肾脏纤维化范文1
各种原因引起的慢性肾脏疾病进展为终末期肾衰（endstagerenalfailure，ESRF）的实质是肾脏纤维化和硬化，从而导致有效肾单位丧失和肾功能的进行性下降。近年研究揭示，炎症细胞浸润，肾脏固有细胞在致纤维化性生长因子（growthfactors，GF）、细胞因子等作用下发生表型改变等是肾脏纤维化形成的重要机制。此外，细胞外基质成分（ECM）的产生与降解过程的失调而致其过度积聚，进一步促进了肾脏的硬化和肾功能的丧失。现就肾脏纤维化形成过程中所涉及的主要机制及与此有关的治疗学进展作一简述。
1 肾小球硬化（glomerulosclerosis，GS）
无论肾病原发病因如何，终末期肾脏均表现为GS，并进而导致肾小球滤过功能的丧失。近年来GS机制研究取得不少进展，主要表现在以下几个方面。
1．1 肾小球毛细血管内皮细胞损害是GS的重要始动因素
正常情况下内皮细胞不仅是维持毛细血管结构完整的屏障，而且还可以通过自分泌或（和）旁分泌方式产生一系列的体液因子（如内皮素、NO、PGI2等）而调节局部血流动力学及凝血过程。此外，这些局部体液因子尚可通过对系膜细胞（mesangialcell，MC）的作用而调节肾小球的滤过功能。内皮细胞受损后，其抗凝活性下降，促进血小板的粘附与聚集，毛细血管微血栓形成。内皮细胞表型的改变包括细胞表面表达细胞粘附分子（celladhesionmolecule，CAM），后者促进白细胞粘附于肾小球毛细血管并继而向血管襻浸润。损伤或（和）激活的内皮细胞通过释放细胞因子如IL－1（白介素－1）、TNFα（肿瘤坏死因子α）、化学趋化因子（chemokine，如IL－8）、单核细胞趋化肽－1（MCP－1）、巨噬细胞炎症蛋白－2（MIP－2），进一步吸引炎症细胞至肾小球并导致它们的激活。IL－1，TNFα还可促进血栓的形成。因此，肾小球内皮细胞通过与循环白细胞及血小板的相互作用而启动肾小球硬化的过程。
1．2 mC在肾小球硬化中的作用
MC是肾小球内平滑肌样细胞，它可以合成和释放致炎性细胞因子和趋化细胞因子（MCP－1，RANTES）以及致纤维化性GF，如血小板生长因子（PDGF）。MC对损伤的反应是增生、发生表型改变并产生ECM。激活的血小板、核细胞及损伤的内皮细胞均可通过释放一系列因子而介导这种反应。MC增生往往是系膜硬化及GS的前奏。在所有细胞因子中，PDGF及TGFβ（转移生长因子β）已被公认在系膜增生及硬化中起最为重要的作用。大鼠体内直接注射PDGF可刺激肾脏MC增生。将人PDGF基因转移给大鼠亦导致MC增生。与PDGF不同的是，TGFβ对MC的增生具有双相性调节作用，即低浓度时起促进作用，而高浓度时起抑制作用。TGFβ还能强力促进系膜及上皮细胞合成ECM成分。最近人们发现TGFβ尚可引起MC表型改变，使其成为成肌纤维细胞（myofibro-blast，MFB）。MC的这种表型改变是其激活及增生的象征，并在临床及动物实验中证实具有较好的判断预后价值。研究证实当MC表达MFB标记性蛋白－α平滑肌肌动蛋白（αsmoothmuscleactin，α－SMA）增加时，GS程度加重，这是由于转型的MC能够合成Ⅰ、Ⅲ型胶原，而由肾小球MC释放的基质金属蛋白酶（MMPS）仅能降解Ⅳ型胶原，并不能降解Ⅰ、Ⅲ型胶原所致。有趣的是，肾小球基质成分的改变反过来又可能影响MC，进一步促进其增生和转化。
2 肾小管、间质纤维化
小管间质纤维化（tubulo－interstitialfibrosis，TIF）是肾脏硬化的一个重要特征。无论肾脏原发病变在肾小球、肾小管还是血管，大多数进展性肾病均可见到TIF，而TIF的出现又往往预示着肾脏病变预后不好。动物实验发现，如果没有同时伴有小管、间质炎症性浸润及纤维化，肾小球硬化乃至肾功能不全就很少发生。
TIF的发生机制与前述GS的机制有许多相似之处。不过肾小管细胞在其中起了十分重要的作用。因为当其受损时，它可以表达细胞粘附分子，释放趋化因子、细胞因子及GF，还有MCP－1，Osteopontin，粒－单核细胞集落刺激因子，这些因子可以把炎症细胞、单核细胞及淋巴细胞等吸引到肾间质。而单核细胞通过进一步地释放致纤维化性细胞因子，刺激成纤维细胞增生、胶原合成，从而促进TIF的形成。淋巴细胞产生IL－2（白介素－2），γ－干扰素等可通过刺激巨噬细胞产生TGFβ等进一步刺激间质的成纤维细胞产生胶原。不仅如此，肾小管细胞本身亦可通过释放IL－1，PDGF，TGFβ等而直接刺激肾间质成纤维细胞的激活与增生。此外，肾小管细胞与肾脏成纤维细胞的相互作用似乎尚受肾小管周围ECM成分的影响。例如当将小管细胞与IV型胶原共同培养时，近端小管细胞刺激肾皮质成纤维细胞的增生，而与laminin一起培养时则抑制成纤维细胞的增生。间质成纤维细胞激活后亦主要表现为获得了平滑肌细胞的某些特征而成为MFB，它表达某些结构蛋白如α－SMA，Vimentin及成纤维细胞特异性蛋白－1等。MFB通过合成ECM而促进TIF的形成。临床及动物实验均已发现，间质MFB数量的多少与TIF程度有密切关系，小管、间质细胞表达α－SMA增加，往往提示疾病预后不良，容易进展为ESRF。进一步的研究还证实，肾脏本身固有的细胞如间质成纤维细胞、血管周围细胞以及小管细胞等均可经过表型改变而成为MFB。最近有人发现这些细胞经肾小球入口或破损的包曼囊而向硬化的肾小球迁移，提示间质MFB可能参与GS的形成。
间质MFB合成和降解ECM失调亦是导致TIF的重要因素。Lemis等最近报道，当肾小管细胞与异常的ECM成分一起进行培养时，可抑制成纤维细胞释放胶原酶。此外TIF时亦发现肾小管MMPS减少，而这些酶的组织抑制因子（TIMPS）及血浆原激活因子的抑制成分（PAI）增加。总之，所有这些变化均有利于间质ECM成分的积聚，从而最终导致TIF。
3 肾内血管纤维化和硬化
肾内血管纤维化和硬化亦是终末期肾脏病理学上的一个显著特征。它与ESRF的发生有着密切的关系。近年来人们已逐渐地注意到肾内微小血管性损害对肾脏纤维化的影响。事实上无论慢性肾病是否伴有全身性高血压，肾活检标本中常可见到微小血管的硬化，而且研究发现，这种病理改变的程度直接影响着肾病的预后。肾内小血管硬化的机制可能为：⑴全身性高血压一方面引起的入球小动脉扩张，肾小球毛细血管内压（PGC）增高，肾小球肥大；另一方面引起出球小动脉扩张，继而引起管周毛细血管内压增高，内皮细胞受损。⑵毛细血管内压力的改变可刺激血小板生长因子（PDGF）、血管紧张素Ⅱ、内皮素等释放，后者进一步刺激管壁平滑肌细胞、间质成纤维细胞增生，导致管腔缩窄。小血管硬化造成局部缺血、缺氧，小管细胞萎缩。晚近有人注意到血管周围细胞（pericyte）异化成MFB，后者可分泌产生ECM，并可能移行至肾小球内，从而促进肾小球及小管、间质的纤维化。
4 治疗学进展
去除促使肾脏硬化的危险因素如高血压、高血糖、高血脂等已被证明可延缓慢性肾衰进展。另外，低蛋白、低磷饮食亦已公认是能够有效地延缓慢性肾衰进展的内科疗法之一。
肾脏纤维化范文2
关键词： 功能磁共振成像; 慢性肾病; 肾纤维化;
Abstract： Chronic kidney disease(CKD), characterized by high incidence, poor health outcomes and high treatment costs, imposes a huge burden on individuals and society. Renal tubulointerstitial fibrosis and renal medulla hypoxia are believed to be the main causes of CKD progression. At present, ultrasound-guided renal biopsy is the gold standard for the evaluation and diagnosis of renal fibrosis. However, it is difficult to carry out follow-up monitoring in clinical practice because it is an invasive test with certain side effects and poor repeatability. MRI can provide information about tissue structure noninvasively, and advances in MRI functional imaging techniques offer promise for unique insights into renal function and fibrosis severity, but its potential to assess fibrosis and inflammation in diseased kidneys remains unclear. This paper reviews the research progress of functional magnetic resonance imagingin the diagnosis of chronic kidney disease.
