兰州大学调剂范文1
关键词：中国石油；催化裂化；专利信息；专利检索；战略分析
中图分类号：G306 文献标识码：A 文章编号：1006-8937（2013）03-0080-02
流化催化裂化（Fluid Catalytic Cracking，简称FCC）是炼油厂重油轻质化生产汽油的核心工艺，是原油二次加工中最重要的加工过程。催化裂化催化剂作为催化装置的核心技术之一，其反应性能特点决定了催化装置产品分布和整体经济效益；催化裂化催化剂主要是Y型沸石分子筛微球催化剂。
中国石油石油化工研究院兰州化工研究中心（以下简称兰州中心）多年来一直致力于Y型沸石分子筛微球催化剂的研究开发工作，开发了全合成、半合成、全白土三大类型的沸石催化裂化催化剂。目前其催化裂化催化剂在中国国内市场占有率达到39%，在中国石油内部市场占有率达到了80%以上。在催化剂研发过程中，兰州中心注重专利信息的利用，提升创新的水平，在产生创新成果后，知识产权管理部门和研发单位积极组织将关键技术及时申请专利，形成知识产权保护。
1 面临多方挑战加强专利信息工作
目前，催化裂化技术面临挑战：世界范围内原料不断劣质化和重质化，市场对轻质油品需求却不断增加；传统催化裂化以多产汽油为主，目前欧美发展趋势为多产柴油馏分；燃料生产对炼油化工一体化低成本低碳烯烃生产的需求；市场需求波动大，产品必须不断调整，满足在不同产品方案之间灵活切换；清洁生产与节能减排压力大。开发FCC催化剂和工艺技术是快速提升中国石油重质油加工水平和国内外市场竞争力的重要途径；在FCC催化剂整体性能达到国际先进水平后，开发低成本生产技术是走向国际先进市场的关键之一；加强清洁生产技术以及清洁燃料产品开发，降低催化剂制造过程的污染物排放。开发满足各种性能要求的催化裂化催化剂关键在于：深入研究重油分子催化裂化转化模式，在拥有核心专利技术的基础上，指导催化新材料和系列重油催化剂的开发，围绕FCC反应过程增产丙烯、降低汽油烯烃、增加汽油辛烷值、提高重油转化、增强抗重金属污染等技术形成系列催化裂化催化剂，让核心技术根据市场需求、用户特点不断改进，扩展发展空间，形成专利网，更好地保护系列催化剂，最大化提高总液收和汽油辛烷值，适当增加低碳烯烃产率，实现效益最大化。
越来越多的期刊文献、论文的发表，以及竞争对手大量的专利申请，在信息共享的同时，也对技术开发、研究、保护、实施造成了一定的障碍。要使技术创新拥有专利必备的“三性”条件，必须检索全面、分析到位、保护方式选择得当，对企业知识产权管理水平提出更高的要求。
同时，由于石油化工领域中，国内几大石油公司、研究院所、大学研究领域重叠，信息传播速度的加快和其便捷性有助于技术的相互借鉴，知识产权保护意识增强，研究水平得以迅速提高，相同或类似的创新时有发生，侵权预警越来越重要。
技术达到国际先进水平后，走向国际先进市场是企业发展必然的选择，需要决策海外申请专利的时机，选择技术输出国家，规避其有效专利。
兰州中心拥有一批催化裂化技术人员，也拥有一批专业的企业专利信息工作者，根据上述需求，企业开展了包含专利文献在内的检索及分析工作。
2 专利检索是专利信息利用的首要基础
在催化裂化催化剂的检索中，企业专利信息工作者和技术人员首先非常注重期刊、学位论文和会议论文数据库等非专利文献的检索，企业拥有清华同方、维普、万方数据库，并且充分利用国家科技图书馆、SCI finder进行期刊、学位论文和会议论文的检索。专利信息工作者和技术人员将非专利文献的检索纳入到专利申请前“三性检索”范围之中。
企业充分利用石油化工专利信息平台、国家知识产权局检索系统、欧洲专利局、美国专利数据库、日本专利数据库等免费专利数据库；另外企业还购置了Thomson innovation收费专利数据库。在检索过程中，注重检索式的制定，将国际专利分类（IPC分类）和关键词相结合，从检索结果的查全率和查准率对检索式进行调整和优化。检索目的不同，检索式的制定会存在差别。明晰行业发展状况，制定领域战略时，其检索式的制定相对比较的宽泛，在中国专利数据库中，其检索式为：摘要/权利要求=（催化裂化 or FCC）and IPC=（b01j or C10G）。
兰州中心注重专利信息的利用与优化，在中国石油与国家知识产权局合作共建的“中国石油石化专利信息平台”上，兰州中心凭借资源、人才优势还自行开展了专利数据深加工的工作，对已有的中国石油化工专利导航系统进行了改进，目前已在石油化工类别有选择地做了29个类别的三级导航，大幅度提高了查准率，进一步突出了功能化服务，提高了数据库的利用率。在三级导航中其中一个导航是“催化裂化催化剂”，将检索式固化在系统中，无需检索人输入检索词，实现“一站式服务”，直接点击便可得到检索结果。
