补肾中药范文1
肾阳主导一身之阳气，火衰其本则肾阳虚之证迭出，因此肾阳虚的本质一直是中医研究的重点［1］。自1959年始至今对肾阳虚证的研究已近50年了［2］，现已知道肾阳虚的发病环节为下丘脑－垂体所辖的甲状腺、性腺、肾上腺皮质这三条轴不同水平、不同程度的功能紊乱，以及下丘脑－垂体－肾上腺皮质－胸腺（HPAT）受抑制，从而使机体神经内分泌免疫网络系统功能改变。通过温补肾阳药物的“以药测证”及大量的临床观察及动物实验，已确定肾阳虚的发病环节在下丘脑（或更高中枢）［3］。本文仅就补肾中药对肾阳虚证患者影响的临床观察作一综述。
1 肾阳虚证辨证因子、辨证分型及其给药
为探讨肾阳虚证辨证客观量化指标，据古今文献及各种辨证指标制定了肾阳虚证辨证因子评分表。通过对300例肾阳虚证患者的调查验证，结果表明，辨证因子出现频率较高的依次为畏寒（89.66％）、肢冷（83.66％）、夜尿（76.66％）、腰背发冷（75.33％）、口淡无味（71.00％）、精神萎靡（62.33％）、尺脉不足（61.33％）、腰膝酸痛（61.33％）、头晕目眩（61.00％）等。经聚类分析，肾阳虚主证有三大类，（1）脉象类：脉无力、尺脉不足、沉脉、迟脉；（2）舌象类：舌质淡肿、苔白滑；（3）畏寒、腰背发冷、腰膝酸痛。调查还显示：肾阳虚证的主症、舌象、脉象及水液代谢失调等辨证因子出现频率较高，而生殖失常的辨证因子（如性欲减退、遗精、阳痿、早泄、阴冷）出现频率较低［4］。肾阳虚主证表现于机体各部失于温煦，并伴有各脏腑及生殖功能减退，水液代谢失调等方面异常的证候，故肾阳虚证还有一些常见的兼证。肾阳虚证分型及其对证药物有：肾阳虚、阴寒内盛证，治以四逆汤（附子、干姜、炙甘草），温阳散寒；肾阳虚兼经脉不通证，治以附子汤（附子、人参、茯苓、白芍、白术），温经散寒止痛，此以女子多见。肾阳虚兼脾失温运证，治以四神丸（肉豆蔻、补骨脂、五味子、吴茱萸、生姜、大枣），补肾暖脾，固肠止泄；肾阳虚兼水饮泛滥证，治以真武汤（附子、茯苓、白术、白芍、生姜），温阳化气利水；肾阳虚、命门火衰证，治以右归丸（熟地、山药、山茱萸、枸杞、鹿角胶、菟丝子、杜仲、当归、肉桂、附子），温补肾阳，填精益髓；肾阳虚兼肾阴不足、水气不化证，治以金匮肾气丸（附子、肉桂、熟地、茯苓、山药、山茱萸、丹皮、泽泻），补肾助阳益阴，化气行水［5］。根据《黄帝内经》“择时服药”理论及现代时间生物学原理，对180例肾阳虚患者采用卯时（上午5～7时）和酉时（下午17～19时）服用补肾阳药进行临床对比观察。结果：服药4周后，治疗组（给予补肾汤每日卯时服用、1剂/d）、对照A组（给予金匮肾气丸9 g/次、2次/d）、对照B组（给予补肾汤每日酉时服用、日1剂）的总有效率分别为96.7％、86.7％和86.7％，显效率分别为61.75％、33.3％和43.3％。上述总有效率、显效率治疗组均显著高于对照A组和对照B组。这说明卯时用药效果最好［6］，由于辰时服补阳药能借助人体阳气的欲盛之势（现代研究证实人体睾酮水平的高峰出现在早晨8时［7］），充分发挥药物的效能，可使疗效进一步提高。
2 补肾中药对下丘脑－垂体－肾上腺皮质轴的影响
长期大量应用糖皮质激素，可使机体下丘脑－垂体－肾上腺皮质功能低下，进而引起器质性病变，这是激素的严重副作用。临床以滋阴降火和温补肾阳中药保护肾上腺皮质、拮抗外源性激素的反馈抑制作用。如中西医结合治疗肾病综合征可减少长期大剂量服用激素的副作用，增加疗效。对100例儿童肾病综合征患者的激素和补肾中药的治疗表明，以中药调整机体阴阳平衡，增强免疫力，可减少激素对淋巴组织的抑制作用，减少感染［8］。另外，将单纯性肾病综合征20例患者分为对照组和试验组。对照组单纯使用激素，试验组激素治疗并同时加服滋阴降火和温补肾阳中药，中药一直用至激素停药后3个月。结果显示，大剂量泼尼松使肾上腺功能受抑，而补肾中药对血浆皮质醇分泌无明显影响，当泼尼松减半后，血浆皮质醇呈上升趋势。说明补肾阳药有保护肾上腺皮质拮抗外源性激素的反馈抑制作用。补肾中药对激素治疗无不良影响［9］。肾阳虚患者有下丘脑－垂体－肾上腺皮质功能障碍，由于老年人的肾上腺对促肾上腺皮质激素（ACTH）反应性降低，肾上腺重量减少，尿中17－酮皮质类固醇排泄量较青壮年低，说明衰老与内分泌功能及与中医的肾虚有密切关系［10］。
3 补肾中药对下丘脑－垂体－甲状腺轴的影响
探讨中西医结合对桥本甲状腺肿的临床疗效。60例桥本甲状腺肿患者，其中25例单用优甲乐治疗作为对照组，35例小剂量优甲乐加用补肾中药作为观察组。以观察治疗前后临床症状的改善及甲状腺球蛋白抗体（TgAb）和甲状腺微粒体抗体（TmAb）的变化来研究其疗效。结果观察组临床表现明显好于对照组，而两组间TgAb 和TmAb无显著性差异［11］。对37例肾阳虚患者和49例正常人血清以放射免疫分析法分别测定血清游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、血清游离甲状腺素（FT4）及垂体分泌的促甲状腺素激素（TSH）。结果肾阳虚患者的FT3，FT4明显低于对照组，并有显著性差异，故认为FT3，FT4在诊断肾阳虚证上有较高的诊断价值［12］ 。以肉苁蓉补阳汤对31例肾阳虚患者进行治疗，观察其治疗前后FT3，FT4和TSH的变化，并与对照组比较。结果：治疗前肾阳虚患者的FT3，FT4均低于治疗后和对照组，而TSH则相反［13］。以激素和右归丸加黄芪、党参及真武汤、金匮肾气丸分别治疗33例脾肾阳虚型和心肾阳虚型甲状腺功能减退症患者，均取得满意疗效，但单纯中药治疗则疗效不能持久［14］。用真武汤加减治疗30例脾肾阳虚型甲状腺功能减退症患者，以小剂量L-甲状腺钠片加真武汤加减作为实验组，以单纯L-甲状腺钠片治疗作为对照组，检测治疗前后FT3，FT4和TSH以及三碘甲状腺原氨酸（T3）和甲状腺素（T4）的变化，结果实验组总有效率为93.3%，对照组为70%，二者差异显著［15］。对30例老年性甲状腺功能减退症（脾肾阳虚型）患者以温肾健脾中药治疗4～20周，有效率达93. 33%［16］。