Keyword： functional magnetic resonance imaging; chronic kidney disease; renal fibrosis;
慢性肾脏病目前已成为影响全球约10%人口的主要全球公共卫生问题，每年造成数百万人死亡，并且数十万人需要通过透析来维持生命[1]。因此，让慢性肾病引起人们的足够重视，并且做到早诊断，早治疗，防止病情恶化，改善患者预后是非常必要的。
1 、慢性肾病的病理学基础
大量研究表明，肾间质纤维化是多种肾脏疾病进展到慢性肾病的共同途径和病理基础[2,3]，在肾间质纤维化过程中，首先组织因受损启动了肾脏纤维化，而纤维化会导致肾小管萎缩，毛细血管进行性减少，导致肾脏灌注减低[4,5]，导致血流减少和向肾脏实质的肾小管上皮细胞的氧气输送减少，又可以进一步促进纤维化[6]。因此，毛细血管丢失不仅是纤维化肾的关键特征，而且是与纤维化相关的进一步损伤的驱动因素[7,8]。随着肾单位的瘢痕形成，沉积的细胞外基质会增加[9]，从而增加肾脏的僵硬度。
有研究表明，在肾间质纤维化形成的慢性进展过程中，患者早期可以没有明显的临床表现，甚至在肾小球纤维化时，肾小球滤过率(glomerular filtration rate,GFR)仍可维持数年，直到肾小球间质纤维化的发展，最终导致GFR下降[10]，因此在肾小球纤维化发展为严重的肾损伤之前，早期发现纤维化并定量评价纤维化程度在理论上可以早期评估患者病情进展的风险，由于许多新的抗纤维化药物正在开发中，这种早期的鉴定可能在患者发展为明显的肾功能障碍之前，给予药物干预，早期治疗，有助于延缓肾纤维化的发生及发展[11]，改善患者预后，提高患者生存质量。
2 、慢性肾病诊断金标准
肾活检是目前用组织学技术对肾纤维化进行特异性诊断和分期的金标准[12]，但因其具有创伤性，可重复性差，不适用于疾病进展或治疗反应的长期监测，尽管近年来这种检查技术变得更加安全，但并发症和局限性依然存在。首先，肾脏穿刺活检有出血的风险，严重者还可能会产生动静脉瘘和肾周软组织感染，甚至死亡[12,13]。其次，因为活检样本的直径只有2 mm，即使是“满意的”样本也几乎不包括髓质，因此肾活检分析也必然受到抽样偏差的影响[14]。
考虑到这些安全性和取样问题，患者往往不愿接受活检，当非侵入性检测不能提供诊断时，临床医生往往得不到有助于临床诊疗决策的关键信息。因此尽管活检是目前评估肾纤维化的金标准，但从临床和研究的角度来看，它都是不完善的。很显然，安全、准确地评估全肾纤维化负担的非侵入性新方法是必要的。
3 、慢性肾病的MRI研究进展
传统的MRI通常无法实现组织纤维化成像，然而，结合对纤维化病理生理学的进一步理解，有学者使用钆对比剂增强MRI行心肌纤维化成像取得诸多成效[15,16]，这也为MRI纤维化成像提供了可能性，然而，由于钆对比剂对肾功能障碍患者的风险，这些技术不能适用于肾脏[17]。值得注意的是，随着磁共振功能成像技术的进展，其他无钆技术也已被开发出来，例如扩散加权成像(diffusion-weighted imaging,DWI)、动脉自旋标记成像(arterial spin labeling,ASL)、磁共振弹性成像(magnetic resonance elastography,MRE)、血氧水平依赖性磁共振成像(blood oxygenation level-dependent MRI,BOLD-MRI)以及磁化转移成像等，有望改善无创地检测肾脏内结构、功能和分子变化的能力。有几篇文章评论了这些无创MRI技术在肾脏中的应用[18,19,20]，包括Ebrahimi等[21]对肾脏功能MRI的精彩综述，认识到微血管损伤和肾硬化对肾脏纤维化的重要性。
3.1、 扩散加权成像
DWI是一种能够无创地探测到组织中自由水分子布朗运动的磁共振成像技术，通常用ADC来描述水分子的净移动。肾间质纤维化的病理表现包括肾小管周围微血管减少、细胞外间质中成纤维细胞的增殖以及基质沉淀，这些改变均有可能导致组织中水分子的扩散受限，从而减低ADC值。
在动物模型和人类中的大量研究表明，与健康肾脏相比，患病肾脏的ADC值显着降低[22]。目前的证据表明DWI对肾间质变化特别敏感，例如肾纤维化、细胞(炎性或肿瘤性)浸润和水肿[23]，肾纤维化核心活检标本的纤维化百分率与ADC显着相关[24]。近年来大量的研究显示，CKD患者肾脏的ADC值与其肾纤维化量呈负相关[25]，并且随着慢性肾病患者肾功能的降低，肾脏的ADC值也明显下降[26,27]。
使用体素内不相干运动(intravoxel incoherent motion,IVIM)模型对扩散信号进行高级建模，分别估计扩散(ADC扩散)和灌注(ADC灌注)对总ADC值的贡献[28,29]，这种能力可能会极大地提高对扩散机制的理解。Feng等[30]和Deng等[31]利用IVIM-DWI评估2型糖尿病患者的早期肾功能变化，发现IVIM参数值在检测早期肾脏变化中比白蛋白/肌酐比值更敏感。Mao等[29,32]用IVIM-DWI对于肾脏功能和CKD病理学的无创评估可能是可行的，尤其是在早期发现肾功能不全时。
DWI的另一个延伸序列称为扩散张量成像(diffusion t e n s o r i m a g i n g,DTI)，使用各向异性分数(f r a c t i o n a l anisotropy,FA)来测量沿不同轴线的水的流动性。因此，理论上使用扩散张量成像有利于捕捉到水在特定方向运动的有序结构的破坏，例如大脑中的轴突或肾脏中的小管。基于这种功能，DWI已被广泛应用于神经成像，特别是缺血性脑损伤的早期检测和肿瘤成像[33,34]。有关肾脏的研究显示，由于肾小管结构的存在，使得肾髓质内各向异性程度比肾皮质更高；使用DTI，无论GFR是否降低，CKD患者肾皮质及髓质的FA值明显低于健康对照组，对肾小球病变及肾小管损伤行进量化评分显示，FA与损伤评分呈负相关[24,35]。
总之，DWI可能是所有类型CKD的首选成像技术，甚至在肾功能衰退之前，用于评估组织纤维化程度、预测功能演变和跟踪治疗过程中出现的微结构变化，这可以减少诊断和随访的肾活检的数量[25]。为了提高DWI的特异性，将其与其他有前途的MRI (多参数MRI)相结合进行肾组织表征和随访，将有助于对正常和病变肾脏进行完整的形态学和功能评估。
3.2 、肾脏血氧水平依赖MRI
考虑到肾实质缺氧会引起一系列复杂的细胞因子和其他因素的激活，最终引起肾小管间质纤维化，导致肾功能进行性受损。利用这一现象，Ogawa等[36]用一种对血氧变化敏感的技术BOLD-MRI对肾脏进行成像，获取图像用来估计组织的含氧量，目前，BOLD-MRI已被广泛验证为脑氧合的一种测量方法[37]。Prasad等[38]首先在肾脏中进行了BOLD-MRI测试，结果显示髓质的T2*信号低于皮质，这与髓质在近缺氧条件下工作的事实相符。另有研究[39]显示糖尿病患者的肾皮质及髓质R2*信号均明显高于正常对照组。髓质R2*信号与肾小球滤过率呈正相关，皮质R2*信号强度与e GFR呈负相关。髓质与皮质R2*值之比在糖尿病早期升高，随着糖尿病肾病的加重而降低。Feng等[40]的研究表明髓质R2*值可能是一种新的更敏感的糖尿病肾病早期预测指标。同时，BOLD-MRI检测到单纯糖尿病期髓质缺氧，DTI未检测到此期髓质定向扩散的变化，基于上述假设，笔者推测BOLD成像对早期肾功能改变的评估可能比DTI更敏感。