在进行专利申请的三性评判、新产品的上市、技术或产品出口前检索等工作中，兰州中心注重技术的实际创新点，从催化剂的组成、制备方法的角度进行检索。
催化裂化催化剂的最重要组成为Y型分子筛，兰州中心对其也开展了大量的研究，其开发的含有原位晶化型NaY型分子筛的催化裂化催化剂（全白土催化剂）在业内享有声誉。在检索式的制定过程中，我们注重其原料和工艺条件的特点，选择了粘土、高岭土、原位晶化、水热晶化、分子筛、沸石作为关键词，以C10G、C01B为分类号，在数据库中进行检索。在中国专利数据库中拟订的检索式为：（摘要/权利要求=（粘土or高岭土）and（原位晶化or水热晶化or水热合成） and（分子筛 or 沸石） and （Y or NaY）） and （IPC=C10G or C01B））。该检索结果主要提供给管理层或技术人员了解技术进展、初步的技术领域专利保护和分析使用。
技术人员在进行技术研究和申请专利前的分析时，要对检索式做进一步的限定，如催化剂中含有其他必须的组分或制备中必须加入必要的原料等。
总之，针对不同的检索目的和技术制定不同的检索式，保证检索结果的准确并避免漏检情况的出现。
在检索国外专利数据库时，对检索词的修正有时要参见中国专利文献的命中情况，查漏补缺。
3 积极开展专利信息的分析与利用
3.1 战略分析
技术人员和专利检索人员在不断检索、总结过程中，建立了催化裂化催化剂数据库。将检索的大量相关专利进行归纳总结，包括专利名称、专利申请号、说明书摘要、说明书全文、专利申请人、专利申请日、同族专利等信息，建成了相应的数据库并定期更新数据。
对于检索出的大量相关专利从其技术内容上逐一筛选，结合情况分析所确立的经营目标，通过对检索出的专利的说明书摘要的分析，挑选出对所确立的经营目标的相关技术领域有密切关系和重大影响的专利，并提取其全部专利说明书，作为专利战略所要研究分析的关键专利，供下一步进行深入详尽的研究。同时，也要对这些挑选出的关键专利进行数据采集，并对这些数据和在上一检索步骤中所采集的数据进行分析对比，从中可以定性和定量的得出关键技术与相关技术发展状况和未来趋势、市场分布、各竞争者间势力范围的划分等多方面的结论。
关注重点公司、尤其是竞争对手的专利信息，对其进行重点研究和分析，以抗重金属钒催化裂化催化剂为例，该催化剂的特点是高沸石含量或小晶粒，大比表积，一般说来全白土型和半合成型催化剂的性能较为优越。在这种背景下，技术人员对恩格哈德、Grace公司的催化裂化催化剂进行重点的关注，发现其核心技术后，利用专利的引证、同族专利的信息更加充分的了解核心技术。
3.2 项目研究
{1}开题前检索。首先应该进行的国内外期刊文献检索，特别是对综述性文献的检索，了解本领域技术发展现状，各种工艺路线的特点，选择拟定要进行的研究所采用的基本技术方案，确定之后，以此为方向对国内外专利文献进行检索，了解更深层次的技术研究状况。
{2}研发进行中的检索。有助于研究者获取最新的技术知识，有助于缩短研究时间，避免重复研究；从中启发开拓研究者的创新思路，有利于掌握竞争对手的技术发展状况，及时采取相应的对策，专利文献对技术的阐述更为详细，数据更为可靠。检索的重点在于竞争对手专利的跟踪和中国的专利检索，国外的可以直接借鉴、国内的避免雷同，监视法律状态，谨防侵权。
{3}申请专利前的检索。主要检索国内外期刊文献检索、国内外专利文献。国外的期刊文献最好是对美国化学文摘（CA）检索，国内最好检索《中国学术期刊》、《中国期刊网》，有条件的可以检索重庆维普数据库、清华同方数据库、万方数据库，国外专利主要检索：美国专利数据库、欧洲专利数据库、日本专利数据库，也可以委托国家知识产权局进行国内外专利检索。其目的要对发明创造的技术内容进行检索，以使其满足“新颖性”、“创造性”要求，以专利形式加以保护。
3.3 技术或产品出口前检索
仅检索出口国家就本项目是否有他方申请专利、授权状况、是否维持有效，排除侵权。
4 专利信息利用的效果
兰州中心充分利用专利信息开展技术创新工作，并注重自主创新的过程中的知识产权保护。经过多年的研发，目前，企业涉及Y分子筛催化裂化催化剂专利申请累计近140项，授权60余项项，其中国外申请8项，授权3项。“十一五”期间申请专利40余项，2011年申请专利达到18项。
