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向雷锋学习范文1
“如果你是一滴水，你是否滋润了一寸土地?如果你是一线阳光，你是否照亮了一分黑暗?如果你是一颗粮食，你是否哺育了有用的生命?如果你是一颗最小的螺丝钉，你是否永远守在你生活的岗位上?”这是选自雷锋日记中的一段话，影响和鼓舞了几代人，是永远让我们怀念和崇敬的对生命价值的诠释。
今年的3月5日，是同志号召“向雷锋同志学习”50周年纪念日，作为新时代的大学生，我们应该肩负历史使命，学习雷锋勤俭节约、热爱集体、助人为乐的精神，用实际行动践行雷锋精神。在此，北京大学医学部青年志愿者协会向全体同学倡议：
一、学习雷锋勤俭节约的优良作风。古语有云“克勤于邦，克俭于家”，厉行节约、反对浪费是中华民族的传统美德。节约需要我们从身边的小事做起，“一粥一饭，当思来之不易;半丝半缕，恒念物力维艰”，关上教学楼空教室里亮着的灯、拧紧卫生间里滴水的龙头、节约使用每一张纸、吃光餐盘中每一粒饭……让我们在细节里践行雷锋精神，使之发扬光大，传承不息吧!
二、传承雷锋克己奉公的集体主义精神。北医为我们创造了优美安宁的学习、生活环境，北医的美好也同样需要我们每一个人去悉心呵护。树立“校园是我家”的主人翁意识，爱护公共财物，不乱扔果皮纸屑，垃圾分类投放，遵守食堂秩序……让我们为美化校园风貌而严格律己吧!
向雷锋学习范文2
“向雷锋同志学习”主题活动工作总结
为纪念同志“向雷锋同志学习”题词51周年，大力弘扬雷锋精神和“奉献、友爱、互助、进步”的志愿精神，以实际行动培育和践行社会主义核心价值观，3月2日，市文明办、长城爱心大本营联合市中医院开展“送医送药送温暖”学雷锋志愿服务活动，为文登市侯家镇的贫困家庭送去了温暖。
专家门诊开到农村大集上
2日上午9时许，下乡送医送药送温暖的志愿者们来到文登市侯家镇。他们兵分两路开展活动，一路志愿者在侯家镇大集上支起了义诊摊位，现场为村民义诊;另一路志愿者则深入侯家村、山前村、南渠格村、小洛村，为身体行动不便的残疾人上门送医送药。
早已得到义诊消息的村民们，大清早就从各村赶来了，在提前搭好的桌子前，来自市中医院眼科、心脑科、针灸科等科室的专家还没落座，很多村民们便围上来咨询。
“大夫，我这眼睛里长了个痘，您给看看是怎么回事。”来自河杨家村的杨女士在志愿者引导下，来到眼科医生的摊位。她说，“最担心这个病会遗传，得知医生来这里，就趁这个机会咨询一下眼科专家。”现场，市中医院眼科主任赛自金仔细为她进行了检查，告诉她不会遗传，并为她开具了药单，杨女士满意而去。
在义诊摊上，有的村民拿来了在乡镇医院就诊时的病例和化验单，来找市中医院的医生“确诊”一下，有的村民专门请教按摩推拿技术，现场人头攒动。“头一次一下子见了这么多专家，都不知道先看哪儿了。希望这样的活动能越来越多。”许多村民表示。
爱心温暖坚强母亲的心
2日上午，志愿者们带着大米、蔬菜等日用品和药品来到侯家镇小洛村王炳凤的家中，探望王炳凤母女。
王炳凤的女儿因2001年的一场车祸成了植物人。王炳凤不离不弃守在女儿身边，四处求医、悉心照顾，用母爱唤醒了“沉睡”的女儿，如今女儿已经能够扶着母亲的肩膀站起来了。2012年3月，王炳凤的丈夫突患心肌梗塞去世，全家的生活重担都压在了王炳凤身上。面对种种困难，她用一颗坚强的心来支撑着自己，继续为女儿的康复努力着。
王炳凤的故事深深感动了许多人。昨天，随行的医生们为王炳凤的女儿进行了身体检查，现场交给王炳凤如何为女儿进行分阶段康复训练的方法，并给这个不幸的家庭送来1000元慰问金、药物以及大米等生活用品。
向雷锋学习范文3
赵浩博
大家都认识雷锋叔叔吧？雷锋是我们学习的榜样，走到哪里，好事就做到哪里。今天，我们学校组织一次“学雷锋，树新风”活动。
老师带领着我们搞校园卫生，我们的任务是去综合楼擦窗户。“到了，到了。”一名同学说道。我已经迫不及待了，迅速地爬上了窗户。有的同学蹲着擦，有的同学躺着擦，还有的同学歪着身子擦，这可是四楼啊！就连胆小如鼠的女生也不犹豫地爬上窗户台，擦了起来。再看看我，我可是有“恐高症”的呀！我蹑手蹑脚地爬，老师走过来对我说：“挺勇敢嘛！小心。”好像老师在鼓舞着我，我的心里一下就有了勇气。
啊！保持卫生真是一件不容易的事呀！让我想起了雷锋的一句名言：一朵鲜花打扮不出美丽的世界，一个人先进总是单枪匹马，众人先进，这样才能移山填海。
雷锋真是我们的好榜样啊！
向雷锋学习范文4
关键词：风险评估 防雷 乡村学校 建设项目