4 补肾中药对下丘脑－垂体－性腺轴的影响
对38例男性不育症患者给予口服金匮肾气丸治疗，并作治疗前后的精液分析，检测血清卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、睾丸酮（T）、泌乳素（PRL）和雌激素（E2）水平。结果金匮肾气丸治疗1个疗程（3个月）后，FSH，LH和T均有明显上升，而PRL和E2无明显改变。经治疗患者症状改善，总有效率达92.1%，且提高了精子数量，改善了精子质量，增强了精子活力［17］。将165例肾阳虚不育症患者随机分为两组，其中治疗组102例，对照组63例。治疗组以右归饮为主方，对照组常规使用甲基睾丸素。治疗组60 d为1个疗程，其服用1个疗程、两个疗程和3个疗程的分别为74例、23例和5例。结果治疗组总有效率为80.4%（82/102），对照组为54%（34/63），两组差异显著。并且治疗组治疗前后精液数量、质量及精子活率和FSH，LH及T水平变化显著，提示右归饮对人体内分泌功能的调节及男性不育症有治疗作用［18］。以调节性激素来调整肾虚患者的阴阳平衡，对32例男性冠心病肾虚患者分为肾阴虚15例，肾阳虚17例，对照组为无器质性病变者15例。两个治疗组给予丽参注射液，疗程2周，观察其治疗前后E2，T和E2/T的变化。结果治疗前与对照组比较，肾虚两组T均较对照组低，肾阳虚组T降低显著，肾阴虚组E2，E2/T升高，肾阳虚组E2降低显著，肾虚两组E2，E2/T差异显著。治疗后，肾阴虚组E2，E2/T回落，T回升显著，与对照组无差异。肾阳虚组E2和T回升，接近对照组，E2/T有所升高，但其与治疗前和对照组无统计学差异。治疗后临床表现计分，肾虚两组比较无显著性差异，表明丽参中药可改善肾虚两组症状，平衡阴阳之功效［19］。用首乌还精胶囊治疗159例精子异常不育症脾肾阳虚患者，检测其精液、血清中激素（FSH，LH，T，PRL和E2）水平以及锌（Zn）含量。对照组为38例健康男性，不做治疗。治疗组服药3次/d，5粒/次，3个月为1个疗程，据病情治疗1～3个疗程。结果治疗组总有效率为94.97%（151/159），治疗前后精液质量、数量、精子活率差异显著。治疗后T和Zn较治疗前显著升高，FSH和LH较治疗前显著降低，表明首乌还精胶囊能促使精子、精浆质量改善，对性激素的分泌释放有调节作用，并可补锌［20］。观察五子衍宗丸合加味肾气丸对肾阳虚不育症患者精子DNA的影响，应用流式细胞仪分析精液中精子DNA。对照组为15例正常生育男性，异常组为16例结婚两年以上，29～48岁的不育男性，分别取其标本检测。结果异常组经12周服药治疗后，精子密度、存活率及异形精子数无明显变化，而精子正常形态比率提高约8%。精子DNA中二倍体、多倍体明显减少，正常单倍体精子增多，提示流式细胞技术是研究中药对精子质量影响的一种有价值的方法［21］。以健男春胶囊治疗肾阳虚阳痿100例，15 d为1个疗程，治疗两个疗程。结果：总有效率为88%，其中轻、重度患者的治愈率分别为92.3%（24/26）和22.9%（8/35），并显示健男春胶囊对青年、短期发病者和轻度患者治疗效果好［22］。关于老年人生理性肾阳虚也表现在下丘脑－垂体－性腺轴上，对320例老年人的调查显示：其中肾阳虚者123人（38.43%），尽管其血清T，E2，T3，T4检测尚在正常范围内，但其临床表现符合肾阳虚诊断标准，老年肾阳虚患者有64人阳痿［23］。
5 补肾中药对下丘脑－垂体－肾上腺皮质-胸腺轴的影响
对37例重症肌无力患者（其中18例为胸腺增生，19例为胸腺瘤）行中医辨证和手术治疗。对于术前依赖激素的病例，通过温补肾阳中药的调理，可逐步减轻部分激素的副作用，调整激素对机体内环境的干扰，以便逐步递减激素剂量，为手术切除创造条件，减少并发症［24］。新近的一些实验研究表明，衰老－生理性肾虚与HPAT轴分子网络的调控密切相关，认为神经内分泌与免疫系统之间存在双向信息传递机制，即免疫系统不仅受神经内分泌系统的调控，而且还能调节神经内分泌系统的某些功能，它们拥有一套共同的化学信息分子与受体，使这3个系统之间得以相互交通和调节，呈现多维立体状的网络联系。将44例老年人分为两组，实验组给予补肾益寿胶囊，对照组给予安慰剂。采用流式细胞术检测其T细胞凋亡率。结果在服用补肾中药后，T细胞凋亡率较对照组显著降低。提取T细胞的RNA，用多聚酶链式反应（PCR）测定T细胞Fas和FasL基因，结果用药后降低了Fas基因mRNA水平，从而降低了T细胞的凋亡率。老年期T细胞过度凋亡是免疫功能下降致病的主要原因，故通过调节T细胞凋亡延缓衰老正成为一个新的抗衰老策略［25］。检测24例患者α－醋酸萘酯酶（ANAE）发现肾阳虚患者单核细胞ANAE活性显著低于肾阴虚患者，且肾阳虚患者以辅助T细胞（TH）下降为主，肾阴虚以抑制T细胞（TS）下降为主［26］。临床报道以补肾中药调节肾阴阳平衡，达到对性早熟和衰老的调控［27］。另外，利用基因芯片筛选分析肾阳虚体质的青少年外周白细胞差异表达基因，已证实这些基因涉及免疫相关、发育相关、细胞生长、细胞受体、细胞信号和传递蛋白及其蛋白翻译合成等［28］。
对于“证”的基因调控网络研究需要采用以基因芯片为手段研制该证的基因表达谱，如能采用有效的中药加以干预，既可通过纠正基因网络失衡，以“差异分析”而找到基因表达的差异谱，同时又是“以药测证”动态观察到与该证相关基因群遵循的规律，以此阐明证的本质［29］。
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补肾中药范文2
【摘要】