目前石油化工研究院包括Y分子筛催化剂在内的催化裂化催化剂专利申请量已达160余项，成功开发了六大系列24个牌号的催化裂化催化剂产品，产品在全国60余家炼厂进行了工业应用，应用效果良好，为企业创造了巨大的经济效益。以高辛烷值催化裂化催化剂为例，该系列催化剂在国内数家装置应用，仅以辛烷值增加1项计算，在不增加投资的情况下，一年可以为3家炼厂新增效益4亿元以上。兰州化工研究中心自主创新催化裂化催化剂产品比例占兰州石化催化剂厂的90%以上，目前已经在苏丹喀士穆炼厂，阿尔及利亚炼厂等国外炼厂进行了工业应用，效果良好；该厂于2011年通过了美国雪佛龙、壳牌、埃克森美孚等三家国际公司的供货商资质认证。同年，中国石油与雪佛龙公司（Chevron）美国盐湖城炼油厂成功签订了2000t催化剂订单，首批试用86t，这标志着兰州化工研究中心研发的催化裂化催化剂正式进入北美市场。
催化裂化催化剂由于其良好的性能和广泛原料的适应性，跻身先进催化剂行列，并获得了国家科技进步二等奖两项、金桥奖、中国专利优秀奖2项（其中1项专利获得2010年第12届中国专利金奖提名）。优秀的团队中也产生了拥有“甘肃省科技功臣”、“何梁何利基金科学与技术创新奖”、“第十一届中国青年科技奖”等多项荣誉的优秀个人。
参考文献：
兰州大学调剂范文2
1月20日，作为甘肃兰州“名片”的牛肉拉面，2014年末经一博士团队改良研制后，变身全国首款原汤型可携带食品在网络平台上热卖。“网络牛肉面馆”创始人之一的邓毓博是兰州本地人，他2011年从兰州大学应用数学专业博士毕业后又去北京攻读博士后，随后供职于国内一所“985”高校。一次偶然的机会，他的博士后同学熊永平说出了自己在兰州旅游时，曾有连吃两碗牛肉面的经历，这深深打动了自小就有牛肉面情结的兰州人邓毓博。
“是否能够发明一种口味地道、安全健康、操作简单的牛肉面，让全国各地的人不来兰州，也能吃到一碗正宗的牛肉拉面？”为了把这个想法付诸实践，邓毓博、熊永平两人联合另外一名博士生与两名硕士生分别辞去了他们此前所从事的工作，于2013年9月开始筹备开设“网络牛肉面馆”。
邓毓博知道，要做正宗的兰州牛肉面，首先要保证肉汤和辣椒油的品质。为此该团队找到了一位兰州本地从事牛肉面行业30余年的回民老师傅，多次上门拜访取经。从老师傅那里学到牛肉面肉汤和辣椒油的独特配方以及关键技艺后，博士团队在甘肃平凉一家加工厂进行了为期8个月的反复试验，终于摸索出了工业化生产兰州牛肉拉面的全部核心技术，并申请到了3项国家发明专利。
目前，“网络牛肉面馆”将原汤熬好后，用真空灌装至马口铁罐头内并采取高温高压杀菌方式保存；而拉面则采用低温晾干的方式处理。这样一来，实现了产品在零添加防腐剂的情况下也能保质一年的出色效果。
“网络牛肉面馆”一经推出，销售量飙升。对于博士团队的转行，他们的家人起初均不能理解，但通过他们一再解释，只是想更广泛地传播讲述兰州牛肉拉面正宗的故事这份执着的精神，同时缓解异地食客的乡愁，家人也就逐渐理解了他们。
兰州牛肉面的网络版
这款原汤型兰州牛肉拉面的创始人邓毓博，是兰州大学应用数学专业博士，计算机专业博士后，曾在兰州大学信息学院任教。邓毓博告诉记者，他的“牛大坊兰州牛肉拉面”研发团队核心成员有5人，其中有2个硕士，1个博士，2个博士后。
在一次闲聊时，团队成员熊永平无意中说出自己在兰州旅游时，曾有一次连吃两碗牛肉面的经历。熊永平说，兰州街头的牛肉面好吃，口感朴实，能不能发明一种口味地道、安全健康、操作简单的牛肉面，让全国各地的人随时随地都能吃上一碗正宗的兰州牛肉面？几个人一拍即合，说干就干。2013年9月，团队开始着手调研。
作为土生土长的兰州人，邓毓博知道，要做正宗的兰州牛肉面，首先要保证肉汤和辣椒油的品质。邓毓博团队找到了一位兰州本地从事牛肉面行业30余年的老师傅，多次上门拜访取经。起初，老师傅不能理解，觉得网上销售牛肉面不现实……
经过邓毓博他们的再三请求，老师傅答应帮忙试试。“老师傅觉得能让全国各地的人吃到地道的兰州牛肉面，总归是好事。”从老师傅那里学到牛肉面肉汤和辣椒油的独特配方以及关键技艺后，他们开始了反复试验。
“煮牛肉汤要用大锅，我们买了好几口大锅，一次买20多斤生牛肉。每一次煮完汤后冰箱里就塞满了熟牛肉，我们几个经常拿着熟牛肉四处送人……”90多天的时间里，邓毓博和几个伙伴几乎天天喝牛肉汤，为的就是调出味道正宗的牛肉汤。
除了汤，面也是重要因素。为了能找到口感好、适宜长途运输的面条，邓毓博团队将超市、农贸市场、淘宝网上适合的面条全都买了回来，逐个试吃。“要找到合适的面条，还真是要费些功夫。我们吃了近5个月的面条，挂面、湿面、真空冻干面、烘干面等全都吃过了……”邓毓博说。
功夫不负有心人。经过8个月的反复试验，一款零添加防腐剂，保质期一年的“网络版牛肉面”问世了：熬好的牛肉汤高温高压杀菌后，真空灌装至易拉罐。拉面采用以低温晾干方式处理的皋兰和尚头手工面。香菜、蒜苗也经过真空冻干处理……