1.项目环境概况
本文以台州市椒江区一乡村学校新建项目（施工前）为案例，经现场勘测情况新建学校项目位于椒江区前所街道前所村，东经121°26ˊ46"；北纬28°42ˊ14"。建设项目的东侧紧靠地势较高植被茂盛的山坡，山坡的迎风面水汽充沛湿度大、是雷雨天气地域选择的有利区域。
2.采集项目地块雷电地闪密度分布状况
根据浙江省雷电监测定位系统台州终端2007年1月1日至2012年12月31日的闪电数据分析得出：以椒江区前所中心校新建项目地为中心5公里范围内地闪共有677次，其中正闪22次，负闪655次，最大正负地闪强度分别为，184.0kA和-260.5kA。平均地闪强度为27.63kA，平均地闪密度为4.14次/（km2·年）。
3.对建设项目施工设计图进行雷电评估
3.1 防雷设计
该学校项目的总建筑面积为6852.7m2、新建建筑物有综合行政楼、教学楼高度为24.10 m。建设项目属于二类防雷建筑，内部雷电防护系统按D级设置。（1）屋顶采用暗敷接闪网格及天面周围明敷接闪带混合组成接闪器，建筑物接闪网网格尺寸≤12m×8m。（2）利用结构柱内的主筋2根以上≥Ф16mm钢筋作为防雷引下线。（3）桩基、承台、地梁为接地装置，均采用桩主筋及基础地梁主筋沿地网焊接，闭合接地装置均利用建筑物钢筋混凝土中的钢筋，防雷引下线、防雷接地、电气设备的保护接地及建筑物四周环形焊接弱电接地合用，防雷接地电阻值不大于1欧姆。
3.2 综合布线
电力线路、通信线路穿金属管线埋地敷设进入建设项目的变电房至引出到建筑物各楼层设备终端。
3.3 等电位连接
所有金属管线进出各建筑物界面处与MEB作等电位连接。
3.4 选择学校建设项目的雷电风险特性因子
查阅施工设计图，按雷电风险评估技术规范涉及到的因子：建筑物特性因子、建筑物外部3m内区域特性因子、建筑物内部电源及入户电力线路的特性因子、建筑物内部通信系统及入户线路的特性因子。
3.5 量化计算各分量风险、总风险结果
根据《雷电防护第2部分：风险管理》GB/T21714.2-2008中的给定公式，计算该学校建设项目各风险分量风险（见表1）、总风险（见表2）。
4.评估结论
根据《雷电防护第2部分：风险管理》GB/T21714.2-2008规定的风险容许典型值（RT）如表3所示：
4.1 人身伤亡损失分量风险、经济损失分量风险原因分析
（1）经计算虽然人身伤亡总风险R1=1.14×10-6
（2）经与风险容许典型值（RT）比较分析，经济损失风险R4=1.24×10-3>RT（1×10-5）超出了容许风险的典型值RT，经济损失分量风险主要来源是分量RM值所占总风险的91%，原因是存在雷击建筑物附近引起内部系统故障风险。
4.2 防护措施建议
根据以上原因为了降低总风险采取防护措施如下：
（1）对建设项目服务设施的入户端做良好的等电位连接，避免同一防雷区内部的金属和系统之间发生雷电反击，以降低雷击造成的人身伤亡物理损害的总风险。
（2）各级电涌保护器的设置应满足所保护设备的匹配要求，应充分考虑持续运行电压UC、标称放电电流In、电压保护水平UP等技术参数，设置一组接地性能良好的接地装置。所有电子、电气设备须处在直击雷保护范围之内，在LPZOB区域的各类线缆穿金属管屏蔽并接地，把沿金属管线传播的过电压泄放入地。在LPZ1区域的电子、电气设备输入端或输出端设置相匹配的电涌保护器。对弱电系统进行综合性防护，内部布线时采用屏蔽线缆，当采用非屏蔽线缆时应避免构成环路或穿金属管敷设，减小高电位对附近金属物或电气和电子系统线路的反击。建筑物内有多种接地时，应采用共用接地方式，消除地-地之间的电位差对信息系统的干扰。低压线路采用铠装线缆或穿金属管埋地敷设，入户端将线缆的金属外皮、穿线金属管与防雷地做等电位连接，在电源线路引入的总配电柜的低压输出端处设置电涌保护器。信息系统中的地下电缆应采用屏蔽电缆，如采用光缆也应采取有效的防护措施。线路中设置的电涌保护器，应根据所保护的对象，选择合适的电涌保护器，其主要技术参数应满足《建筑物电子信息系统防雷技术规范》GB50343-2012要求，匹配的SPD保护才能有效减小内部系统故障的概率。屏蔽技术是减少电磁干扰的基本措施，电力和通信线缆应采用合适的路径敷设线路和线路屏蔽，衰减施加在设备上的电磁干扰和过电压。以降低雷击造成的经济损失物理总风险。
4.3采取防护措施后的经济损失分量风险、总风险分量风险： Rb=2.62-9， Rc=3.28-6， Rm=1.89-7， Rv=5.06-7， Rw=1.45-5， Rz=6.14-5