干细胞研究是目前国内外科学界关注研究的热点领域，文章回顾了补肾益精中药促进干细胞向成骨细胞、造血细胞、心肌细胞、血管内皮细胞、神经细胞、肝细胞及生殖细胞等多方面增殖分化的研究，为干细胞的研究提供了新的思路。
【关键词】 补肾益精中药 干细胞 分化
干细胞研究是近些年来国内外科学界关注的热点领域，由于干细胞具有多向分化及自我增殖的能力，故在细胞替代治疗、基因治疗、组织工程等方面具有良好的应用前景。祖国医学认为：肾藏精主生殖，肾主骨生髓化血通于脑，肾精的盛衰决定着人体的生长、发育与生殖。由于肾精在内涵及功能上与干细胞有相似之处，目前相关的大量研究表明，许多补肾益精中药可促进骨髓造血干细胞增殖分化，并可促进成骨细胞、血管内皮细胞、神经细胞、肝细胞及生殖细胞等的再生，故加强补肾益精的研究可望为干细胞开创新的治疗途径。现将补肾益精中药在干细胞研究中的应用进展综述如下。
1 肾精与干细胞的相似性
祖国医学认为，精是生命的根源物质，精气藏于肾。《素问·六节脏象论》说：“肾者，主蛰，封藏之本，精之处也。”《素问·金匮真言论》曰：“夫精者，身之本也”。肾中所藏之精可分先天之精与后天之精，其中，人出生之前，在母体中所获得者为先天之精。《灵枢·本神》所说：“生之来，谓之精。”《灵枢·阴阳脉解》说：“两神相搏，合而成形，常先身先，是谓精。”《灵枢·经脉》：“人始生，先成精，精成而脑髓生，骨为干，脉为营，筋为刚，肉为墙，皮肤坚而毛发长。”论述了胚胎的形成、发育的过程，认为精是形成胚胎、构成人形的原始物质。这种先天之精来源于父母的生殖之精-即精子和卵子结合后的受精卵，受精卵作为全能干细胞，是构成胚胎发育的原始物质，在母腹内促使胎儿形成并发育完善，故先天之精在含义上与胚胎干细胞是极为相似的。
此外，精不仅是构成人体的基本物质，也是人体生长发育及各种功能活动的物质基础。出生之后，通过肺吸入之清气，脾胃吸收之水谷精气，不断化生为后天之精。后天之精能推动促进机体的生长、发育和生殖，并调节人体的各种生理功能活动。这种“精”的特点是能化，如《素问·阴阳应象大论》所云：“气归精、精归化”，所谓化就是能化生出身体的各种脏器组织及气血津液等所有成分，故具有再生的信息。因此，从中医学的眼光看，中医所言的“精”与多潜能干细胞在内涵与功能上具有很大的相关性［1］。因此，通过补肾益精治疗，有可能通过促进干细胞的增殖分化能力，从而达到修复再生器官、恢复器官功能细胞的作用。
2 补肾益精中药促进骨髓干细胞增殖分化的研究
中医学很早就认识到肾与骨髓关系密切，《黄帝内经》曰：“肾藏精，主骨生髓”“骨者，髓之府”“髓者，骨之充也”“肾生骨髓”。
2.1 补肾益精中药促进骨髓干细胞向成骨细胞分化根据补肾益精中药具有生髓壮骨功效的理论，国内许多学者通过大量动物实验与临床实践均发现，补肾类中药能促进骨髓干细胞向成骨细胞的增殖分化。
陈薇等［2］研究发现，中药龟版提取物浸膏洗脱后的组分具有促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖的作用。郑良朴等［3］观察不同浓度的补骨合剂（补肾壮骨汤基础化裁）对体外培养骨髓间充质干细胞（MSCs）分化的影响，发现补骨合剂可以促进MSCs分泌碱性磷酸酶和骨钙素，从而加速MSCs向成骨细胞分化。王和鸣等［4］研究巴戟天对骨髓基质细胞向成骨细胞分化的影响，结果发现，巴戟天水提物及醇提物均能促进含药血清法体外培养的骨髓基质细胞向成骨细胞分化，且巴戟天醇提物的作用强于水提物。曾意荣等［5］观察补肾活血中药（由熟地、杜仲、补骨脂、川牛膝、木瓜、枸杞子、丹参、广木香等组成）含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的作用，结果发现补肾活血中药含药血清能对大鼠MSCs在体外增殖能力有促进作用。马慧萍等［6］将淫羊藿总黄酮（TFE）和含TFE的大鼠血清加入大鼠MSCs培养液中，进行细胞增殖和成骨性分化的分析，结果表明TFE活性代谢产物强烈刺激MSCs的增殖和成骨性分化。肖鲁伟等［7］观察复方右归饮含药血清对胎兔骨髓基质细胞体外培养的增殖及向软骨细胞诱导分化的影响，结果发现，不同浓度右归饮含药血清对培养骨髓基质细胞均显示增殖刺激作用，右归饮含药血清诱导后细胞形态由原先的长梭形、纺锤形逐渐变为圆形、椭圆形，Ⅱ型胶原免疫组化染色显示呈现阳性，表明右归饮可诱导骨髓基质细胞定向分化为软骨细胞。
以上这些研究提示中药可以促进骨髓干细胞向成骨方向分化，从而在治疗骨质疏松症、骨缺损疾病方面，或在骨组织工程研究中具有很大的应用前景。
2.2 补肾益精中药促进骨髓造血干/祖细胞的增殖分化精血同源，肾与血液的生成有着极为重要的关系，精血可相互滋生转化，肾中所藏的先天之精不仅可以化生为肾气，也能够化生为血液。《张氏医通》云：“血之源头在乎肾”。张景岳在《景岳全书·血证》亦曰：“血即精之类也”。《侣山堂类辨》：“肾为水脏，主藏精而化血”。故通过补肾固精的中药治疗，有可能起到生髓化血的作用。
国内不少学者根据以上理论开展中医药对骨髓造血干/祖细胞生物学的研究由来已久，通过采用多种骨髓损伤的动物模型进行补肾生髓化血的实验研究，并在治疗血液病、放化疗后骨髓抑制等方面进行了大量相关的临床观察，结果表明，补肾生髓中药有保护骨髓、促进造血的作用。
如张荣华等［8］发现补肾活血方（当归、丹参、仙灵脾、骨碎补等）对免疫介导的再障小鼠骨髓CD45+细胞、骨髓有核细胞有保护作用，其机理可能是补肾活血中药能促进骨髓干细胞的增殖分化。张新华等［9］发现益髓生血灵（含熟地、山萸肉、当归、鸡血藤、砂仁、补骨脂、黄芪、党参、龟版胶及阿胶等）对小鼠骨髓粒-巨噬细胞集落形成单位（CFU-GM）、红系爆式集落形成单位（BFU-E）和红系集落形成单位（CFU-E）均有促进增殖分化作用。陈志雄等［10］研究活髓片（黄芪、当归、川芎、补骨脂等）对环磷酰胺造模小鼠骨髓DNA影响，发现补肾活血中药方可以促进骨髓细胞由G1期进入S期，保护骨髓和促进骨髓细胞的DNA合成。梁毅等［11］研究发现，活髓片对免疫介导再障小鼠骨髓造血微环境紊乱状态有改善作用，可降低骨髓基质细胞凋亡率，促进培养细胞的血管细胞黏附分子（vascular cell adhesion molecule，VCAM-1）的表达，增加骨髓基质细胞的增殖能力。上述诸多研究证实了肾精充足，髓海充盈，则可促进骨髓的造血功能。
