］Crapnell K，zanjani ED，Chaudhuri A，et al.In vitro infection of megakaryocytes and their precursors by human cytomegalovirus［J］. Blood， 2000，95(2):487.
［2］金伯泉.细胞和分子免疫学实验技术［M］.西安：第四军医大学出版社，2002：61.
［3］Minton EJ，Tysoe C，Sindair JH，et al.Human cytomega lovrus infection of the monocyte/macrophage lineage in bone marrow［J］. J Virol，1994，68:4017.
［4］Dejong MD，Galasso GL，Gazzard B，et al.Summary of the international symposium on cytomegalovirus［J］. Antiviral Res，1998，39(3):141.
造血干细胞范文5
【摘要】自体造血干细胞回输护理，观察回输中出现的不良反应，并与相应的预防、对症处理，保证了干细胞回输的安全。
【关键词】自体干细胞回输、不良反应、护理
在血液肿瘤的治疗中，化疗、放疗是重要的手段，但是常规的化放疗对难治性血液恶性肿瘤往往疗效欠佳，而这些新药多具有剂量危险性毒性，这种毒性对治疗剂量提出了限制，并因此影响了疗效，近几年，超大剂量化放疗联合造血干细胞移植的治疗得到迅速发展，2010年11月份我科开展了自体外周造血干细胞移植，由于自体外周造血干细胞采集后要进行体外低温保存，因此，回输时会发生一些毒副反应，因此在回输时加强监测、护理。避免干细胞的损失，及时发现不良反应，积极处理，保证回输安全、顺利是十分重要的。
1 资料和方法
1．1 一般资料：
2010年11月-2012年4月共完成4例自体干细胞移植手术，男性2例，女性例年龄在32-65岁，疾病类型1例小细胞肺癌，1例急性白血病，1例多发性骨髓瘤，1例恶性淋巴瘤，患者在自体干细胞移植手术前接受全身体格检查，在1：2000洗必泰溶液中药浴20-30分钟入住百级层流病房，并行右颈部深静脉置管，采用Arrow公司生产的抗感染双腔导管。
1．2 方法：干细胞采集和冻存
1．2．1 移植前动员方案：4例均采用CE+重组粒细胞刺激因子。
1．2．2 利用血细胞分离机进行二次大容量采集干细胞，每次循环血量达到15000ml。采集单个核细胞2×108/kg，CD342×106/kg。
1．2．3 冻存的方法：将采集的干细胞在-80℃下低温保存。
1．3 预处理方法： 4例均采用大剂量的化疗
1．4 预处理结束48-72小时内回输干细胞。
2 干细胞回输的护理
2．1 回输前向患者简单介绍过程及可能出现的不良反应，作好心理护理，避免因出现不良反应而恐惧。备好几个1：2000洗必泰溶液浸泡消毒好的新鲜橙子放在病房内，缓解DMSO释放出的味道。
2．2 回输前15分钟按医嘱给予激素、抗过敏类药物预防不良反应。
2．3 心电监护监测生命体征、氧饱和度的变化。
2．4 建立两条通路，一路碱化液静滴，一路使用去除过滤网的输液器备输干细胞，同时保证导管通畅。
2．5 在床边以42℃的水浴迅速复温，立即从去除过滤网的输液器路中心静脉导管输入，根据年龄、身体状况调整滴数。一般5-10min输完，输完生理盐水冲洗管道。［1］
2．6 在输注过程中及24小时内严密观察生命征、氧饱和度、尿量、尿色及患者的主诉，及时发现不良反应及时进行处理，并做好相应的记录。
3 结果
回输过程中出现恶心呕吐2例，喉头痒感不舒适2例，氧饱和度轻度下降1例，4例在回输结束后1-2小时均出现了不同程度的血红蛋白尿，血压升高3例，其中1例达到170/110mmhg，另外2例轻度升高。
4 分析与处理
4．1 血红蛋白尿是回输自体干细胞最常见的不良反应，这是由于干细胞在冻存和解冻过程中细胞发生裂解当出现血红蛋白尿时首先要镇静，同时向患者作好解释，避免病人不必要的恐慌，立即加快补液，增加输液量［3000ml/cm2d］和速度［100ml/ cm2h］，并加用5%碳酸氢钠3-5ml/kg碱化利尿关［2］，观察尿量尿色的变化，留取尿标本做常规检查，经处理4例在回输后4-8小时内尿色转清，复查尿隐血阴性。