总风险：R4= Rb+ Rc+ Rm+ Rv+ Rw+ Rz
R4=2.62-9+3.28-6+1.89-7+5.06-7+1.45-5+6.14-5=7.99-5
经济损失总风险R4=7.99×10-5
5.结语
雷击风险评估是个综合、复杂的工程，以大量繁杂的数据为基础。规定了建筑物允许落闪频率和可接受的最大危险度，超出相关规范规定值的雷击损坏是存在的。提高防雷工作的重要性、迫切性、复杂性，雷电的防御已从直击雷防护到系统防护，人类必须从新高度来认识和研究现代防雷技术，提高人类对雷灾防御的综合能力。
参考文献：
[1]《雷电防护第2部分：风险管理》GB/T21714.2-2008/IEC62305-2：20
06.
[2]《建筑物防雷设计规范》GB50057-2010.
[3]《建筑物电子信息系统防雷技术规范》GB50343-2012.
向雷锋学习范文5
[关键词] 关节炎；类风湿；Vaspin；炎症因子
[中图分类号] R593.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2011）06（c）-030-03
Change of serum Vaspin level and related factor in patients with rheumatoid arthritis
HU Wei
Department of Joint Surgery, Chinese Traumatology Hospital of Zhuzhou City, Hu′nan Province, Zhuzhou 412000, China
[Abstract] Objective: To investigate the change of serum Vaspin and the relationship of serum Vaspin level to related factor in patients with rheumatoid arthritis and to clarify the probable mechanism of Vaspin in rheumatoid arthritis (RA). Methods: Serum Vaspin level in 60 patients with RA were measured by an ELISA, and the relationship of serum Vaspin level with erythrocyte sedimentation rate (ESR), α1-acid Glycoprotein (AAG), C-reactive protein (CRP), rheumatoid factor (RF) and tumor necrosis factor alpha (TNF-α) were also analyzed. Results: Fasting serum Vaspin level were significantly higher in RA group than that in control group [(1.58±0.20) μg/L vs (0.71±0.09) μg/L](P
[Key words] Arthritis; Rheumatoid; Visceral adipose tissue-derived serine protease inhibitor (Vaspin); Inflammatory factors
内脏脂肪组织来源的丝氨酸蛋白酶抑制剂（visceral adipose tissue-derived serine protease inhibitor，Vaspin）是一种新发现的脂肪细胞因子，它属于丝氨酸蛋白酶抑制剂Serpin家族[1]。先前的研究表明Vaspin与胰岛素抵抗（IR）、肥胖以及2型糖尿病（T2DM）的发病密切相关[2-4]。近年来Seeger等研究发现长期行血液透析治疗的患者血清C反应蛋白（CRP）水平与血清Vaspin水平呈独立负相关，而且是血清Vaspin浓度的独立预测因子[5]。Ladislav Senolt等研究也发现RA患者滑膜液Vaspin水平明显高于骨关节炎患者[6]。提示血清Vaspin可能与炎症反应有关，在RA的发病中具有重要的作用。然而Vaspin在RA发生和发展中的作用机制目前并不十分清楚。