2.3 补肾益精中药促进心肌细胞及血管内皮细胞的分化有学者对补肾益精中药在心血管系统再生修复方面的应用有所报道，如朱丹燕等［12，13］研究了淫羊藿苷诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化的作用，结果发现，10-7 mol/L淫羊藿苷可体外诱导胚胎干细胞分化为心肌细胞，分化的心肌细胞经免疫荧光染色后，心脏α-辅肌动蛋白、肌钙蛋白T呈阳性。血管生成属于中医“血”“脉”理论范畴，“脉为血之府”，现代医学认为来源于骨髓的内皮祖细胞参与胚胎期及出生后血管的新生与修复，与祖国医学“肾主骨藏精、精血同源”理论有相通之处。王蕾等［14］通过免疫组化的方法观察补肾生血药（熟地、山茱萸、黄芪、阿胶等）对老年金黄地鼠子宫组织血管生成因子碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、血管内皮生长因子（VEGF）表达水平的影响，结果表明补肾生血药能够明显改善老龄动物的生理性肾虚症状， 且促进局部血管生成。张树成等［15～17］研究补肾生血方(山茱萸、熟地黄、龟甲胶、阿胶、当归等)和补肾调经方(当归、熟地黄、菟丝子、枸杞子、五灵脂等)对老年雌性金黄地鼠（符合老年生理性肾虚症状）的促血管再生作用，发现这两个方药均具促进子宫组织血管生成作用，提示补肾中药具有整体促血管新生作用。并采用自身对照方法，对服用补肾调经中药前后的人治疗前后着床期子宫内膜组织的VEGF、VEGF受体（VEGFR）、bFGF/FGF、血小板衍化生长因子受体-α（PDGFR-α）、表皮生长因子受体（EGFR）进行免疫组化的对比分析，结果发现服用中药后5种血管生成因子的表达强度和阳性细胞率均明显增加，提示中药具有整体促进血管生成的作用，并进而提出“补肾生脉”说。
由上可见，补益肾精治疗可促使骨髓干细胞向成骨细胞分化，并可促进骨髓造血干/祖细胞、心肌细胞、内皮祖细胞等的增殖分化能力，揭示了“肾主骨生髓化血”的科学内涵。
3 补肾益精中药促进神经细胞再生
肾主骨生髓，而“脑为髓之海”（《灵枢·海论》），“髓者，以脑为主”（《素问·奇病论》），“人始生，先成精，精成而脑髓生”(《灵枢·经脉》)，所以脑和髓的名称虽然不同，而实际上是同出肾精一源的，肾精是脑髓形成的物质基础，肾精充足则脑髓充盈，人体便精力旺盛，智慧灵活；肾精不足脑髓空虚，导致记忆力、智力下降。《灵枢·海论》曰：“髓海不足，则脑转耳鸣，胫酸眩冒，目无所见，懈怠安卧。”补肾益精中药改善记忆力减退、反应迟钝、思维丧失、神志呆钝等症状的功能已被很多实验证实，多种中医脑病如痴呆、中风后遗症、小儿脑瘫、儿童智力低下、脑萎缩等均表现出脑髓虚损的证候， 由于肾精亏损是直接原因，故均可从肾论治，通过补肾填精、充髓益智以治本［18］。
国内有不少学者根据祖国医学“肾藏精生髓通脑”的理论，开展了补肾益精中药诱导骨髓干细胞向神经细胞分化的研究，如张进等［19］观察发现龟版水煎液可体外诱导分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞转分化为神经干细胞，但未能被诱导为神经元样细胞与星形胶质细胞。陈东风等［20］观察龟版含药血清体外诱导成鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的能力，结果发现成年大鼠骨髓间充质干细胞受龟版血清诱导后神经元样细胞NF表达阳性，且阳性表达达到高峰，故认为补肾中药龟版可减轻神经损伤症状，并对局灶性脑缺血后神经干细胞有促进增殖作用。高唱等［21］研究左归丸（主要成分为熟地黄、怀山药、枸杞子、山茱萸、菟丝子、牛膝、鹿角胶、龟版胶等）对分离培养乳鼠神经干细胞增殖分化的作用，发现左归丸可部分拮抗左旋单钠谷氨酸对神经干细胞的抑制作用，显著增加Nestin阳性细胞的比率。蔡光先等［22］探讨地黄多糖对骨髓间充质干细胞分化为神经细胞的诱导效应，地黄多糖组经地黄多糖诱导培养24 h后细胞显示为典型的神经细胞样形态，神经丝蛋白与胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数均明显高于β-巯基乙醇组，而对照组神经丝蛋白及胶质纤维酸性蛋白染色均为阴性。因此认为，地黄多糖具有诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的作用。
故目前的研究结果表明，补益肾精治疗可促使骨髓干细胞向神经样细胞分化，揭示出“肾藏精生髓通脑”的科学内涵。
4 补肾益精中药促进肝细胞再生
祖国医学历来有“肝肾同源”之说，《素问·阴阳应象大论》云：“肾生骨髓， 髓生肝”，生理上，肝肾同居下焦。肝血肾精同化于水谷精微，肾精可以化生肝血，肝血可以化养肾精。病理上亦会相互影响，肾精亏损，最易导致肝血不足；肝血不足，也可引起肾精亏损。
国内李瀚旻等［23，24］根据该理论采用骨髓形成肝细胞动物模型对比观察左归丸对实验小鼠骨髓形成肝细胞的影响，结果发现左归丸能够促进骨髓形成肝细胞，并认为，补肾促进骨髓形成肝细胞的作用机制可能在于调节全身机能和改善肝脏微环境，有利于骨髓细胞移行至肝脏并转化为肝细胞。他们以左归丸治疗经左旋谷氨酸单钠皮下注射结合肝大部切除复制肝肾精血亏虚证动物模型后，结果发现，左归丸在改善模型动物肝再生过程的同时，还可促进模型动物骨髓有核细胞增生，升高外周血红细胞和血红蛋白。卓勤等［25］观察了补肾益精药物益肾宝及左归饮对老年小鼠肝细胞DNA双链结构及损伤修复能力的影响，结果发现，老年小鼠肝细胞DNA的融解温度（Tm）及热增色效应较青年小鼠显著升高，服用补肾益精药物后其Tm及热增色效应明显降低，表明补肾益精药物可以减少老年小鼠肝DNA损伤程度，提高其损伤修复能力，改善其DNA结构的增龄性变化。