为了让这款网络版的兰州牛肉面原汤更加地道，邓毓博邀请了近500名兰州本地人和200余名外地人进行了试吃。“试吃后，大家都比较认可。”邓毓博说。
“2014年10月，我连续加班10天，特地准备了200多个牛肉面礼盒，在我表弟的婚礼上，送给每位来宾。”邓毓博的推广创意没有白费，客人们对这个礼盒好评不断，有的宾客还提出了一些建议。尽管当时还没有开始销售，但已有不少人打听在哪里有售，希望购买一些送给外地的亲朋。
目前，这款原汤型兰州牛肉面除了新疆、、内蒙古等几个不包邮的省份没有订单外，其他省份均有人购买。火爆的销售情况，让邓毓博始料未及。“我们最初只准备了5000份产品，准备一至两个月消化掉……现货销售一空后，我们只能进行预售。”2014年12月20日，第二批预售的3000份牛肉面开始陆续发货。
12月20日，当记者见到邓毓博时，他正和几个朋友在办公室忙碌着。为了防止运输过程中出现破损，他们几个人在快递箱里垫上气泡垫，并在箱子上贴上“易碎品”标识。
“没想到在南方现在也能吃到这么地道的兰州拉面了，牛肉块够大，汤汁鲜爽，辣味纯正，总之赞赞赞！”“确实跟兰州本地的牛肉面很接近，吃完一份不过瘾……”“还是原来的配方，还是熟悉的味道！我在家也能吃到地道的兰州牛肉面！”
上线销售以来，网络版兰州牛肉面收到不少好评，但问题也随之而来，“包装箱纸质太薄，面条被压碎了。”“醋包太满，收到时已被挤破。”邓毓博告诉记者，针对买家提出的问题，团队又进行调整，即将推出第二代“网络版牛肉面”。
“下一步，我们准备在兰州建生产车间，还会推出重口味牛肉汤。面条的种类也将更加齐全，如毛细、二细、韭叶、大宽等，以满足不同顾客的口味需求……在兰州牛肉面馆里能吃到的，网上也将应有尽有。”邓毓博说。
“我们的愿望是让全国各地甚至国外的客人，随时随地都能吃到与在兰州街头一样的牛肉面。”邓毓博说。
铁杆“粉丝”的点评
兰州市民陈剑是牛肉面的铁杆“粉丝”，兰州市稍有些名气的牛肉面馆他几乎都吃遍了。12月1日，当他看到网上销售“原汤型兰州牛肉拉面”时，抱着试一试的态度买了2份。
3天后，陈剑收到了快递。打开包装，牛肉汤、手工拉面、蒜苗、香菜、萝卜、油泼辣子、醋，一应俱全。
根据包装盒上的“食用方法”，陈剑先将肉汤倒入锅中，放入香菜、蒜苗和萝卜，加热至沸腾后，将牛肉汤倒入煮好的面中，最后再放入辣椒油和醋。汤清萝卜白，辣椒红蒜苗绿，一碗热气腾腾、香气四溢的兰州牛肉面新鲜出锅了。
兰州大学调剂范文3
黄河的污染日益严重，有关部门已经开始加强管理，例如：
2003年枯水期黄河兰州段主要污染物中氟化物、化学需氧量、六价铬、总磷、锌、高锰酸盐指数和阴离子表面活性剂的平均浓度，较2002年同期均有不同程度的上升，其中六价铬、锌和总磷较为明显。
兰州水源地上游重点污染源：兰州维尼纶厂、五O四厂等单位因资金等方面的原因，迟迟未将废水纳入西新线排污管道，废水直排黄河，对饮用水源地构成了严重的污染陷患。
兰州市内的油污干管于上个世纪50年代建成，现已超期服役，存在严重的污染隐患。兰州市政府建议市人大督促有关方面要求中石油兰州石化公司结合产业结构、能源结构调整和技术改造，做到污水达标排放并减少污水排放量，同时在新建项目时，一并考虑建设一条新的排污干管，废弃油污干管。由此可见，黄河如果再不好好管理，就会造成很大的经济损失。所以请全国的人民一起来保护黄河，救救我们的母亲河……
兰州大学调剂范文4
关键词：甘草 清真 皂化反应 抑菌实验
中图分类号：TQ648.63 文献标识码：A 文章编号：1007-3973（2013）011-024-03
香皂是人们所熟悉的一种最为普通和广泛使用的洗涤用品之一，随着社会的发展、人们生活水平的提高和对皮肤保健意识的增强，人们对香皂的要求也在逐年升高，现在香皂不再是年轻妇女的专用品，上至老人下及婴儿无不存在其消费者。甘草既是一种好的药用性植物，又是一种好的美白、防晒、抑菌等的原料，其有效成分有抗氧、抗过敏、抗炎、抗皮肤肿瘤和有效祛除皮肤色斑的作用，还具有防止皮肤老化、有效清除超氧离子和抑制酪氨酸酶的活性等作用，在化妆品中，可配制成护肤霜、祛斑霜、高级珍珠霜等，起到防晒、增白、消炎和治疗皮肤病等作用，随着对甘草化学成分的深入研究， 人们发现甘草提取物， 特别是甘草中的黄酮对人体的皮肤有较好的美白和防护作用， 且安全、温和、能有效清除氧自由基，因而， 甘草在化妆品中的应用越来越受到重视。因此，把甘草提取物应用于化妆品中，符合集美白、防晒于一体的新趋势，相信不久的将来会有更多含甘草提取物或甘草仿生合成物的化妆品投放市场，以防护、美白人们的肌肤。并且据文献报道，甘草对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌均有明显的抑菌作用。所以我们大胆的设想并通过进一步的探究，将甘草的水提液应用与香皂的制备中。由于市售香皂大部分含有非清真类油脂，不符合伊斯兰教，故为满足伊斯兰群众的信仰理念，为让其能使用到清真香皂，本实验采用牛油、椰子油、棕榈油和橄榄油及抑菌程度好的甘草进行研究，从而制备出一种新型甘草香皂。