类风湿关节炎是一个累及周围关节为主的多系统炎症性的自身免疫病，病因不明。其特征为多个对称性周围关节的慢性炎症病变，最常侵犯的部位是四肢小关节， 可引起全身的关节肿胀疼痛及功能障碍，病变呈持续、反复发作的过程。本实验中， 观察RA患者与正常人血清中Vaspin及相关炎性细胞因子浓度的差别， 分析RA与相关炎性细胞因子的关系， 从而探讨Vaspin在类风湿关节炎发生过程中可能的作用机制，进一步阐明Vaspin的生理功能。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2009年9月~2010年12月我院门诊或住院的RA患者60例作为RA组，所有患者均符合美国风湿病学会（ARA）1987年修订的RA诊断标准。RA患者按病情活动分为RA活动亚组（32例）和非活动亚组（28例）。活动RA患者活动性指标包括：晨僵＞30 min；3个以上关节肿胀；5个或5个以上关节压痛；血沉＞30 mm/h。RA患者年龄18～75岁，平均（50.4±9.0）岁；BMI 18.2~29.0 kg/m2，平均（20.5±2.3） kg/m2。正常对照组28例，为健康体检或自愿者，年龄20~70岁，平均（49.8±8.5）岁，BMI 17.9~30.0 kg/m2，平均（21.0±2.3） kg/m2。两组的年龄、性别及BMI比较，差异无统计学意义（P>0.05）。所有患者及对照组均无高血压、糖尿病、肿瘤、妊娠、内分泌疾病及其他自身免疫病。
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1.2 标本采集及检测方法
受试者隔夜14 h采集空腹静脉血5 ml。其中1 ml用15％EDTA-K2。抗凝后在ALIFAXS.P.A公司的TEST-I型全自动血沉仪上测定血沉（ESR），其余4 ml离心后分离血清，置-70℃冰箱保存用于其他项目检测。α1-酸性糖蛋白（α1-acid Glycoprotein，AAG）和C-反应蛋白（CRP）测定采用免疫比浊法，在IMMAGE仪器上检测，试剂由美国贝克曼库尔特公司提供。类风湿因子（RF） 测定采用免疫速率散射比浊法（上海申能公司）。肿瘤坏死因子α（TNF-α）测定采用放射免疫分析（RIA）法。空腹血清Vaspin浓度采用酶联免疫法测定（北京爱迪博生物科技有限公司药盒）。
1.3 统计学分析
数据处理采用SPSS 16.0软件完成，数据以均数±标准差（x±s）表示，非正态分布数据均经过自然对数转换。组内自身对比与两组间对比用t检验，指标间的关系判定采用直线相关分析及多元线性回归分析，以P
2 结果
2.1 RA组与对照组生化指标比较
RA组ESR、AAG、CRP、RF、TNF-α显著高于对照组（P
2.2 血清Vaspin水平比较
2.2.1 RA组与对照组血清Vaspin水平比较 RA组血清Vaspin水平明显高于对照组[（1.58±0.20） μg/L vs（0.71±0.09） μg/L]（P
2.2.2 RA患者活动亚组与非活动亚组血清Vaspin水平比较 RA患者活动亚组血清Vaspin水平明显高于非活动亚组[（1.98±0.15 ） μg/L vs（1.32±0.12） μg/L]（P
2.2.3 不同性别血清Vaspin水平比较 RA组和对照组中所有女性患者血清Vaspin高于男性患者，其中，RA组、对照组中女性患者血清Vaspin分别低于男性患者，但差异均无统计学意义（P>0.05）。
2.3 血清Vaspin水平与其他指标相关性分析
RA组血清Vaspin与TNF-α及CRP呈正相关 （r=0.64， P
3 讨论
近年来研究表明脂肪因子如leptin、adiponectin、resistin、visfatin不仅参与糖脂代谢的调节，而且在调节免疫反应及炎症反应中具有重要作用并与RA发病及RA的严重程度密切相关[7-12]。Vaspin是由内脏脂肪组织分泌的一种属于丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族的细胞因子，与肥胖和胰岛素敏感性有关。Ladislav Senolt等研究发现RA患者滑膜液Vaspin水平明显高于骨关节炎患者，滑膜液Vaspin水平与DAS28有相关的趋势[6]。提示血清Vaspin可能在RA患者炎症反应中发挥了重要的作用。为此，本研究测定了RA患者血清Vaspin水平，并与正常人群进行比较，结果发现RA患者血清Vaspin水平明显高于对照组，RA患者活动亚组血清Vaspin水平明显高于非活动亚组。这进一步提示Vaspin参与了RA的发病，在RA的发病机制中具有重要的作用。