3.3 、动脉自旋标记成像
ASL通过磁标记动脉血液来测量组织灌注。由于肾脏较高的生理灌注，原则上肾脏是可以用磁共振动脉自旋标记技术进行灌注成像的理想脏器。ASL在动物[41]和人类[42]中的应用表明，与金标准的测量相比，该技术提供了合理的、可重复的肾皮质微血管血流估计。广泛的研究表明，ASL对动脉狭窄或肾脏疾病的再循环是敏感的[43]。在CKD病人中，ASL显示的微血管流速随着e GFR不同程度减低而减低[44,45]。考虑到肾纤维化与毛细血管损失和微血管灌注受损有关，CKD中可见的ASL反映的血流减少可能是衡量全肾纤维化负担的替代指标，也可能预测进展风险。一项糖尿病肾病的研究显示[46],ASL血流量的MRI可以无创测量肾皮质组织灌注的减少，且随着病程的进展，组织灌注减少。
虽然肾脏ASL是一种具有肾间质纤维化的潜能，还有一些局限性需要解决。首先，测量结果受到低信噪比和相应的低分辨率的困扰，这限制了对皮质和髓质进行分别评估的能力，尤其是对皮质变薄的慢性损伤的肾脏。其次，ASL测量肾髓质灌注是困难的，因为髓质只接收总肾血流的10%，使得ASL信号通常比大脑皮层弱，那么要进行多次采集来改善信号测量，但这会延长扫描时间，使ASL对呼吸运动伪影更敏感。Nery等[47]应用背景抑制3D梯度自旋回波序列(a single-shot background-suppressed 3D gradient and spin-echo,3D-GRASE)可明显改善ASL的运动伪影，使其可应用于患有重度肾病的儿童。
3.4、 磁共振弹性成像
肾纤维化的另外一个重要特征经常被忽视，那就是肾脏硬度的增加。器官硬化是由柔软的肾实质细胞被刚性纤维基质所替代[48]，并通过这些基质胶原纤维的交联进一步增强；这种器官硬化可以通过MRE来捕捉，得到组织刚度和感兴趣区域弹性可视化的定量值[40]。Rouvière等[50]首次显示了MRE在健康成年人中的可行性和可重复性。MRE已经是一种成熟的肝纤维化成像技术，已被证明可以准确反映活检来源的肝纤维化测量结果[51],MRE用于肾脏的可行性已在国内外多项研究中得到证实。在一项动物研究中，MRE被用于检测猪慢性肾动脉狭窄引起的髓质纤维化，研究结果表明随着肾组织纤维化的增加，MRE测得髓质刚度值也明显增加[52]。然而Brown等[46]对CKD患者肾脏MRE的一项研究显示MRE的刚度会随着CKD的恶化而降低，这很可能与较低的血液流速引起的组织膨大有关。
虽然这些初步研究结果令人鼓舞，但仍存在一些问题，与相对同质的肝脏不同，肾脏在结构上非常不均匀，因此，从活检取样点测量的硬度指标是否与活检获得的纤维化评分有更好的相关性需要进一步验证。
3.5 、其他成像方法
过度的组织瘢痕形成或纤维化是导致终末期肾脏疾病的关键因素，磁化转移成像(magnetization transfer-MRI,MT-MRI)利用附着在基质蛋白等大分子上的水质子(与自由水分子的质子相比)的不同磁性能，提供有关组织大分子组成的间接信息。Jiang等[20]应用该技术对进行的肾动脉狭窄手术的小鼠在基线及术后不同时段进行检测，结果显示，肾动脉狭窄的肾脏，磁化转移率显示从基线到术后6周逐渐增加(皮层和髓质分别增加13.7%和21.3%)，同时还伴有肾脏容量、灌注、血流量和氧合的逐渐减少，并且患侧肾脏的磁化传递比图显示与离体标本测得的纤维化程度有良好的相关性；另外，该研究团队进一步改进研究方案，在胶原体膜中选择合适的MT参数，并将其应用于体内磁化转移成像，研究结果证实了MTI在评估猪肾动脉狭窄性肾脏纤维化中的作用，研究显示无论肾皮层还是髓质，在频率为600 Hz和1000 Hz时的磁化转移率均与天狼星红染色法测定的肾间质纤维化呈良好的相关性[53]。
T1 mapping、T2 mapping：前面笔者阐述的肾纤维化的成像方法主要集中在MRI功能成像模式上，即图像要么揭示肾脏的微血管灌注、氧合情况，要么就是肾脏硬化的改变，而目前，基于MRI的技术也在发展中，以检查纤维化组织的其他特性。有一项动物实验表明[54]，慢性肾病模型中肾纤维化程度与T1值呈良好的正相关性。
分子MRI也是检测和评估器官病变的先进MRI工具。最近的一项研究取得了显着进展。Sun等[43]使用弹性蛋白磁共振特异性显像剂(elastin-specific magnetic resonance imaging agent,ESMA)进行无创性分析肾纤维化，弹性蛋白在健康的小鼠、大鼠和人的肾脏中几乎不表达，而在进行性CKD的皮质、髓质和血管周围区域中过表达；其次，在已经建立的纤维化模型给予伊马替尼进行治疗，发现治疗后ESMA分子成像获得的信号强度显着低于对照组小鼠，说明弹性蛋白成像可以对肾纤维化进行重复和可重复的评估，从而准确记录抗纤维化治疗的效果。
4 、小结
间质纤维化是慢性肾损伤的主要原因，目前主要靠肾活检组织学来对其评价，功能磁共振成像克服了活检分析的创伤性和取样偏差限制，为肾纤维化评估的无创成像提供了广泛的可能性。以上笔者已经强调了几种基于MRI的技术，它们可以展示肾脏纤维化的两个重要病理特征：毛细血管减少和肾硬化，但每种方法仍需要进一步的发展和验证。到目前为止，实验数据显示MR结果与肾纤维化和肾功能有良好的相关性，尤其是DWI可在一定程度上反映肾间质纤维化的程度，ASL及BOLD-MRI则与肾间质氧分压则有很好的相关性；但是这些研究成果都处于基础阶段，还不能适用于临床，这需要继续发展和改进MRI肾脏成像方法来评估肾纤维化，早日将其转化为临床成果。
利益冲突：无。
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肾脏纤维化范文3
【关键词】 肾间质纤维化； 肾素-血管紧张素-醛固酮系统； 大鼠
肾间质纤维化是由肾间质成纤维细胞增殖和细胞外基质在肾间质内过度沉积所导致，是慢性肾脏病发展的最终结果，是导致终末期肾功能衰竭的主要原因之一。肾功能的恶化，主要取决于肾小管间质纤维化的程度[1]。研究表明，肾素-血管紧张素-醛固酮系统（renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS）尤其是血管紧张素Ⅱ（AngⅡ），不仅在调节血流动力学而且在肾间质纤维化中起重要作用[2]。大量实验表明，ACEI、ARB及醛固酮拮抗剂均可延缓肾间质纤维化的进展，然而这三类药物抗肾间质纤维化的疗效是否相近或其中某类药物抗肾间质纤维化的效果更显著目前还未见报道[3-5]。本实验应用依那普利、缬沙坦及螺内酯分别阻断RAAS不同环节，观察其抗肾间质纤维化的作用，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 实验动物 6周龄健康雄性SD大鼠50只，体重160～200 g，清洁级。