1 实验材料
1.1 器材
烧瓶、玻璃棒、温度计、小刀、铁器杯子、98-1-B型电子调温电热套、铁架台、香皂磨具、滴管、搅拌器、试管、勺子、电热板、铁盘、橡皮手套、滤纸、电子称、电磁炉、冰箱。
1.2 抑菌设备
洁净工作台（SW-CJ-2FD），苏州安泰空气技术有限公司，洁净度：100级；数控超声波清洗器（KQ-500DA），昆山市超声仪器有限公司；电热鼓风干燥箱（DHG-9075A），上海一恒科学仪器有限公司；立式压力蒸汽灭菌器（LDZX-50KBS），上海申安医疗器械厂；恒温摇床（HS-200B），上海和呈医疗器械有限公司。
1.3 药材
乌拉尔甘草切片（购于银川市兴庆区古方大药房）。
1.4 原料及试剂
牛油（购于蔬菜市场）；椰子油棕榈油橄榄油（DIY手工皂原料基础油，产于江苏苏州）；氢氧化钠（天津市化学试剂三厂，批号：860314）；十二烷基苯磺酸钠（K12，上海白猫股份有限公司，工业级）；蒸馏水（宁夏医科大学药化实验室）；柠檬酸、二氧化钛、氯化钠、丁羟甲苯（天津市东华化学试剂厂，分析纯）；香精（广州百花香精香料有限公司，食品级）。
1.5 实验菌株
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念球菌、绿脓杆菌（宁夏医科大学检验学院实验中心）。
1.6 培养基
MH（配量27g/1000ml，杭州天河微生物试剂有限公司，生产批号：080731）；MH琼脂培养基（配量54g/1000ml，杭州天河微生物试剂有限公司，生产批号：080810）；营养琼脂（货号：02-276，北京奥博星生物技术有限公司）；营养肉汤（货号：02-013，北京奥博星生物技术有限公司）。
2 实验方法
2.1 处方工艺研究
2.1.1 甘草药液的提取
取甘草切片50g，放入1000ml的平底烧瓶中，量取880ml的蒸馏水，并置于电热套中加热，将温度先调至100℃沸腾之后，再调至50℃进行煎煮，煎煮1h，趁热抽虑，收集药液，药渣重复上述操作煎煮两次，混合三次药液，即为甘草提取液。
2.1.2 甘草香皂油脂的比例及配方
在处方研究过程中，油脂比例直接影响香皂的软硬程度，故是香皂成型的关键所在。各油脂的皂化值及硬度见表1，各油脂的重量及百分比见表2，甘草香皂的配方见表3。
其中：加入NaOH的量=油脂皂唬
水量=（油脂总质量）/72
2.1.3 甘草香皂的制备工艺
皂化：将牛油、椰子油、棕榈油以及橄榄油按比例混合并加热，充分混匀并保持温度在45℃左右。配制30%氢氧化钠溶液，用玻璃棒搅拌控制温度在45℃左右，缓慢加入油液中，不断搅拌数分钟，直至皂液成粘稠的糊状。
加入添加剂：将二氧化钛溶于甘草水提液中，待完全溶解后加入至粘稠状皂液中，边加边搅拌，待搅拌均匀后继续加入十二烷基苯磺酸钠、柠檬酸、氯化钠等添加剂，充分搅拌，最后加入丁羟甲苯及适量香精。
成型：充分搅拌后将皂基注入模具中冷却，原封不动的在温暖的地方放置1-2天。待凝固后从模具中取出，放在通风处，避开日光直晒，即成型。
2.2 抑菌效果评价
2.2.1 培养基的配制
营养琼脂：取琼脂3.2g于100ml蒸馏水中，搅拌煮沸溶解，121℃高压灭菌15 min，分装至培养皿中，制得琼脂平板备用。
兰州大学调剂范文5
1试验方法
1．1试验地概况试验地：位于甘肃省兰州市永登县苦水乡上新沟村的甘肃茂林玫瑰产业公司基地内，土壤肥力中等，土质为粘土，管理一般。树势中等，树龄6年生。害虫发生程度严重，并且分布均匀，无喷试验药剂的历史。气象资料：8月10日施药当天，晴，日平均气温26℃，最高气温30℃，最低气温17℃，调查期间无降雨。
1．2试验设计与处理试验以清水为对照，共设6个处理，每种重复3次，每个重复3株树，共63株数，完全随机区组排列。试验处理及编号如下：Ⅰ，21％噻虫嗪悬浮剂0．17％溶液、Ⅱ，2％阿维菌素乳油0．17％药液、Ⅲ，10％吡虫啉可湿性粉剂0．17％药液、Ⅳ，2％阿维菌素乳油0．17％药液＋10％吡虫啉可湿性粉剂0．17％药液1∶1混合液、Ⅴ，21％噻虫嗪悬浮剂0．03％溶液；、Ⅵ，21％噻虫嗪悬浮剂0．02％溶液、CK清水对照。因株行距比较大（2m×3m），故未用防虫网隔离［3］。药剂喷雾处理：将各药剂按设计的浓度配好后，均匀喷雾树冠，以枝叶正反面完全淋湿为准，每棵树用药2L。在施药时，每换一种药剂处理，都要认真清洗喷雾器3次或3次以上，以防相互影响，喷药时间宜在早晨9∶00左右进行（此时白粉虱迁飞能力很差），在施药后1、3、6、10d调查虫害发生数量。