类风湿关节炎（RA）是一种以关节组织慢性炎症性病变为主要表现的自身免疫性疾病，其关节压痛、肿胀都与炎症存在一定关系，许多细胞因子参与了其病理过程，其中肿瘤坏死因子（TNF-α ）被认为在RA 的细胞因子网络中起中心作用，通过多种途径参与关节的炎症反应，促进滑膜细胞增殖和介导关节软骨及骨质损害；α1-酸性糖蛋白（AAG）和CRP一样，都属于急性时相反应蛋白，可反映RA病情的活动性，可作为判断RA疾病活动性的指标之一；CRP、血沉（ESR）、类风湿因子（RF）均已被认为与本病活动性有一定关系。目前证据表明上述细胞因子在类风湿关节炎患者中均有异常升高。
本研究实验结果表明RA患者ESR、AAG、CRP、RF、TNF-α 较正常对照组明显增高，这与国内外相关研究结果类似。相关分析发现血清Vaspin水平与TNF-α、CRP成明显正相关，而与AAG、ESR、RF无相关性。多元回归分析表明血清TNF-α是影响RA患者血清Vaspin水平的独立相关因素。这些结果进一步提示Vaspin与 RA的发生和发展可能具有重要的关系。但是促进炎症发生还是对炎症具有抑制作用现在也没有明确的定论。本研究通过查阅文献及归纳分析，推测Vaspin可能在RA患者炎症反应中对机体发挥一定的保护作用，其升高可能提示了其在炎症状态下的一种代偿机制，这与2型糖尿病患者及肥胖患者血清Vaspin水平升高是IR的一种代偿性机制相类似，但其作用的具体环节及机制尚需进一步研究。
实验中笔者还发现女性血清Vaspin水平较男性有升高趋势，但差异无统计学意义。直线相关分析也提示了血清Vaspin水平与性别不相关。这在文献中也有报道，但原因还未明了，可能是女性雌激素和孕激素对脂肪细胞分泌具有促进作用。
综上所述，本研究结果表明RA患者血清Vaspin水平明显升高，与炎症反应指标TNF-α、CRP成明显正相关。因此，笔者推测Vaspin可能是一种在RA患者炎症反应中对机体发挥保护作用的脂肪细胞因子，而其具体的作用机制，尚需进一步研究。
[参考文献]
[1] Hida K, Wada J, Eguchi J, et a1. Visceral adipose tissue-derived serine protease inhibitor: a unique insulin-sensitizing adipocytokine in obesity [J]. Proc Natl Acad Sci,2005,102(30):10610-10615.
[2] Zvonic S, Lefevre M, Kilroy G, et al. Secretome of primary cultures of human adipose-derived Stem cells: modulation of serpins by adipogenesis [J]. Mol Cell Proteomics,2007,6(1):18-28.
[3] Kloting N, Berndt J, Kralisch S, et al. Vaspin gene expression in human adipose tissue: association with obesity and type 2 diabetes [J]. Biochem Biophys Res Commum,2006,339(1):430-436.
[4] Youn BS, Kloting N, Kratzsch J, et al. Serum vaspin concentrations in human obesity and type 2 diabetes [J]. Diabetes,2008,57(2):372-377.
本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文
[5] Seeger J, Ziegelmeier M, Bachmann A, et a1. Serum levels of the adipokine vaspin in relation to metabolic and renal parameters [J]. J Clin Endocrinol Metab,2008,93(1):247-251.