1.2 药物与试剂 马来酸依那普利（扬子江药业集团江苏制药股份有限公司，批号：国药准字H32026568），缬沙坦（北京诺华制药有限公司，批号：国药准字H20040217），螺内酯（海南海神同洲制药有限公司，批号：国药准字H46020690）。TRIzol（life technologies），FastQuant cDNA第一链合成试剂盒（北京天根），SuperReal荧光定量预混试剂（北京天根）。
1.3 方法
1.3.1 分组和建模 50只健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、依那普利组、缬沙坦组和螺内酯组，每组10只。模型组、依那普利组、缬沙坦组及螺内酯组大鼠用10%水合氯醛（3 mL/kg）腹腔注射麻醉，仰卧位固定，75%乙醇消毒，腹部正中左侧纵行切口，分离左侧输尿管，于中上1/3处结扎并剪断输尿管，使左侧肾脏完全梗阻，逐层缝合，正常组大鼠打开腹腔后只分离但不结扎和剪断输尿管。术后腹腔注射青霉素（10 U/d，连续3 d），造模前24 h-造模后14 d，依那普利组用血管紧张素转化酶抑制剂依那普利10 mg/（kg・d），缬沙坦组用血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型受体拮抗剂缬沙坦10 mg/（kg・d），螺内酯组用醛固酮受体拮抗剂螺内酯100 mg/（kg・d）灌胃，正常组和模型组用2 mL/d 0.9%氯化钠溶液灌胃。
1.3.2 肾组织标本采集 造模后14 d处死所有大鼠，快速取出左肾，去除包膜，用0.9%氯化钠溶液将左肾积存的血液冲洗干净，按冠状位纵行剖开，一半肾组织置于4%甲醛固定液固定，用于HE染色；另一半肾组织快速置于-80 ℃低温冰箱保存，用于RT-PCR[6]。
1.3.3 肾功能指标检测 造模后13 d（处死前1 d），将大鼠置于代谢笼，留取大鼠24 h尿液，送检验科检测24 h尿蛋白定量。造模后14 d处死所有大鼠，经腹主动脉采血5 mL，室温静置1 h，3000 r/min，4 ℃离心15 min，取上层血清检测血清Scr、BUN。
1.3.4 肾组织病理检查 肾组织标本用4%甲醛固定液固定，常规脱水，石蜡包埋，切片4 μm，行HE染色，光镜观察肾小球、肾小管的病理变化及炎症细胞浸润的情况。按肾间质损伤8项指标评分：肾小管上皮细胞空泡变性、肾小管扩张、肾小管萎缩、红细胞管型、蛋白管型、间质水肿、间质纤维化、间质细胞浸润，计算其均值，作为该标本的肾小管间质损伤指数[7]。
1.3.5 肾组织TGF-β1、AGT、ACE、ALD mRNA检测 采用RT-PCR法，TRIzol提取肾组织总RNA，按TRIzol说明书步骤提取。用FastQuant cDNA第一链合成试剂盒合成cDNA，取4 μL cDNA为模板按PCR试剂盒说明进行PCR扩增，总体系为20 μL，以GAPDH为内参，引物及内参序列由上海生工设计及合成。引物序列：TGF-β1：上游5’CTTTGTACAGCACCCGC3’，下游5’TAGATTGCGTTGCGGTC3’；AGT：上游
5’CTGGAGCTAAAGGACACACAGA3’，下游5’GTGGATGTATACGCGGTCCC3’；ACE：上游
5’GCTTGACCCTGGATTGCAGC3’，下游5’CTCCGTGATGTTGGTGTCGT3’；ALD：上游
5’GAAGTTCGATCTGGGGCCAA3’，下游5’AGGGTCATATAGGGTCGCTGA3’；GAPDH：上游
5’GGCAAGTTCAACGGCACAGT3’，下游5’AAGACGCCAGTAGACTCCACG3’。
1.4 统计学处理 采用SPSS 19.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验，组间比较采用单因素方差分析，以P
2 结果
2.1 各组肾功能指标检测结果比较 各组大鼠24 h尿蛋白比较差异均无统计学意义（P>0.05）；模型组、依那普利组、缬沙坦组及螺内酯组肌酐、尿素氮均较正常组升高，其中模型组升高最为明显，依那普利组、缬沙坦组及螺内酯组间比较差异无统计学意义（P>0.05），见表1。
*与正常组比较，P
2.2 各组肾脏组织病理改变结果比较 光镜显示正常组大鼠肾小球、肾小管及间质大小或形态结构均正常；模型组肾间质大量炎症细胞浸润，间质间隙增宽，细胞外基质成分增多，并可见肾小管上皮细胞水肿、变性、坏死，管腔内可见脱落坏死的上皮细胞，肾小管扩张；依那普利、缬沙坦及螺内酯组上述病理改变明显减轻，见图1。与正常组的肾间质损伤指数（1.67±0.58）比较，模型组（6.00±1.00）、依那普利组（3.67±0.58）、缬沙坦组（4.00±1.00）及螺内酯组（3.66±1.15）均有不同程度地升高，比较差异均有统计学意义（P
注：A正常组；B模型组；C依那普利组；D缬沙坦组；E螺内酯组
2.3 各组大鼠TGF-β1 mRNA、AGT mRNA、ACE mRNA、ALD mRNA的表达结果 RT-PCR结果显示，输尿管结扎后大鼠肾脏TGF-β1 mRNA、AGT mRNA、ACE mRNA及ALD mRNA表达均较正常组有不同程度地增加。依那普利组、缬沙坦组及螺内酯组TGF-β1 mRNA、AGT mRNA、ACE mRNA、ALD mRNA的表达较模型组大鼠明显减少（P0.05），见图2。
3 讨论
肾间质纤维化是以肾小管萎缩或扩张，肾间质炎性细胞浸润，成纤维细胞形成与积聚及细胞外基质在肾间质中过度沉积为特征的不可逆的发展过程[8]。肾间质的病变程度是决定10年肾脏存活率最重要的影响因素，对肾脏疾病预后的影响较肾小球病变更为重要[9]。UUO模型是以进行性肾间质纤维化为特征的实验性肾病模型，持续输尿管梗阻引起的慢性炎症和间质纤维化可导致肾功能的进行性丧失[10]。
目前研究认为，肾间质纤维化是各种细胞、细胞因子及炎症因子相互作用，导致细胞外基质代谢失衡，在肾间质异常集聚所致，其中转化生长因子β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）是促进细胞增殖和间质纤维化的重要因子[11]。大量的动物实验和临床研究表明，肾小管上皮细胞、成纤维细胞及系膜细胞等肾脏固有细胞TGF-β1表达上调通常与肾间质纤维化密切相关。作为一种强效的致纤维化因子，TGF-β1在肾间质纤维化的发生发展中起重要作用。TGF-β1主要的致纤维化作用表现在：（1）可趋化炎症细胞在肾间质浸润，促使肾小管上皮细胞转化为成纤维细胞，进而产生大量的细胞外基质；（2）抑制多种细胞外基质降解酶的活性，促进金属蛋白酶组织抑制因子-l及纤溶酶原激活抑制因子-1的表达，抑制细胞外基质的降解；（3）增加ECM的受体如整合素的表达，从而增加ECM与细胞的相互作用[12-14]。本实验结果显示，模型组、依那普利组、缬沙坦组及螺内酯组的TGF-β1表达较正常组明显增加，但依那普利组、缬沙坦组及螺内酯组的TGF-β1表达较模型组又明显降低，表明TGF-β1在肾间质纤维化的过程中起促进作用，且依那普利（ACEI）、缬沙坦（ARB）及螺内酯（醛固酮拮抗剂）对肾间质纤维化有一定的防治作用。
肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）是人体内重要的体液调节系统，RAAS除了存在于循环系统中，还存在于许多组织器官中，如心脏、肾脏、肾上腺等，称为局部RAAS，其主要与组织纤维化和/或重构过程有关。研究表明，随着肾脏的受损，可观察到RAAS的成分如血管紧张素原、血管紧张素转换酶、血管紧张素I和血管紧张素Ⅱ的上调或重新分布。肾脏局部RAAS在肾间质纤维化的形成中具有重要的促进作用，其效应分子血管紧张素Ⅱ（Ang-Ⅱ）和醛固酮是重要的致炎因子，可促进成纤维细胞增殖和细胞外基质的合成，促进肾间质纤维化[15]。AngⅡ是RAAS的主要生物活性成分，是一种重要的细胞因子，具有多重生理学效应，可通过诱导细胞因子、生长因子和黏附分子等的表达发挥其促纤维化作用[16]。有研究表明，AngⅡ可激活肾小管上皮细胞及成纤维细胞，促进TGF-β1的合成和释放，致使肾间质细胞外基质成分的过度产生[17-18]。血管紧张素转化酶抑制剂（依那普利）能有效抑制AngⅡ的合成，减少体内AngⅡ的含量，从而减轻肾间质纤维化的程度[19]。血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂（缬沙坦）有效地阻断AngⅡ与其受体（AT1）相结合，亦可达到减轻肾间质纤维化的效果。近几年的研究显示，醛固酮不仅可以致水钠潴留，而且可以促进组织胶原沉积和纤维化，是肾间质纤维化过程中的一个重要因素，在进展性肾脏损害中发挥重要的作用。有研究表明，醛固酮是有丝分裂和胶原合成的强烈刺激剂，可以促进肾脏纤维化[20]。本研究结果表明，与模型组比较，依那普利组、缬沙坦组、螺内酯组TGF-β1表达明显下调，肾功能明显好转，肾损伤指数明显降低，表明依那普利、缬沙坦、螺内酯对肾间质纤维化具有负性调节作用，通过下调TGF-β1的表达，减少细胞外基质的沉积，阻止肾间质纤维化的进展，延缓肾功能的恶化。
综上所述，TGF-β1表达增多与肾间质纤维化密切相关。依那普利、缬沙坦、螺内酯均可通过下调TGF-β1表达而减轻肾间质纤维化程度，延缓肾功能恶化，但三组间比较差异无统计学意义（P>0.05），说明其抗肾间质纤维化的作用效果相近。
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肾脏纤维化范文4
【关键词】 高脂血症；纤维化；TGF-β1；辛伐他汀；苯那普利
【Abstracts】 Objective This study was to examine the changes of renal TGF-β1 mRNA expression in ADR experimental nephropathy rats given high lipid diet and the effect of using simvastatin and benazepril. Methods Using RT-PCR to detect the expression of renal TGF-β1 mRNA in different groups at 4，8 and 12 weekend， the GAPDH mRNA expression used as control. Using in situ hybridization to examine TGF-β1 gene expression in different groups at 12 weekend. Results TGF-β1 mRNA expression of ADR nephrotic rats increased steadily after 4 weekend and its gene expression was higher than that with normal diet at 8 and 12 weekend. The results of using in situ hibrydization showed high level of TGF-β1 mRNA positive signal at 12 weekend in ADR nephrotic rats given high lipid diet，the positive signals mainly located in tubulointerstitial zone disseminately while few found in glomerular， and focal gene positive signals distributed in tubulointerstitial was showed in normal dietary nephrotic rats.The expression of TGF-β1 mRNA decreased in Simvastatin and Benazepril groups significantly.There was no different expression of TGF-β1 mRNA between normal rats given high lipid diet and normal diet during 4 and 8weekend but slight higher gene expression came in high lipid dietary group at 12 weekend compared with normal control.Conclusion The expression of TGF-β1 mRNA in ADR nephrotic rats given high lipid diet increased steadily as time went on，the positve signals of TGF-β1 mRNA mainly located in tubulointerstitial zone. The treatment of simvastatinor benazepril were proved to be effective in decreasing the high expression of TGF-β1 mRNA in ADR nephrotic rats given high lipid diet. The possible effect of simvastatin is due to reducing the activity of RAS induced by hyperlipidemia or through its negative effect on MVA pathway； while benazepril’s inhibition on this gene expression might be mediated by inhibiting the production of angiotensin Ⅱ.