4．2 在回输过程出现恶心呕吐，血压升高，喉头痒感不舒适，氧饱和度轻度下降等不良反应主要是由于在干细胞保存的过程中添加了DMSO有关［3］，DMSO是一种渗透性保护剂，能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，减轻自由基对细胞损害，改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。 但是研究表明，DMSO存在严重的毒性作用，与蛋白质疏水集团发生作用，导致蛋白质变性,具有血管毒性和肝肾毒性，最为常见的为恶心、呕吐、皮疹及在皮肤、和呼出的气体中发出大蒜、洋葱、牡蛎味，吸入高挥发浓度可能导致头痛，晕眩和镇静。此时可给予5-HT3受体拮抗剂，适当应用激素，必要的同时可使用镇静剂对症治疗，对于呼出的难闻气体可在患者的床头放置消毒好的新鲜橙子可减轻一些气味，并嘱患者进行张口呼吸，让患者呼吸顺畅些。经对症处理在回输后1-2小时症状消失。
5 小结
回输自体干细胞存在一定的不良反应，而干细胞在4℃体外放置5分钟，干细胞就会损失15%，放置30分钟则可造成干细胞损失75%，如何保证输注的安全是，护理和观察是非常重要的，对出现的不良反应要及时汇报，准确处理才能安全输注，同时避免干细胞的损失，这也是自体干细胞移植手术成功的重要环节，我科4例自体干细胞移植患者通过积极主动的预防护理、及时的对症处理结果都保证了安全输注。
参考文献
［1］ 侯彩妍、王国权《造血干细胞移植护理手册》，北京军事医学科学出版社2009（12）77
［2］ 田晨杰、唐锁勤、杨婷婷，儿童自体外周造血干细胞回输的护理 ［J］护理杂志2009， 4、26（4A）30-31。
造血干细胞范文6
【关键词】 造血干细胞移植；侵袭性真菌感染；对策
造血干细胞移植技术日益成熟， 但患者移植后由于本身疾病， 预防处理， GVHD的预防和治疗导致免疫力低下， 容易发生侵袭性真菌感染。近年来侵袭性真菌感染发病率呈上升趋势， 已成为影响移植效果的重要因素[1]。现将近年造血干细胞移植后发生侵袭性感染的患者进行总结有助于降低发病率和病死率， 对提高患者疗效和生存质量有重要意义。
1 临床资料
1. 1 一般资料 2007年1月～2012年1月共收治造血干细胞移植患者156例， 异基因移植42例， 自体造血干细胞移植62例， 年龄17～72岁， 平均49.5岁。
1. 2 感染部位 156例患者呼吸道真菌感染62例， 泌尿系统38例， 念珠菌32例， 曲霉菌24例。
1. 3 真菌分类 通过抽血、咽拭子、痰培养出白色念珠菌、曲霉菌等。
2 临床特点
2. 1 移植前预处理使用的大剂量化疗药物对口腔黏膜上皮细胞直接损伤。
2. 2 化疗后骨髓造血功能受到极度抑制， 白细胞显著降低， 中性粒细胞绝对值减低。
2. 3 大量广谱抗生素和糖皮质激素的应用[2]。
3 侵袭性真菌感染的问题
3. 1 会出现口腔溃疡
3. 2 患者反复发热
4 对策
4. 1 加强卫生宣教 入层流室后根据患者文化层次进行适当的宣教， 向患者说明口腔护理的意义及口腔感染后的痛苦及治疗带来的经济负担， 让患者主动积极配合做好口腔护理及口腔含漱。
4. 2 做好移植前准备 在做移植前控制好患者的真菌感染， 入仓前3 d开始服用肠道不吸收的抗生素（复方磺胺甲恶唑、制霉素片）进行肠道消毒， 药浴后进入百级间， 根据患者情况选用抗生素。
4. 3 加强移植后的漱口 加强口腔护理2次/d， 合理使用漱口液。指导患者每日用重组人白介素-11漱口液（巨和粒）100 μg+NS100 ml。晨起、每次餐后30 min及睡前进行含漱护理， 每次3～5 min。
4. 4 加强环境监测和消毒 移植后患者在无菌层流病房进行治疗， 实行严格的保护性隔离。护理人员严格执行无菌层流病房的消毒隔离制度， 每天紫外线消毒空气2次；1‰洗必泰溶液全身抹洗1次/d， 会阴抹洗或PP粉坐浴2次/d， 每天用1%的消佳净对百级室进行全室的抹洗， 包括天花板、病床、地板、桌面、墙壁等[3]。
4. 5 严格无菌操作 医务人员在执行操作时严格执行无菌操作。
4. 6 心理护理 患者出现反复发热， 会出现信心不足， 焦虑。因此， 护理人员应主动热情地关心患者， 听取患者诉说， 及时发现心理变化， 加强与患者家属取得一致配合患者治疗。
参考文献
[1] 黄晓军.血液病恶性肿瘤患者侵袭性真菌感染的诊断标准与治疗原则（草案）.中华内科杂志， 2005，44（7）：554-556.