[6] Senolt L, Polanska M, Filkova M, et a1. Vaspin and omentin: new adipokines differentially regulated at the site of inflammation in rheumatoid arthritis [J]. Ann Rheum Dis,2010,69(7):1410-1411.
[7] Lago F, Dieguez C, Gomez Reino J, et al. Adipokines as emerging mediators of immune response and inflammation [J]. Nat Clin Pract Rheumatol,2007, 3(12):716-724.
[8] Tilg H, Moschen AR. Adipocytokines: mediators linking adipose tissue, inflammation and immunity [J]. Nat Rev Immunol,2006,6(10):772-783.
[9] Bokarewa M, Bokarew D, Hultgren O, et al. Leptin consumption in the inflamed joints of patients with rheumatoid arthritis [J]. Ann Rheum Dis,2003,62(10):952-956.
[10] Schaffler A, Ehling A, Neumann E, et al. Adipocytokines in synovial fluid [J]. JAMA,2003,290(13):1709-1710.
[11] Senolt L, Housa D, Vernerova Z, et al. Resistin is abundantly present in rheumatoid arthritis synovial tissue, synovial fluid, and elevated serum resistin reflects disease activit [J]. Ann Rheum Dis,2007,66(4):458-463.
[12] Brentano F, Schorr O, Ospelt C, et al. Pre-B cell colony-enhancing factor/visfatin, a new marker of inflammation in rheumatoid arthritis with proinflammatory and matrix-degrading activities [J]. Arthritis Rheum,2007,56(9):2829-2839.
（收稿日期：2011-05-03）
向雷锋学习范文6
【摘要】 目的 观察通痹灵对体外培养的类风湿关节炎(RA)滑膜细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响，探讨其可能的作用机制。方法 行关节腔镜手术取RA患者膝关节滑膜组织消化分离滑膜细胞进行分组培养。空白对照组：含生理盐水＋10%胎牛血清的DMEM培养；通痹灵低剂量组：50 mg/L通痹灵＋10%胎牛血清的DMEM培养；通痹灵高剂量组：200 mg/L通痹灵＋10%胎牛血清的DMEM培养。提取总RNA，逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组VEGF mRNA的表达。结果 通痹灵高、低剂量组VEGF mRNA表达较对照组明显降低(P＜0.05)。结论 通痹灵可以下调RA患者滑膜细胞VEGF mRNA表达水平，从而可以通过抑制VEGF表达减轻滑膜血管翳增殖。
【关键词】 通痹灵；类风湿关节炎；滑膜细胞；血管内皮生长因子
Abstract：Objective To study effect of Tongbiling (TBL) on VEGF mRNA expression in RA synovlcytes cultured in vitro and explore its mechanism. Method Synovial cells from the knee joint in patient with RA were digested， pided and separately cultured after arthroscopy. Blank controls：DMEM culture containing 10% FBS in saline；Low-dose admission group of TBL：DMEM culture containing 10% FBS in 50 mg/L TBL；High-dose admission of TBL：DMEM culture containing 10% FBS in 200 mg/L TBL. RNA were distilled. Expression of VEGF mRNA were detected with RT-PCR. Result Compared with control group， expression of VEGF mRNA in low and high-dose admission groups of TBL both decreased (P