1．3虫口调查与计数白粉虱活动性强，不易直接计数，故本试验利用白粉虱具有趋黄性的生物学特性，采用黄色粘虫板粗略统计虫口基数［4］。具体方法是：紧挨玫瑰树固定一根与树体差不多高的竹竿，在竹竿上标记上下两点（即每棵树2片粘虫板），每次调查前一天8∶00将黄色粘虫板悬挂于竹竿标记部位，然后次日8∶00取下黄板统计其上诱集的白粉虱虫口数（即统计24h内黄板上诱集的虫数），每次调查均用新的黄板。最后用常规统计方法计算白粉虱成虫死亡率和防效，并对防效进行用邓肯氏新复极差法（DMRT）法对调查数据进行差异显著性分析。
2结果与分析
2．1不同药剂的防治效果施药后1～10d，各药剂处理的结果分别为68．60％、47．34％、49．85％和53．14％，均显著优于对照，其中防效最好的药剂为21％噻虫嗪悬浮剂0．10％药液，最差的药剂为2％阿维菌素乳油0．10％药液，且差异显著。单独使用2％阿维菌素乳油和10％吡虫啉可湿性粉剂的药效均小于二者混合使用的防效，呈显著差异。2％阿维菌素乳油和10％吡虫啉及混合液在施药后3～6d的虫口数量降为最低，防效最高，但是21％噻虫嗪悬浮剂持效期教长，10d时药效仍处于高值（见表1）。
2．2不同浓度21％噻虫嗪对白粉虱的防治效果对于防效最好21％噻虫嗪悬浮剂进行不同浓度的使用试验，结果表明：0．10％溶液的防效最好，与0．03％溶液和0．02％溶液相比具有显著性差异，且呈现出药剂浓度越高防效越低的趋势（见表2）。
3小论
兰州大学调剂范文6
1 甘肃中医学院基础医学院，甘肃兰州730000；2 甘肃中医学院敦煌医学与转化省部共建教育部重点实验室，甘肃兰州730000；
3 兰州大学第一医院，甘肃兰州730000
【摘要】目的：观察敦煌平胃丸对胃癌前病变（PLGC）模型大鼠胃黏膜组织Notch信号通路中Notch2和Jagged1表达的影响。方法：采用复合法建立PLGC大鼠模型，将32只大鼠随机分为4组，每组8只。敦煌平胃丸组用敦煌平胃丸浸膏按每日生药96 g / kg掺入饲料中喂养给药，共计12周。观察大鼠胃黏膜病理组织学变化；采用Western Blot检测Notch2和Jagged1蛋白表达；采用RT-PCR检测Notch2和Jagged1mRNA的表达。结果：PLGC大鼠胃黏膜组织Notch2 与Jagged1mRNA及蛋白表达较正常大鼠胃黏膜组织均明显上调（P＜0 05）。敦煌平胃丸能明显改善PLGC大鼠胃黏膜腺体萎缩、肠化增生，下调PLGC大鼠胃黏膜组织中Notch2 与Jagged1表达水平（P＜0 05）。结论：Notch2、Jagged1激活了Notch信号通路，在PLGC发生发展中有重要意义。敦煌平胃丸治疗PLGC可能与下调Notch信号通路中Notch2 与Jagged1表达有关。
关键词 敦煌平胃丸；胃癌前病变；Notch2、Jagged1
【中图分类号】R285 5【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517(2015)01-0018-04
胃癌前病变( gastric precancerous lesions, PLGC)是胃黏膜肠上皮化生（intestinal metaplasia，IM）和异型增生( Dysplasia，Dys)的一种病理状态。研究显示Notch信号通路参与了胃黏膜的癌变过程［1］。敦煌平胃丸源于敦煌遗书，该方临床治疗慢性萎缩性胃炎及胃癌前病变疗效确切［2-3］。为了进一步揭示敦煌平胃丸的药效及作用机理，本研究以PLGC大鼠为模型，研究了敦煌平胃丸对胃黏膜Notch信号通路中Notch2和Jagged1表达的影响，现报道如下。
1材料
1 1实验动物采用SPF级健康Wistar大鼠，体重（160±10）g，雌雄各半，标准饲料喂养，均由甘肃中医学院SPF级医学实验中心提供，动物许可证号：SCXK(甘)2011-0001-0001163。
1 2实验药物敦煌平胃丸（方药组成：人参、土鳖虫、当归、苦参、大黄、桔梗、干姜、防风、篙本、玄参），药材饮片购自兰州复兴厚药材有限责任公司，经甘肃中医学院中药鉴定教研室鉴定符合药典规定。将处方中药材饮片按一定比例，置多能提取器中，加水煎煮两次，第一次加8倍量水，煎煮1 5h，第二次加6倍量水，煎煮1h，合并两次煎液，离心滤过，滤液减压浓缩至含生药2g/ml的浸膏，保存备用。