【Key words】 hyperlipidemia；fibrosis；TGF-β1；simvastatin；benazepril
动物模型中，高脂饮食在一定的观察期后能形成类似人FSGS病变。肾病大鼠给予高脂饮食后，肾小球硬化明显加重，并加速进展至CRF［1］。近年来，大量的研究显示多种细胞因子参与肾病进程，其中起主要作用的是TGF-β1［2］。TGF-β1广泛分布于血小板，巨噬细胞及肾脏组织，能通过增加ECM蛋白的合成，抑制其降解及调节细胞-整合素受体促进ECM的积聚， 并吸引单核细胞和刺激成纤维细胞转变成纤维细胞，促进肾脏硬化［3］。目前认为，TGF-β1在肾组织中持续过度表达是引起肾小球硬化的重要原因［4］。我们用RT-PCR和原位杂交观察高脂饮食ADR肾病大鼠肾脏的TGF-β1的基因表达及在肾小球，肾小管间质的分布，并分别观察辛伐他汀和苯那普利对高脂饮食肾病大鼠肾脏TGF-β1的基因表达的影响，及高脂饮食正常大鼠12周时TGF-β1基因表达。
1 材料与方法
1.1 实验动物与分组 雄性SD大鼠60只(由上海医科大学动物房提供)，体重(190±10)g，ADR制成肾病模型，将实验动物随机分为肾病+高脂饲料组（AH），肾病+高脂饲料+辛伐他汀组（AHS），肾病+高脂饲料+苯那普利组（AHB），高脂饲料组（HC），普通饲料+阿霉素组（AC）及正常对照组（C），每组10只。根据大鼠TGF-β1cDNA的序列，设计TGF-β1逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的引物，以RT-PCR法观察不同组大鼠肾脏TGF-β1mRNA在4，8，12周时的表达，并以GAPDH为内参照在紫外光激发下，用乐凯黑白胶片拍照，用T90型图像处理系统对胶片进行分析。采用固有RNA法进行RT-PCR的半定量分析。用GAPDH mRNA作为内参照，检测不同处理方法对大鼠肾脏 TGF-β1 mRNA水平的影响。用相同的逆转录产物进行PCR，使其控制在指数期，用GAPDH产物的光密度值校正 TGF-β1 产物的光密度值，然后用校正值进行统计分析。标记(地高辛)TGF-β1探针，在不同组大鼠的肾组织冰冻切片上作原位杂交，检测12周时大鼠肾脏TGF-β1mRNA的表达情况。
1.2 试剂 总RNA提取试剂盒购自Promega公司；TGF-β1原位杂交试剂盒购自Boehringer Mannheim公司。
1.3 统计学分析 采用EPI5.0软件对数据进行统计分析。各指标均用x±s表示，两组间比较采用t检验。
2 结果
见表1，图1。(图1见附页1)
图1 各组大鼠肾脏RT-PCR检测TGF-β1 产物mRNA的cDNA水平变化
表1 各组大鼠肾脏RT-PCR检测TGF-β1 产物mRNA的cDNA水平变化
注：各组大鼠肾脏RT-PCR检测TGF-β1 产物mRNA的cDNA水平4，8，12周与4周比较a：P＞0.05，b：P＜0.05；各组大鼠肾脏RT-PCR检测TGF-β1 产物mRNA的cDNA水平8，12周与AH组比较：c：P＜0.05
与AC组相比均明显升高，半定量分析也表明AH组肾脏TGF-β1 产物mRNA的cDNA由4w至8w上升明显，而由8w至12w升高幅度减缓； AHS组8w，12w时较AH组有明显差别， 与AC组差异不显著； AHB组肾脏TGF-β1 产物mRNA的cDNA 8w，12w时较AHS组略低，无显著差异； 但其8w，12w肾脏TGF-β1 产物mRNA的cDNA水平略高于HC组。HC组肾脏TGF-β1 产物mRNA的cDNA 8w，12w时较C组相比无显著差异。
原位杂交结果显示：AH组大鼠在12w时可见肾小管细胞有蓝褐色阳性细胞，弥漫，肾小球染色略浅，表明TGF-β1 mRNA在本组大鼠中信号已明显增强，且弥漫性分布；AC组大鼠在12w时可见肾小管间质细胞有蓝褐色阳性信号，局灶，肾小球染色浅，表明TGF-β1mRNA表达比高脂饮食肾病大鼠局限；AHS组大鼠12w时TGF-β1 mRNA阳性细胞在小管中明显，分布散在，信号较弱；AHB大鼠在12w时TGF-β1 mRNA阳性细胞在小管中弱，低于AHS组；HC组12w时TGF-β1 mRNA阳性信号细胞在小管中弱，少量散在分布，肾小球无阳性信号；C组大鼠12w时肾小球及肾小管均未见阳性信号细胞。
3 讨论
在不同的大鼠肾脏病变模型中，人们观察到高脂血症在加重肾脏病变的同时，可伴随肾脏TGF-β1mRNA的表达增高，并发现其表达与肾脏的病变程度密切相关［5］，表明高 脂血症至少部分通过TGF-β1引起肾脏损害。
现有的研究表明TGF-β1是一促纤维化生长因子，既有促进组织细胞增殖的特性，又有促进纤维化的作用，其能促进许多器官的纤维化。TGF-β1可明显增加培养的肾小球系膜细胞的数量［6］，还直接刺激基质分子如FN，胶原和蛋白聚糖的合成，抑制蛋白酶的分泌及诱导蛋白酶抑制剂的产生以阻止基质的降解［7］。TGF-β1可通过多种途径诱导组织纤维化，除促进肾小球硬化和肾小管上皮细胞凋亡外，还通过自分泌及旁分泌机制使间质成纤维细胞分化为纤维细胞，最终导致间质纤维化［8］。 本研究采用两种方法观察高脂饮食ADR肾病大鼠肾脏的TGF-β1mRNA表达， 用半定量RT-PCR法发现皮质肾组织TGF-β1mRNA在8，12w时均高于普通饲料肾病大鼠，与其肾脏形态学检查结果相一致。原位杂交也显示12w时高脂饮食ADR肾病组肾脏TGF-β1mRNA在肾小球及小管间质均呈阳性信号，呈弥漫分布，小管间质信号强，而普通饲料肾病组肾小球内阳性信号弱，小管间质仅呈局灶性变化，表明高脂饮食明显增强肾病大鼠肾脏TGF-β1mRNA的表达，分布以小管间质为主。而肾脏TGF-β1mRNA的高表达可明显加重肾脏的纤维化病变，因此认为高脂血症可能通过TGF-β1的作用促进肾病的进程。
实验观察到辛伐他汀对高脂饮食肾病大鼠肾脏TGF-β1mRNA表达的影响表现在治疗组大鼠肾脏肾小球及小管间质细胞阳性信号均较未治疗组明显减弱，且小管中阳性细胞呈局灶性分布，表明辛伐他汀在控制高脂血症的同时，不仅减轻肾小球和小管病变，还明显降低肾脏TGF-β1mRNA的表达强度，从而延缓肾脏的纤维化。但辛伐他汀如何降低TGF-β1mRNA在肾脏表达的确切机制不甚明了。有研究表明高脂血症时可出现RAS活性增高［9］，因此，我们认为辛伐他汀降低肾病大鼠肾脏TGF-β1的基因表达可能与其降低高脂血症而间接地抑制肾素-血管紧张素- TGF-β1轴的作用有关。
ACEI被证明能显著减轻或延缓肾脏的纤维化，作用机制与降低肾小球内压，抑制系膜细胞的扩张及抑制AngⅡ引起的TGF-β1高表达有关。
本研究用苯那普利治疗高脂饮食ADR肾病大鼠，观察到肾脏TGF-β1mRNA的表达明显减弱，肾小球内阳性信号微弱，小管间质细胞中仅见少量的阳性信号，较辛伐他汀组大鼠的肾脏TGF-β1mRNA的表达低，表明抑制AngⅡ可明显降低肾病大鼠肾脏的TGF-β1mRNA的表达。AngⅡ可刺激肾间质细胞增殖及增加ECM的积聚，引起小管间质损害［10］。另外， 通过内分泌，旁分泌及自分泌增加的TGF-β1还引起小管间质ECM的积聚和纤维化。因此，在高脂饮食ADR肾病大鼠模型中，用苯那普利治疗可减轻肾小球及小管间质病变，并下调肾脏TGF-β1mRNA的表达，进一步支持在慢性肾病过程中，抑制肾素-血管紧张素-TGF-β1对保护肾功能，延缓肾脏的硬化有重要意义。
单纯高脂饮食可引起大鼠肾脏FSGS的变化，本研究中单纯高脂饮食仅观察12w是为区别肾病模型组与正常型的差异。RT-PCR法12w时肾脏TGF-β1mRNA表达较正常增高， 原位杂交中肾小球无阳性信号，肾小管仅见少量散在的阳性信号。结果表明高脂血症正常大鼠12w时，尽管肾脏损伤轻微，但已有肾脏TGF-β1基因表达的增高，也就解释肾脏疾病一旦发生，如不干预，则往往进行性发展的原因。
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肾脏纤维化范文5
关键词： PKB； MMPs； TIMPs； 肾间质纤维化
中图分类号： R692 文献标识码： A 文章编号： 1009-8631（2011）02-0210-01
一、PI3K/PKB信号通路
1. PI3K概述