由上可见，补肾益精中药具有促进肝细胞再生的作用，上述研究证实了中医学肾与肝的密切联系。
5 补肾益精中药促进生殖细胞再生
肾主生殖，天癸是由肾精产生的精微物质，具生殖功能。《类经》云：“天癸者，……人之既生，则此气化于吾身，是为后天之元气。第气之初生，真阴甚微及其既盛，精血乃旺。故女必二七，男必二八而后天癸至，天癸既至，在女子则月事以时下，在男子则精气溢泻，盖必阴气足而后精血化耳。”天癸，在女子为血，男子则为精，其源头在肾。通过补益肾精治疗，可起到调节改善人体生殖功能的作用。
张树成等［26］观察两例放疗后致无精子不育的精原细胞瘤病例，予服用补肾生精中药治疗后（含菟丝子、女贞子、五味子、韭菜子、生地、首乌、党参、白花蛇舌草、蜈蚣、水蛭等），发现患者由无精、偶见精子到具有接近正常的精液质量表现，故提出中药在明确的生精作用中可能具有尚未引起重视的对生精干细胞的直接作用，首次提出中药对生精干细胞可能具有诱导或促分化的作用。
6 结语
传统中医学认为，人是有机的整体，天人合一、顺应自然，强调整体观念，只要顺应人体生命规律，自然地充分发挥机体固有机能，就有可能再生修复到病损以前的状态。肾中所藏精气，是生命的基础与动力，是脏腑阴阳的根本，只有肾精充足，才能维持各种正常的生理活动。“精气夺则虚”，肾精亏虚可导致脏腑功能的不足，故可采取“虚者补之”“损者益之”“形不足者，温之以气，精不足者，补之以味”等方法，通过补肾益精法扶持调整脏腑本来具有的机能，同时也启发或者刺激脏腑潜在机能的一面。这种重视人体先后天精气、利用人体自身内在的再生修复能力、通过“扶正”而“祛邪”的中医学理论与目前利用干细胞达到再生修复作用的方法是相通的，且更为简便易行。
通过上述研究的结果，我们相信，随着干细胞研究方法的不断改进和对中医肾精理论认识的不断深入，将会进一步促进补肾益精中药干预干细胞分化的研究，并具有重要的临床意义和广阔的应用前景。 参考文献
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补肾中药范文3
【关键词】 补肾调经汤
摘要：【目的】观察补肾调经汤内服加活血散结栓塞肛对子宫内膜异位症(简称内异症)体液免疫及异位子宫内膜的影响。【方法】SD大鼠130只，随机分为10组，分别为正常对照组、模型组、丹那唑阳性对照组及不同剂量补肾调经汤灌胃或加用和单独使用活血散结栓塞肛治疗7个组。除正常对照组外，其他组均复制大鼠子宫内膜异位症模型，然后分别给药，治疗4周后检测血清IgG、IgM、IgA抗体和补体C3、C4及谷丙转氨酶(ALT)水平，进行胸腺、卵巢、子宫、异位移植物及肝、肾组织的病理学检查。【结果】大鼠内异症模型手术4周后，异位的子宫内膜生长良好，IgG、C3水平升高，IgM下降，子宫、卵巢增大；中药及丹那唑治疗后均可使异位的内膜萎缩，3倍人用剂量中药灌胃加塞肛或5倍量组IgG值下降，5倍量中药塞肛或加灌胃组C3值下降，5倍量中药灌胃加塞肛组子宫和卵巢缩小；丹那唑对模型动物的性周期有抑制作用，而中药组均无此作用；各给药组均对大鼠的ALT无明显影响。【结论】补肾调经汤内服加活血散结栓塞肛可使内异症模型大鼠的子宫内膜萎缩，改善其体液免疫功能。
关键词：子宫内膜异位症／中药疗法；子宫内膜异位症／免疫学；
子宫内膜异位症／病理学；补肾养血；活血祛瘀；免疫，体液；疾病模型，动物
子宫内膜异位症(简称内异症)是指具有生长功能的子宫内膜组织出现在子宫腔以外的部位所引起的疾病。近年来本病的发病率不断上升，在临床上，用丹那唑治疗出现闭经、肝功能异常等副反应。我们用补肾调经汤内服加活血散结栓塞肛治疗内异症，取得了较好的疗效。为观察这些中药对体液免疫及异位子宫内膜的作用，我们进行了补肾调经汤灌胃加活血散结栓塞肛治疗内异症模型动物的实验研究，现将结果报道如下。
1 材料和方法
11 动物
普通级SD雌性成熟大鼠130只，体重250～300*!g，合格证号2001A056，由广州中医药大学实验动物中心提供(粤检证字2002B001)，每日观察阴道细胞共4周，证实均有正常的排卵周期。
12 药物、试剂与仪器
灌胃用补肾调经汤组成：熟地黄、菟丝子、桑寄生、淮山药、鸡血藤、川楝子、淮牛膝等，以上中药煎成浓缩液，含生药5*!kg／L；塞肛用活血散结栓组成：丹参、赤芍、三棱、莪术、蒲黄、五灵脂、大黄等，制成塞肛栓，每枚相当于生药42*!g，均由广州市中医院制剂室提供；丹那唑溶解为混悬液，由江苏联环药业股份有限公司生产，批号：20011020；IgG、IgM、IgA抗体和补体C3、C4试剂盒由上海基因公司提供，批号：20010507；谷丙转氨酶(ALT)检测试剂由中科院中生生物工程公司提供，批号：20010109；OLYMPUS AU400全自动生化分析仪(日本)。
13 检测指标和方法
131 检测血清IgG、IgM、IgA抗体和补体C3、C4水平
采大鼠血2*!mL置玻璃试管内，4000*!r/min离心5*!min，取血清，在全自动生化分析仪上，采用透射比浊法检测。
132 检测血清ALT水平
取血清，在全自动生化分析仪上，用速率法检测。
133 组织学检查
取动物标本用体积分数为10%福尔马林液固定后，常规包埋，切片厚4*!μm，用苏木素伊红(HE)染色，在光学显微镜下观察。
134 大鼠性周期的观察
每天用1*!mL注射器取生理盐水005*!mL，注入大鼠阴道内，回抽液体滴在玻片上，稍干后在光学显微镜下观察，满视野角化细胞或大量有核上皮细胞并少量角化细胞为动情期。