1 3试剂及仪器甲基硝基亚硝基胍（MNNG），购自上海国药集团化学试剂有限公司，批号M0527；Notch2及Jagged1抗体购自兰州维科生物工程有限公司（批号RMA0546）；胎牛血清购自兰州维科生物工程有限公司；EastepTM通用型总 RNA 提取试剂盒:型号LS1OO，普洛麦格上海生物产品有限公司；RNAse-Exitus PLUS（德国Applichem公司)，批号OD008558；超声波破碎仪（德国merck公司）；超微量分光光度计（K5500北京凯奥科技公司）；凝胶成像分析仪（170-8170，美国BIO RAD公司）；PCR热循环仪（C1000，美国BIO RAD公司）。
2方法
2 1大鼠模型建立及分组给药
2 1 1PLGC大鼠模型建立
参考文献方法［4］，采用复合法建立PLGC模型：用蒸馏水175ml和40℃50%的酒精75ml充分搅匀配成10g/l的母液250ml(每周配1次)，于4℃冰箱保存。使用前将MNNG加入母液，稀释成浓度为100μg/ml的溶液，避光保存。各造模组大鼠自由饮用MNNG与酒精复合溶液；各造模组大鼠雷尼替丁与 60℃150g/热盐水按2 25g/L混合后灌胃。各造模组大鼠均配合饥饱失常(2d饱食，1d禁食)。
2 1 2分组及给药32只大鼠适应性喂养7 d后，随机分为4组，每组8只：空白对照组，常规喂养；PLGC模型组，按照前述方法造模，常规喂养，共计12周；自然恢复组，按前述方法造模，常规喂养，共计12周，第13周造模结束后，继续常规喂养12周；敦煌平胃丸组，按照前述方法造模，常规喂养，共计12周，第13周开始，按每日生药96g/kg剂量（相当于60kg成人剂量的20倍计算），将敦煌平胃丸浸膏，掺入饲料中喂养12周。
2 2各组大鼠胃黏膜病理组织观察及积分将大鼠禁食24h后(自由饮水)，腹部注射20%乌拉坦(约10ml/kg)，剖腹取胃，沿胃大弯切开，PBS 溶液漂洗2遍后，肉眼观察大鼠胃壁弹性、黏膜色泽。剪取胃窦部胃组织，将其置于10%多聚甲醛溶液中固定，石蜡包埋，切片，染色，光镜下观察胃黏膜厚度，腺体排列及肠化增生情况。
参考文献方法［5］，分别从胃黏膜充血、炎性程度、胃黏膜糜烂程度、胃黏膜萎缩、肠化增生等方面进行评分。
2 3Western Blot检测各组大鼠胃黏膜组织Notch2和Jagged1蛋白的表达取胃窦组织，每100mg组织加1ml预冷的蛋白提取试剂，提取组织蛋白质。超声破碎仪粉碎组织，加入RIPA缓冲液匀浆，超微量分光光度计测蛋白质浓度；取100μl上清液，取相同质量的细胞裂解液，并加等体积的电泳加样缓冲液，沸水浴中3min，上样、电泳（浓缩胶20mA，分离胶35mA），电转膜仪转膜（100mA 40min），膜用丽春红染色，胶用考马斯亮蓝染色，Western blot ECL试剂盒显色，采用博德公司的凝胶成像分析系统进行图像采集，并用Quantity One4 2软件分析目标条带蛋白与β-actins蛋白的积分光密度比值，计算相对量。
2 4RT-PCR检测各组大鼠胃黏膜组织Notch2和Jagged1 mRNA的表达取胃窦组织，提取总RNA，紫外分光光度计测定RNA 的浓度和纯度。cDNA的合成采用5μl逆转录反应体系，42℃反应60min。反应条件：变性，95℃，2min；退火，42~65℃，1min，25~35循环；延伸，72℃，5min。使用Promega公司的GO Tap Green Master Mix 进行PCR扩增，将扩增物进行2 0%琼脂糖凝胶电泳。PCR引物由采用 Primer premier 5 及 Oligo 6 等生物软件进行引物设计，目的基因片段长度设计为100bp，内参片段长度设计为150bp。Notch2和Jagged1基因引物见表1。采用博德公司的凝胶成像分析系统进行图像采集，并用Quantity One4 2软件分析目标条带mRNA与β-actins的mRNA的积分光密度比值，计算相对量。
2 5统计学方法用IBM SPASS 19 0统计软件对数据结果进行处理分析，数据以均数±标准差(x±s)表示。采用单因素方差分析的方法，进行方差齐性检验后，组间的比较采用LSD与SNK法检验。检验水准为0 05。
3结果