磷脂酰肌醇-3激酶是1988年Whitman M等发现的一种与细胞内信号转导有关的脂类第二信使。目前PI3Ks至少可分为三型，I型、Ⅱ型、Ⅲ型。这三型PI3Ks 具有结构上和磷酸化底物的不同，I型PI3K可磷酸化磷脂酰肌醇(简称PI)、磷脂酰肌醇-4-磷酸[简称PI-4-P]和磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸[简称PI-4，5-P2]三种底物生成相应的磷酸化产物，其在体内最常见底物为PI-4，5-P2。Ⅱ型PI3K能磷酸化PI、PI-4-P。Ⅲ型PI3K仅磷酸化PI。除了上述的磷脂激酶活性，I、Ⅲ型PI3K具有内源性蛋白激酶活性，可使其自身或调节蛋白磷酸化。PI3K的这种自身磷酸化可能参与了控制这些信号分子处于一种新的平衡水平。
2. PKB概述
蛋白激酶B是1991年Jones PF等发现的一种分子量为60Kda的蛋白激酶，因其与蛋白激酶A及蛋白激酶C均有很高的同源性(PKC为73％，PKA为68％)而得名，有人也称其为PKA与PKC相关激酶。此外该激酶被证明为反转录病毒Akt-8的癌基因v―akt编码的蛋白产物，故又称为Akt。目前发现PKB有三种亚型，PKBα(Akt1)、PKBβ(Akt2)、PKBγ(Akt3)，PKBα与PKBβ和PKBγ有将近81％和83％的同源性。PKBα和PKBβ在人体各组织中普遍表达；而PKBγ的表达则有组织特异性，主要在脑、肾、心、肺、、骨骼肌组织中表达[3]。
3. PI3K/PKB信号通路的调控
多种生长因子信号引起受体酪氨酸磷酸化，PI3K通过调节亚基与这些分子结合而活化，活化的PI3K导致其磷酸化肌醇磷脂产物增加，从而引起蛋白激酶B的活化。PH结构域是一种存在于多种信号蛋白和细胞骨架相关蛋白中的功能性区域。PH结构域的完整是PKB激活的必需条件。PI3K的磷酸化磷脂产物与PKB的PH结构域结合，使PKB向质膜转位，发生变构，在PI3K依赖激酶1的作用下，引起其苏氨酸残基磷酸化，此后，PKB的丝氨酸残基也被质膜上受PI3K调节的PKD2磷酸化[2，3]。当完成这两个位点的磷酸化后，活化PKB脱离质膜进入胞质和胞核，引起细胞生存、细胞代谢、细胞骨架重组等重要的生物学事件。
二、MMPs/TIMPs
MMPs/TIMPs 的生物学特性ECM的降解依赖于各种蛋白酶的分泌和合成。MMPs 可以降解所有的ECM 成分。MMPs 是一组依赖金属离子的内肽酶超家族，目前已发现的MMPs 有约30 种，根据其作用底物的不同可分为4大类：间质胶原酶、明胶酶(又称Ⅳ型胶原酶)、基质溶解素和膜型-基质金属蛋白酶(MT-MMP)。MMPs以酶原形式分泌到ECM中，适当条件下被激活而发挥其生理作用。MMPs的活性主要受其抑制物TIMPs的调节。TIMPs是MMPs的天然抑制剂，存在于多种组织和体液中，能在多种细胞因子的诱导下产生，与激活后的MMPs家族成员以共价键形成1∶1 的复合体，特异性地抑制MMPs的活性，参与ECM的合成与降解。TIMPs是一个多基因家族，至今已明确有4个成员，分别为:TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3及TIMP-4。目前在肾脏领域里研究较为广泛的是TIMP-1，其过度表达直接参与肾小球和肾小管间质的纤维化。
三、PKB和MMPs/TIMPs与肾间质纤维化的关系
1. MMPs／TIMPs的平衡失调与肾间质纤维化
在不同病因所致的肾纤维化病变中均存在MMPs／TIMPs的功能紊乱。不同实验方法观察可有不同的结果，但有一种共同趋势，即TIMPs高表达，和(或)MMPs话性下降。其中TIMPs高表达更为重要，因为一方面表达的MMPs并不一定活化，另一方面随MMPs的表达增高常伴有TIMPs的高表达使其活性受抑。
在肾间质纤维化的临床病例中，汤询等[4]采用免疫组化技术检测不同病程肾脏疾病患者肾组织中TIMP-1，MMP-9及Ⅳ型胶原的表达情况，结果显示肾脏病患者肾小管间质MMP-9表达较正常呈显著增强，间质纤维化程度越重则其表达越弱；肾小管间质TIMP-1表达、TIMP-1／MMP-9之比与病变肾小管肾间质比率呈显著正相关。表明肾脏病患者肾组织表达MMP-9增高有助于消除过多的ECM 肾组织纤维化形成的一种自身抑制效应；而TIMP-1表达增高，导致ECM降解减少，参与肾组织纤维化的发生机制。几乎所有肾间质纤维化模型和肾间质纤维化的临床病例中都可发现TIMP-1表达上调，故长期以来人们认为TIMP-1在肾间质纤维化的发生中起着不可替代的作用。
2. PI3K／PKB与肾间质纤维化细胞外基质沉积的关系
在肾间质纤维化中，均有细胞外基质(ECM)的堆积。正如前述，许多细胞因子可致ECM的合成与分泌增多，而PI3K／PKB在此过程中起了重要作用。同时，研究发现肾组织ECM降解系统，尤其是基质金属蛋白酶（MMPs）及其组织抑制因子（TIMPs）功能紊乱，与ECM过多堆积有关。近年体外研究发现，PBK／PKB信号通路通过改变细胞中的MMPs和TIMPs的表达从而参与ECM的降解过程。
四、结语
多数慢性肾脏病都要经过肾间质纤维化而发展为终末肾。上述研究表明，PBK／PKB信号通路在肾间质纤维化中发挥了重要的作用。肾间质纤维化是多因素的结果，目前对其分子学发病机制研究较多，但对其信号转导机制的研究较少。细胞内存在高度完善、有序、复杂的信号网系统，该系统一旦失调，将会导致细胞功能的改变。因此，进一步深入对肾间质纤维化的信号转导机制的研究，对肾间质纤维化的防治具有重要的理论和实践意义。
参考文献：
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肾脏纤维化范文6
【摘要】 目的 观察溺毒清合剂治疗慢性肾衰竭疗效及其对血清纤维化指标的影响。方法 采用具有益气温阳、化瘀泄毒功效的溺毒清合剂联合银杏达莫、至灵胶囊及降压、低蛋白饮食等方法，对34例慢性肾衰竭患者进行前瞻性研究，并与对照组(34例，以包醛氧淀粉代替溺毒清合剂)进行比较，观察治疗前后肾功能及血清纤维化指标的变化。结果 慢性肾衰竭患者血清透明质酸、Ⅲ型前胶原及层粘蛋白均明显增高(均P＜0.05)。治疗组治疗后上述指标均明显下降(P＜0.05)，肾功能亦明显改善(P＜0.01)。对照组肾功能虽有改善，但不如治疗组明显，纤维化指标变化亦不明显。结论 溺毒清合剂对慢性肾衰竭患者有抗纤维化的作用，并能改善肾功能，延缓慢性肾衰竭进展。
【关键词】 慢性肾衰竭；肾脏纤维化；溺毒清合剂
Abstract：Objective To observe the therapeutic effect of Niduqing on chronic renal failure (CRF) and the indexes of serum fibrosis. Methods Thirty four patients of CRF involved in the prospective study were randomly pided into contrast group and treatment group. The treatment group was given Niduqing combined with Yinxingdamo and Zhiling Capsule， and the contrast group was given Bao Quan oxygen amylum instead of Niduqing. The Change of the indexes of serum fibrosis and kidney function were observed. Results HA， PC-Ⅲ and LN in serum of CRF patients were higer than normal obviously (P＜0.05)， and they were decreased in the treatment group after treatment (P＜0.05)， kidney function of the treatment group were improved obviously (P＜0.01). The indexes of serum fibrosis and kidney function of the contrast group were less improved than the treatment group. Conclusion Niduqing can resist fibrosis in patients of CRF， and improve kidney function， delay the progress of CRF.