14 实验方法
141 分组
130只大鼠除空白对照组12只外，其他均复制成子宫内膜异位症模型。将内异症模型大鼠随机分为9组，每组12只。根据剂量估换公式计算并分为：相当于人的等效剂量(正常量)147*!g・kg－1・d－1塞肛组、正常量中药132*!g・kg－1・d－1灌胃加147*!g・kg－1・d－1塞肛组；人用剂量的3倍(3倍量)中药396*!g・kg－1・d－1灌胃组、396*!g・kg－1・d－1灌胃加3倍量441*!g・kg－1・d－1塞肛组；人用剂量的5倍(5倍量)中药66*!g・kg－1・d－1灌胃组、5倍量735*!g・kg－1・d－1塞肛组和66*!g・kg－1・d－1灌胃加735*!g・kg－1・d－1塞肛组，阳性对照用丹那唑4667*!g・kg－1・d－1灌胃组和模型对照组。
142 、造模方法
参考Do Won Hahn等的造模方法［1］，大鼠用100*!g/L的水合氯醛液，按033*!mL・kg－1腹腔注射麻醉后，常规消毒开腹，暴露子宫，切除右侧子宫1*!cm，作为移植物，纵向剖开该段宫腔，暴露子宫内膜，将内膜面贴于直肠侧的子宫体上，用0／4吸收线固定，逐层缝合腹壁。术后用抗菌素预防感染，并注意伤口护理，术后4周随机取6只处死，开腹见有少量腹水和部分肠管粘连，取出异位移植的组织，肉眼见形成水泡样，表面见新生的小血管；组织学检查见异位种植物中有子宫内膜上皮细胞层，证实大鼠内异症模型复制成功。
143 治疗方法
于治疗前，每日取阴道细胞涂片后，按治疗组分别灌胃和(或)塞肛，各组治疗时间均为4周。治疗结束后，分别称体重、采血，分离血清，查IgG、IgM、IgA抗体和补体C3、C4、ALT；处死后取出异位移植的组织做病理学检查，各组大鼠的胸腺、卵巢、子宫、肝、肾分别称重，并做病理学检查。
144 统计方法
应用SPSS软件进行处理，计量数据用t检验，计数资料用Ridit分析和χ2检验。
2结果
21 各组大鼠治疗后体液免疫的改变
表1结果显示：大鼠内异症模型手术4周后，血清IgG上升，IgA和C4改变不明显，IgM下降，C3上升；3倍量灌胃加塞肛或5倍量中药治疗后，IgG下降，而丹那唑治疗后IgG改变不明显，IgA、IgM经中西药治疗后各组改变均不明显；C3用5倍量中药塞肛或加灌胃治疗后下降，正常量中药治疗后仍然上升，丹那唑治疗后上升明显；模型组C4水平无明显改变，经5倍量、3倍量中药灌胃或丹那唑治疗后均有所下降。表1 各组大鼠血清IgG、IgM、IgA抗体和补体C3、C4测定结果（略）
22 各组大鼠治疗后胸腺、子宫、卵巢质量和异位移植的子宫内膜生长情况
表2结果显示：大鼠在内异症造模术后，与正常对照组比较，胸腺无明显改变，子宫、卵巢显著增大，部分大鼠卵巢出现囊肿。经3倍量灌胃加塞肛和5倍量中药灌胃或塞肛治疗后，与模型组比较胸腺显著缩小；用丹那唑治疗后胸腺显著增大。模型组经中药5倍量灌胃加塞肛治疗后，子宫缩小，接近正常值；用5倍量灌胃或／加塞肛治疗后，卵巢缩小，接近正常值。表2 各组大鼠胸腺、子宫、卵巢、异位移植的子宫内膜生长情况（略） 转贴于
异位移植子宫内膜生长的评价，按异位移植腔内上皮细胞是否存在、上皮细胞是否连续及上皮层厚薄、与在位的子宫内膜是否相似，分为好(上皮细胞层厚、连续、与在位子宫内膜相似)、差(上皮细胞层薄、不连续)和消失(未见上皮细胞或移植物消失)(见图1)。Ridit分析：各组中好与消失两种情况有差异；各组中差与消失无差异。经χ2检验：各治疗组与模型组比较均有显著性差异，其中中药3倍量灌胃加塞肛、5倍量灌胃／加塞肛与模型组比较差异有非常显著性意义；丹那唑组与中药各组间比较无显著性差异。
23 各组大鼠治疗后性周期的比较
表3结果显示，大鼠内异症模型中药治疗后性周期虽有缩短，但均在正常范围内波动；而丹那唑治疗后性周期明显延长。
24 毒副作用
治疗后各组血清谷丙转氨酶均无明显改变。在光学显微镜下，丹那唑组中有7例出现肝细胞肿胀，细胞间隙变窄；中药5倍量灌胃＋塞肛组有2例出现肝细胞间隙变宽，白细胞增多；中药其他剂量组未见明显改变。各组大鼠治疗后肾组织细胞未见明显改变。
表3 各组大鼠性周期的比较（略）
3 讨论
子宫内膜异位症的病因中，经血返流致病学说被广泛接受。目前认为，随经血反流的内膜之所以能在腹腔种植，可能与患者的免疫机制存在某些缺陷有关［2］。
本实验中大鼠内异症模型手术后，血清IgG水平上升的情况与Subbi Mathur等人所报道的内异症患者血清IgG反应明显，IgA反应不明显的情况相符［3］，但内异症模型大鼠IgM下降，可能与本实验观察时间较短，不能全面反映其病理变化有关。
有研究表明：用原位杂交的方法检测补体C3的RNA和用免疫组化与West Blot的方法检测补体C3的蛋白质，结果发现在异位组织中补体C3的表达显著升高［2］。在本实验中，大鼠内异症模型手术后血中补体C3水平升高，亦表明内异症模型有免疫机制的改变。
中医根据子宫内膜异位症的临床症状，可以把它列入“血瘀证”范畴。近年来研究表明，经用活血化瘀方法治疗后，能改善盆腔微循环，抑制异位内膜增生、分泌和出血，促进血肿吸收，软化粘连，修复瘢痕而改善症状［4］。另有研究认为：生殖内分泌系统失调与免疫功能异常是肾虚的表现，补肾能增强机体免疫力及调节内分泌功能，符合中医肾主生殖的理论，并认为内异症肾虚为本，血瘀为标，属本虚标实之证。用补肾药内服，在临床观察中发现，基本上不干扰患者的月经周期；相反有调整作用，使其月经周期恢复正常［5］。长期内服活血化瘀药，有伐胃伤正之虞，中药栓剂塞肛可使有效成分通过肠壁吸收而直达病所，避免口服药物经过肝脏的首过效应，提高盆腔局部的药物浓度，发挥其活血化瘀散结之功，并可避免伐胃之过。栓剂对肠道刺激较少，病人容易接受；动物实验时，能够在大鼠肠道内保留2*!h以上，使药物充分吸收而发挥作用。