3 1各组大鼠胃黏膜组织病理观察及积分结果见图1、表2。正常组大鼠胃黏膜腺体排列整齐，紧密呈管状，细胞层次清晰，腺上皮及基底层细胞排列规则，黏膜下平滑肌层完整，沿上皮排列，未见特异改变；PLGC模型组大鼠胃黏膜腺体可见结构紊乱、形态不规则、排列拥挤、并有复层及背靠背现象，细胞核极性消失，胞核增大、深染、异形，核呈空泡状，胞浆嗜碱，间质水肿，充血，淋巴细胞、浆细胞、中性粒细胞、嗜酸性细胞浸润；自然恢复组大鼠胃黏膜结构紊乱，形态不规则，部分区域灶状轻度增生腺或可见部分区域肠上皮化生；敦煌平胃丸治疗组大鼠胃黏膜异型增生较模型组有不同程度改善，主要为炎性改变。
3 2各组大鼠胃黏膜组织Notch2和Jagged1蛋白的表达结果见图2、表3。与正常大鼠胃黏膜组织比较，PLGC模型组大鼠胃黏膜组织Notch2 与Jagged1蛋白表达均明显上调（P＜0 05）。自然恢复组有所降低，但不显著。经敦煌平胃丸干预后Notch2 与Jagged1蛋白表达水平明显下降（P＜0 05），但仍高于正常组。
3 3敦煌平胃丸对PLGC大鼠胃黏膜组织Notch2 mRNA表达的影响结果见表图3、表4。与正常大鼠胃黏膜组织比较，PLGC模型组大鼠胃黏膜组织Notch2 与Jagged1mRNA表达均明显上调（P＜0 05）。自然恢复组有所降低，但不显著。经敦煌平胃丸干预后Notch2 与Jagged1 mRNA达水平明显下降（P＜0 05），但仍高于正常组。
4讨论
Notch信号通路广泛存在于脊椎动物和非脊椎动物，进化上高度保守［6］。Notch信号通路由Notch受体、Notch配体（DSL蛋白）、CSL(CBF-1，Suppressor of hairless，Lag的合称）DNA结合蛋白等组成。已知哺乳动物有Notch1、 Notch 2、 Notch 3、Notch4等4种Notch受体和Deltal、Delta3、Delta4、Jaggedl、Jagged2等5种配体。当Notch受体与邻近的细胞表面的配体相结合时，其胞内区被切割，从细胞膜上脱离，转运进入细胞核并与下游分子相互作用以传递Notch发挥生物学功能［7］。研究表明Notch信号转导系统中Notch1-3受体及Jaggedl、Jagged2、Delta1等配体在正常胃黏膜中都有表达，在胃癌组织中则呈现高表达［8］，提示Notch信号通路可能参与了胃黏膜的癌变过程。但Notch信号通路是否参与了PLGC发生发展，尚未见到相关报道。
PLGC属中医“胃痞”范畴。中医认为PLGC的发生是一个邪气渐深，正气渐伤的过程，这与“慢性胃炎萎缩性胃炎肠上皮化生异型增生胃癌”的疾病模式有相似之处。胃黏膜炎症经过长期病理演变，初起在经在气，以脾胃失和，气机阻滞为主，久则在络在血，寒湿、郁热、瘀血等邪毒蜂起，使胃络不通；久则耗伤正气，脾胃虚弱，气阴亏虚，胃络失于濡养，导致腺体萎缩、黏膜肠化增生，数证交错，相互挚制，从而使病势胶着，迁延不愈。故我们认为毒邪内蕴、胃络不通、胃络损伤是炎症诱导PLGC发生的关键病机；脾虚阳陷、气阴亏虚、胃络失养是PLGC的病理转归；虚实夹杂、寒热错杂是其主要证候特征。
基于上述认识，我们提出“消散毒邪，以通胃络，升阳健脾、益气养阴以养胃络”治疗PLGC的思路。敦煌平胃丸组方用药符合这一治疗思路，是我们临床治疗PLGC的常用方剂，疗效显著。该方源于敦煌遗书P·3287卷子［9］，由人参、土鳖虫、当归、苦参、大黄、玄参、干姜、防风、篙本、桔梗等组成。方中以土鳖虫、大黄、当归活血祛瘀，通经活络，以解瘀毒阻滞胃络；苦参、干姜辛开苦降，恢复中焦升降之职，以解寒湿、邪热内蕴毒邪，佐以甘寒濡润之玄参，与当归合用滋阴养血，防止久病入络，耗伤胃络阴血，又可制约方中辛苦温燥药物伤及阴血；防风、篙本、桔梗均为辛散升浮之品，与人参配伍共奏升阳健脾。全方虚实兼顾，寒热平调，润燥结合；既消散毒邪，畅通胃络，又升阳健脾、益气养阴，荣养胃络。
本研究结果表明PLGC模型大鼠胃黏膜组织Notch信号通路中受体Notch2 与配体Jagged1mRNA及蛋白表达较正常大鼠胃黏膜组织均明显上调。经自然恢复后这种高表达水平并未明显改变，敦煌平胃丸则能明显下调PLGC大鼠胃黏膜组织中Notch2 、Jagged1 mRNA及蛋白表达水平。我们推测Notch2 作为的受体、Jagged1作为配体激活了Notch信号通路，促进了胃黏膜腺体萎缩、肠化增生。敦煌平胃丸治疗PLGC可能与下调Notch信号通路中Notch2 与Jagged1表达，促进胃黏膜组织修复与重构有关。至于PLGC过程中是否还有其他Notch信号通路受体及配体或相关下游基因参与，敦煌平胃丸对其是否具有干预调节作用，有待于进一步研究。
参考文献
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