Key words：chronic renal failure；fibrosis in kidney；Niduqing
肾脏纤维化是慢性肾衰竭的病理基础，也是其进行性进展的形态学基础。本研究采用自拟溺毒清合剂治疗慢性肾衰竭患者34例，并观察其临床疗效及对纤维化指标的影响。现报道如下。
1 临床资料
1.1 病例选择
本研究为前瞻性研究。所有病例均为本院2006年3月－2007年12月期间住院患者。符合1992年黄山会议“慢性肾功能衰竭的标准及分型”诊断标准[1]，并排除慢性间质性肾炎、多囊肾病变以及合并慢性肝病、肺间质病变等，共68例最后入选进入研究，2、3期病例各34例。20例健康人为本院体检中心健康体检者，排除心、肝、肾等疾病。
1.2 一般资料
采用抽签法将68例患者随机分为2组，治疗组和对照组各34例。男37例，女31例，年龄24～74岁，平均(44.9±14.1)岁；病程最短6个月，最长23年，平均(5.1±3.8)年。血清肌酐(SCr)189～702 μmol/L，平均(348.2±126.6)μmol/L。原发病：慢性肾小球肾炎33例，肾病综合征11例，糖尿病肾病11例，高血压肾损害10例，狼疮性肾炎3例。2组一般资料及SCr比较差异无统计学意义(P＞0.05)。
2 方法
2.1 治疗方法
入院后纠正水、电解质及酸碱平衡。有可逆因素给予纠正，复查肾功能及有关指标。2组均采用低蛋白饮食[蛋白质0.8 g/(kg·d)]。常规给予苏打3 g/d，有水肿加速尿利尿，尽量保持尿量1 500 mL/d以上。对照组：①银杏达莫注射液60 mL加入5%葡萄糖注射液250 mL中静滴，每日1次。②包醛氧淀粉5 g，每日3次，口服。③至灵胶囊3粒，每日3次。④有高血压、SCr≤265 μmol/L者服苯那普利10 mg，每日1次；SCr≤356 μmol/L加缬沙坦。血压下降不理想者依次加心痛定、氨氯地平、倍他乐克及可乐定等。治疗组：改包醛氧淀粉为溺毒清合剂(本院中药房提供，主要成分为大黄、黄芪、丹参、附子、淫羊藿及牡蛎等)，每日1剂，水煎服。其他同对照组。4～6周为1个疗程。
2.2 观察项目
临床症状及体征：自觉症状、体重、血压、贫血情况。血尿素氮(BUN)及SCr采用酶法测定。β2微球蛋白(β2-MG)采用免疫比浊法测定。血清透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)及层粘蛋白(LN)等，抽晨空腹血，放免法测定。以上指标研究前后各检查1次。肌酐清除率(CCr)按公式计算：CCr(mL/min)＝[(140－年龄)×体重(kg)]/[72×血清肌酐(mg/dL)]，女性再乘0.85。
2.3 疗效标准
显效：SCr下降幅度≥132 μmol/L或肾功能恢复到代偿期(SCr＜177 μmol/L)，症状体征消失，饮食精神良好。有效：SCr下降幅度＜132 μmol/L，症状明显改善。无效：SCr下降幅度≤44 μmol/L或无改变。加重：SCr较治前上升。
2.4 统计学方法
数据用x±s表示，组间差异用t检验，疗效比较用χ2检验。P＜0.05认为差异有统计学意义。
3 结果
3.1 临床疗效
治疗组34例，显效15例(44.1%)，有效13例(38.2%)，无效4例，加重2例，总有效率82.3%。对照组34例，显效9例(26.5%)，有效15例(44.1%)，无效7例，加重3例，总有效率70.6%。治疗组疗效明显高于对照组(P＜0.05)。
3.2 2组治疗前后肾功能变化
(见表1)表1 2组慢性肾衰竭患者治疗前后肾功能变化情况(略）注：与本组治疗前比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与对照组治疗后比较，P＜0.05
3.3 2组治疗前后血清纤维化指标变化
(见表2)表2 2组慢性肾衰竭患者治疗前后血清纤维化指标的变化(略）注：与健康人比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与本组治疗前比较，*P＜0.05；与对照组治疗后比较，P＜0.05
4 讨论
近年来，随着分子生物学研究的进展，肾脏病学的研究也已进入到分子水平，研究表明细胞外基质(ECM)的大量积聚能引起肾小球硬化和小管间质的纤维化[2]。他们不仅是慢性肾衰竭的病理基础，也是其进行性进展的形态学基础。ECM主要由胶原蛋白、糖蛋白及蛋白多糖组成。HA是蛋白多糖的一种，LN属糖蛋白，而PC-Ⅲ、C-Ⅳ是胶原蛋白的主要成分。血清中这些成分的增高，在一定程度上反映着体内纤维化的增强[3]。本研究结果显示，慢性肾衰竭患者体内HA、PC-Ⅲ、C-Ⅳ及LN均有明显增高，与文献报道一致。再次证明慢性肾衰竭患者体内肾脏的纤维化活动增强。
中医学认为，溺毒系因脾肾衰败、二便失司，湿浊毒邪不得由尿液排泄，滞留于体内而产生的一种病症，与现代医学的慢性肾衰竭相当。脾肾虚衰是肾脏衰竭的根本，瘀浊内阻是肾衰恶化的基础[4]。我们据此理论，设计以黄芪、大黄、淫羊藿、丹参、附片、牡蛎组方溺毒清合剂，具有益气温阳、化瘀泄毒的功效。我们曾以溺毒清合剂治疗慢性肾功能衰竭32例取得明显效果[5]。在此基础上，我们对其作用机制进一步进行探讨。丹参、黄芪等中药具有抗纤维化及抑制胶原分泌作用。大黄治疗慢性肾衰竭已在临床广泛应用，不仅能通腑降浊，并具有抗炎、抑制细胞因子和系膜细胞增殖作用。王氏等[6]用活血化瘀药及大黄组成的“抗纤灵冲剂”治疗60例慢性肾衰竭患者，治疗后血清SCr、BUN、LN、PC-Ⅲ均比治疗前明显降低，而对照组血清纤维化指标均无改善。笔者曾用含大黄、红参、丹参等组成的肾衰康治疗慢性肾衰竭患者，发现有降低血清C-Ⅳ、LN及PC-Ⅲ等纤维标志蛋白作用，并证明肾衰康是通过抑制肾脏纤维化，达到改善肾功能和延缓慢性肾衰竭进展的作用[7]。
本研究结果显示，无论治疗组及对照组对BUN、SCr及CCr指标均有明显改善，而加用溺毒清合剂的治疗组，HA、PC-Ⅲ、C-Ⅳ及LN亦有不同程度的下降。提示中药溺毒清合剂可能通过抗肾脏纤维化而起作用。
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