内服的补肾调经方中熟地黄、菟丝子填肾精、益肾气，为君药；桑寄生、淮山药补肝脾，旨在补后天以养先天，为臣药；鸡血藤、川楝子活血养血，理气行滞，为佐药；淮牛膝补肾活血，引药入经，为使药。经临床观察，本方内服对肾虚型内异症有较好的调经和止痛效果［5］。活血散结栓是根据《血证论》“瘀血在下焦，则季肋少腹胀满刺痛，大便黑色，失笑散加醋军桃仁治之。”用失笑散加大黄活血止痛行滞，加丹参、赤芍活血化瘀，三棱、莪术散结消，诸药共起活血化瘀、散结止痛作用。
本实验结果表明：①大鼠内异症模型手术后，异位种植的子宫内膜上皮生长良好，周围有新生血管，同时出现腔内积液、肠管粘连的现象；血清IgG和补体C3升高，表明内异症模型有体液免疫机制的改变。以上情况与人的子宫内膜异位症相似，证明该动物模型是成功的；②与模型组比较，各给药组治疗后均可使异位移植的内膜萎缩，尤其中药3倍和5倍量灌胃加塞肛治疗后，异位种植的内膜萎缩显著。在治疗中，丹那唑对模型动物的性周期有抑制作用，而中药治疗后模型动物的性周期虽然短于模型组和正常对照组，但均在正常范围内［6］；③中药对模型动物体液免疫有调节作用，可降低因内异症引起的血清IgG、C3的上升，5倍量的中药疗效比3倍量的作用显著。④在大鼠内异症模型用中、西药治疗后，对肾组织细胞无明显的影响；各给药组的血清谷丙转氨酶均无显著改变；丹那唑可引起模型动物的肝细胞肿胀，5倍量中药内服加塞肛治疗后个别动物的肝细胞间隙变宽，白细胞增多；大剂量中药组可使胸腺缩小。⑤5倍量中药对模型动物的子宫和卵巢质量有减轻作用。提示在增大中药剂量以提高疗效的同时，应注意药物的毒副反应。大剂量中药降低C4水平的原因和补肾活血中药对细胞免疫及性激素水平等的影响有待进一步研究。
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补肾中药范文4
关键词：清热活血补肾类中药控释药条；局部应用；牙周炎
本文旨在探讨分析清热活血补肾类中药控释药条局部应用治疗牙周炎的效果，以期为临床治疗牙周炎提供参考，具体报告如下。
1资料与方法
1.1一般资料 选取我院2013年1月～12月收治的80例牙周炎患者，随机分为观察组和对照组，每组患者各40例。观察组中男性患者21例，女性患者19例。年龄19～52岁，平均年龄（35.0±7.5）岁。对照组中男性患者22例，女性患者18例。年龄20～53岁，平均年龄（36.0±7.4）岁。两组患者一般资料无显著差异，P>0.05，具有可比性。
1.2方法
1.2.1观察组 局部应用清热活血补肾类中药控释药条治疗，中药控释药条制备，取黄芩100 g，丹参50 g，淫羊藿50 g，在匀、粉碎、过筛后，置于水中煎煮2次，在过滤后将滤液浓缩至200 mL。取聚已烯醇胶液（3%～6%）和医用级海藻酸钠（分子量5万）混匀，放入硫酸钙使之固化成型，并置于浓缩液中浸泡，于饱和后取出晾干、消毒，然后将其剪成小条（1 mm×2 mm×10 mm）装袋密封，于4℃环境下贮存备用。在接受治疗前1 w进行龈上洁治，在接受治疗时进行龈下刮治和根面平整，将中药控释药条放置牙周袋内进行治疗。1次/w，1疗程为2次。
1.2.2对照组 应用碘甘油治疗，在接受治疗前1 w进行龈上洁治，在接受治疗时进行龈下刮治和根面平整，将碘甘油放置牙周袋内进行治疗。1次/w，1疗程为2次。
治疗前、后观察比较两组的PD、BOP、AL牙周指标情况，龈沟液IL-1B水平、细菌种类和相对比例。
1.3疗效评价标准 显效，即疼痛消失，牙龈颜色、形态恢复正常，牙周袋消失或者牙周脓肿消退，根面的菌斑内螺旋体比例和龈沟液IL-1B水平恢复正常；有效，即疼痛缓解，牙龈颜色、形态基本恢复正常，牙周袋变浅或者牙周脓肿消退，牙齿的松动度减轻，根面的菌斑内螺旋体比例和龈沟液IL-1B水平下降；无效，即未达到上述标准。
1.4统计学方法 数据结果采用SPSS 17.0统计学软件进行分析处理，计数资料用（x±s）表示，采用t检验，以P
2结果
2.1两组治疗前后牙周指标、IL-1B水平、细菌种类和相对比例情况比较，见表1。
由表1可见，两组治疗后牙周指标、IL-1B水平、细菌种类和相对比例情况比较，P
2.2两组疗效比较，见表2。
由表2可见，两组治疗总有效率比较，P
3讨论
牙周炎是因局部因素所致的牙周支持组织出现的慢性炎症，属于中医牙宣、齿衄范畴。应用中医药治疗牙周疾病，使用中草药经科学合理的组方、配伍，可发挥灭菌、消炎、促进再生的作用[1]。清热活血补肾类中药控释药条主要由黄芩、丹参、淫羊藿组成，黄芩为清热类中药，具有清热燥湿和泻火解毒及止血的功效，其提取物黄芩苷能够有效抑制牙周致病菌。丹参为活血类中药，其主要成分是丹参酮，其具有的活血化瘀功效可使组织修复、再生得到促进，增加局部血液供应。淫羊藿为补肾类中药，具有补肾镇痛和活血壮筋的功效，其提取物淫羊藿苷有抑制骨吸收、诱导破骨细胞凋亡的作用，可促进外培养成骨细胞的增殖、分化。并以医用级海藻酸钠源为载体材料，安全无毒，组织相溶性好，短期内可降解，并加入一定剂量的固化剂使药条的机械强度增强[2]。本研究显示，局部应用清热活血补肾类中药控释药条治疗的观察组，在临床治疗总有效率方面明显优于应用碘甘油治疗的对照组。
综上所述，清热活血补肾类中药控释药条局部应用治疗牙周炎的疗效显著，值得推广应用。
参考文献：
补肾中药范文5
[关键词] 补肾中药；骨髓基质干细胞；碱性磷酸酶；矿化结节
[中图分类号] R274 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2013）08-0001-03
骨质疏松症是中老年人最常见的慢性病之一，其特征主要表现为骨的微观结构退化、骨量减少。中医学认为骨质疏松症发生的重要原因是肾气虚衰，补肾中药方剂是治疗骨质疏松症较为有效的药方。目前在补肾中药促进成骨的基础研究方面取得了一些成果[1]，但是目前有关补肾中药复方的研究仍在探索阶段。本实验自拟对成骨有作用的补肾中药进行组合， 对体外培养的大鼠骨髓基质干细胞进行诱导，从细胞水平检测补肾复方对骨髓基质干细胞的影响，观察成骨情况。