Key words：Tongbiling；rheumatoid arthritis；synovial cell；vascular endothelial growth factor
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是以损害全身多关节特别是四肢小关节为主的慢性自身免疫性疾病，主要表现为慢性、对称性、进行性多关节炎，其典型的病理特征为炎症滑膜增生、单核细胞浸润和新生血管形成。关节滑膜的慢性炎症、增生，形成血管翳，侵犯关节，最终导致关节畸形和功能丧失。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是最有力的血管生成因子，在RA病理过程中起着关键作用[1-2]。本实验就其对体外培养RA患者膝关节滑膜细胞VEGF基因水平的影响进行研究，进一步明确通痹灵对血管新生的影响。
1 材料与方法
1.1 主要试剂与仪器
通痹灵浸膏(由桂枝、芍药、知母、生姜、甘草、麻黄等10味中药组成，广州中医药大学热带病研究所植物化学分析室提取，每克浸膏相当于原药材3.45 g)，DMEM(美国GIBCO公司生产)。胎牛血清(fetal bovine serum，FBS，杭州四季青公司生产)，胶原酶、胰蛋白酶、焦碳酸二乙酯(diethylpyrc arbonate，DEPC，美国GIBCO公司生产)，PCR marker(北京鼎国生物技术发展中心)，RT-PCR通用试剂盒及β-Actin引物(大连宝生物工程有限公司)，Primer软件设计及VEGF基因扩增引物(赛百胜公司)。CO2恒温培养箱(德国HERAEUS公司生产)，倒置相差显微镜、荧光显微镜(日本OLYMPUS公司生产)，超净工作台(苏州净化设备厂生产)，核酸蛋白成像仪(Pharmacia公司)，核酸蛋白分析仪(Beckman公司)，电泳仪及水平电泳槽(美国Bio-Rad公司)，PCR仪(美国PERKIN EIMER公司)，低温高速离心机(SIGMA公司)，常温低速离心机(北京医用离心机厂)，分光光度计(Beckman公司)，电转仪(美国Bio-Rad公司)。
1.2 类风湿关节炎患者滑膜细胞的分离提取及培养
RA患者肿胀的膝关节行关节腔镜手术取滑膜组织。将所取标本倒入玻璃皿中，用Hanks液洗涤3次，用眼科剪反复剪碎组织约2～3 mm2大小，加入含10%胎牛血清的DMEM和0.2%胶原酶(终浓度为0.2%)，移入75 cm2培养瓶中，37 ℃、5%CO2培养箱中消化10 min；反复吹打后移入离心管，1 000 r/min离心10 min；弃去上清液，加入2 mL含10%胎牛血清的DMEM吹打终止消化；用200目钢网过滤后1 000 r/min离心10 min，去上清液，加入含10%的DMEM 2 mL吹打均匀，移入75 cm2培养瓶中于37 ℃、5%CO2培养箱中培养，观察细胞生长情况。生长3 d后细胞生长良好，长满培养瓶，消化分瓶，定时观察换液，长到一定数量后冻存部分细胞保证以后备用，剩余部分维持培养，取7～10代用于实验，每瓶待细胞长至约0.8×107时施加作用因素。空白对照组：含生理盐水＋10%胎牛血清的DMEM培养；通痹灵低剂量组：1.5 μg/mL通痹灵＋10%胎牛血清的DMEM培养；通痹灵高剂量组：150 μg/mL通痹灵＋10%胎牛血清的DMEM培养。待施加因素后培养72 h，细胞生长至107时进行裂解细胞提取总RNA。
1.3 总RNA提取
取培养的滑膜细胞消化离心，用PBS洗涤3次，加入0.8 mL RNAsol完全裂解细胞，转移裂解液至1.5 mL EP管中，加入80 μL氯仿，水平震动10 s，冰浴5 min，40 ℃低温离心机10 000 r/min离心20 min，吸取上清液移至另一EP管中，加入等量异丙醇完全混合后冰浴20 min，40 ℃低温离心机10 000 r/min离心20 min，去上清液，用1 mL 75%乙醇洗涤沉淀物，小心倒去乙醇，自然风干10～15 min，加入适量DEPC H2O溶解。
1.4 RNA样品鉴定
①电泳：取RNA样品5 μL，用1%琼脂糖凝胶电泳可见3条电泳带(见图1)；②吸取5 μL入核酸和蛋白分析仪的吸光度测量管，测λ＝260 nm吸光度(管中另加DEPC H2O补至1 mL，等于稀释200倍)。取2 μL做反转录反应。
1.5 反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)
反应利用PCR扩增仪进行。①RT反应合成cDNA：取5 μL总RNA加热70 ℃ 5 min，以破坏其二级结构；在20 μL反转录反应体系中进行，1 μL AMV反转录酶、2 μL总RNA、2 μL dNTP、4 μL MgCl2、2 μL 10-RT Buffer、7.5 μL DEPC H2O、0.5 μL RNase Inhibbtor、1 μL Random 9 mers；30 ℃反应10 min，40 ℃反应30 min，99 ℃变性5 min，5 ℃ 5 min。②PCR反应：在50 μL反转录反应体系中进行，8 μL cDNA、1 μL VEGF引物(正、反向引物各0.5 μL)、0.25 μL TakaRa Ex TaqHs、10 μL 5×PCR Buffer、28.75 μL DEPC H2O、2 μL β-Actin；VEGF引物：上游引物5’-GTG CGA GCA GCG AAA GCG C-3’，下游引物3’-CGA CAA GAG CGA AGC CGA A-5’；β-actin：上游引物5’- GAG GGA AAT CGT GCG TGA C-3’，下游引物5’-CTG GAA GGT GGA CAG TGA G-3’，94 ℃预变性2 min，94 ℃变性30 s，60 ℃退火30 s， 35个循环；72 ℃延伸3 min，4 ℃保存。
1.6 DNA琼脂糖凝胶电泳
配制1%琼脂糖凝胶，内含0.5 μg/mL的溴化乙锭，电压设定为100 V；加入10 μL靶基因与2 μL DNA Buffer混合液上样进行电泳40 min。
1.7 电泳条带测定及成像
电泳条带用凝胶成像系统拍照并进行电泳条带光密度分析，以VEGF标本靶基因条带光密度参数与内参基因(β-Actin)条带的光密度参数之比值作为该标本VEGF mRNA的表达水平参数。
1.8 统计学方法
采用SPSS11.0 for Window统计软件进行方差分析。
2 结果
2.1 反转录多聚酶链式反应结果
我们设计的VEGF引物可以检测到的主要是VEGF165，结果表明该细胞系表达的以VEGF165为主，经RT-PCR扩增后的VEGF165为528 bp，经电泳检测，VEGF条带清晰可见，β-actin为759 bp，其条带清晰可见，无杂带出现(见图2)。
2.2 半定量结果
电泳图像分析扫描仪扫描电泳条带得到VEGF与β-Actin条带各自的峰面积积分值，计算各样品的VEGF与β-Actin的比值。结果见表1。表1 通痹灵作用于RA滑膜细胞后VEGF mRNA的表达(略)
3 讨论
近年来的研究表明，VEGF在RA病理过程中起着关键作用，尤其在RA早期滑膜血管翳形成过程中，VEGF通过与其受体结合发挥生物学作用[3]，可增加血管通透性，提高炎性渗透，促进内皮细胞生长、迁移和新生血管形成[4]。RA的滑膜和滑膜液中富含VEGF，滑膜及滑膜液的VEGF表达有助于血管的渗透和血管新生[5]。
前期的大量研究已经证实，通痹灵对多种细胞因子有明显的干预作用，其中对CIA大鼠滑膜VEGF有明显抑制作用[6]。本实验应用通痹灵作用于体外培养的RA滑膜细胞，结果显示，其高、低剂量组对VEGF mRNA的表达较空白对照组均明显降低(P＜0.05)，表明通痹灵可抑制VEGF mRNA表达。结合前期实验研究结果可以看出，通痹灵在VEGF蛋白及基因表达两个水平均可起到下调作用，但究竟是二者同时抑制还是通过抑制基因表达从而阻断翻译过程的进行，或者通过阻抑其他调节VEGF表达的因子而起到作用尚不得而知，仍需进一步研究。然而，该药物临床上治疗RA疗效明显，能够在多个环节、多个靶点起到调节作用。本实验旨在探讨通痹灵在血管内皮细胞有丝分裂增殖、血管新生和血管翳形成等机制中所表现的作用，推测通过抑制VEGF及其基因表达减少、滑膜新生血管的形成，乃至骨质侵蚀破坏、血管通透性增高、炎性物质外渗等一系列病理环节中起到阻抑作用可能是其作用机制之一。
参考文献
[1] T Pufe， W Petersen， B Tillmann， et al. Splice variants VEGF121 and VEGF165 of the angiogenic peptide vascular endothelial cell growth factor are expressed in the synovial tissue of patients with rheumatoid arthritis[J]. J Rheumatol，2001，28(7)：1482－1485.
[2] M Harada， K Mitsuyama， H Yoshid， et al. Vascular endothelial growth factor in patients with rheumatoid arthritis[J]. Scand J Rheumatol，1998，27(5)：377－380.
[3] Zeng H， Dvorak HF， Mukhopadhyay D. Vascular permeability factor(VPF)/vascular endothelial growth factor(VEGF) receptor-1 down-modulates VPF/VEGF receptor-2-mediated endothelial cell proliferation， but not migration， through phosphatidylinositol 3-kinase-dependent pathways[J]. J Biol Chem，2001，276：26969－26979.
[4] Senger DR， Gaci SS， Dvorak AM， et al. Tumour cells secrete a vascular permeability factor that promotes accumulation of ascites fluid[J]. Science，1983，219：983－985.