1 材料与方法
1.1 动物
选用出生6周龄雄性SD大鼠，体重不限，购于温州医学院实验动物中心，合格证书：SCXK（浙）2006-0026。
1.2 中药药材
药材（淫羊霍、杜仲、骨碎补、补骨脂、党参、熟地、川牛膝、云苓、白术、煅龙骨、炒山药、生蛎、丹皮）购自浙江温州地区医药公司。
1.3 仪器与试剂
Thermo二氧化碳培养箱；Nikon 倒置生物显微镜；扫描电镜，上海泰思肯贸易有限公司；RPMI-1640培养基、胰蛋白酶、MTT试剂、地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠、四环素盐酸盐， 均为Sigma 公司产品；胎牛血清，上海劲马生物科技有限公司；碱性磷酸酶试剂盒，南京建成生物工程研究所。
1.4 方法
1.4.1 补肾中药水提取液的制备 取淫羊霍、杜仲、骨碎补、补骨脂、党参、熟地、川牛膝、云苓、白术、煅龙骨、炒山药、生蛎、丹皮，按比例称重混合后，加蒸馏水浸泡并煮沸3次，每次3 h，合并滤液并浓缩，用75%乙醇沉淀后静置于冰箱过夜，次日过滤回收乙醇，用0.5%NaOH调pH至7.0，制成含生药1 g/mL的药液，冷藏备用。
1.4.2 大鼠骨髓基质干细胞的分离与培养鉴定[2] 取出生6周左右的雄性SD大鼠，体重不限（由温州医学院实验动物中心提供）。颈椎脱位法处死，无菌条件下取股骨，剪断两骨端，无血清培养液吹打髓腔并冲出骨髓。将组织均匀平铺加10%DMEM培养基接种于10 cm培养皿内，放置于5%CO2、37℃培养箱培养。3 d换液1次，待细胞长满瓶底时后传代，利用第3代细胞进行实验。倒置显微镜下观察细胞形态并用钙钴法进行碱性磷酸酶染色。
1.4.3 细胞增殖功能测定 采用MTT法[3]测定补肾中药方剂对大鼠成骨细胞增殖的影响。细胞消化传代后，调整细胞浓度加入96孔细胞培养板中，每孔加入培养液，放入5% CO2 37℃培养箱内培养。24 h后显微镜下观察细胞生长合适后，分别换入含1 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、100 mg/L、200 mg/L补肾中药的DMEM培养基，共6组，每组12孔；对照为空白组，为单用20ng/mL的地塞米松。含不同浓度补肾方剂培养1、3、7、10 d。采用MTT法于490 nm波长，在酶标仪上测试各孔光吸收值。本检测方法重复3次，分别计算对照组与实验组的增殖率。
1.4.4 细胞功能的表达 大鼠骨髓基质干以每孔1×105个/孔的密度被接种于6孔培养板，加入培养液，3 d后分别换入含0 mg/L、1 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、100 mg/L、200 mg/L补肾中药的DMEM培养基，定期更换培养液及干预药物，不进行传代直至检测。
①细胞分化功能测定（ALP活性测定） 分别取各组（药液浓度分别为0 mg/L、1 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、100 mg/L、200 mg/L，共7组）培养至第7天的成骨细胞，倒除原培养液，经胰蛋白酶消化后吸出消化液，加入0.9%NaCl吹打后低温冻溶至破碎，离心后上清液行酶免法测定碱性磷酸酶含量。②细胞矿化功能测定 同上述方法培养至第14天，利用von Kossa染色法显示矿化结节。培养14 d后采用多聚甲醛进行固定。以直径>200 μm边界清晰的结节，为矿化结节的计数标准[1]。
1.5 统计学方法
采用SPSS16.0软件处理，数据以（x±s）表示，多组间采用方差分析，然后行两两t检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 成骨细胞的鉴定
倒置相差显微镜下观察细胞形态，培养1 d后大部分的细胞为圆形，大小不等漂浮于培养液；培养2 d后部分细胞贴壁，形态主要为梭形、多角形或纺锤形等几种形状（图1）。培养后7 d贴壁细胞增多可见伪足，瓶底长满梭形或多角形细胞（图2）；10 d可见贴壁细胞形多呈梭形（图3）。von Kossa染色矿化结节（图4）。
2.2 补肾中药方剂对大鼠MSCs增殖的影响
如表1所示，在1 d时100 mg/组高于空白组（t = 6.21，P < 0.001），且200 mg/组也高于空白组（t = 10.27，P < 0.001），差异有统计学意义（P < 0.05）；在3 d时浓度为20 mg/L（t = 6.89，P < 0.001）、40 mg/L（t = 6.63，P < 0.001）、100 mg/L（t = 14.49，P < 0.001）、200 mg/L（t = 22.21，P < 0.001）的OD值均高于空白组，差异有统计学意义（P < 0.05）；在7 d时浓度为20 mg/L（t = 15.39，P < 0.001）、40 mg/L（t = 24.36，P < 0.001）、100 mg/L（t = 32.84，P < 0.001）、200 mg/L（t = 29.80，P < 0.001） 的OD值均高于空白组，差异有统计学意义（P
2.3 对矿化结节数的影响
如表2所示，选取第14天，浓度20 mg/L组、40 mg/L组、100 mg/组、200 mg/组的矿化结节数与空白组比较，差异均具有统计学意义（P
3 讨论
骨髓间充质干细胞是存在于骨髓中的间充质干细胞，它具有多向分化潜能，能够自我更新，可在体外培养。骨髓间充质干细胞在一定的诱导条件下可以向软骨细胞、成骨细胞、脂肪细胞、神经细胞、心肌细胞等多个方向分化[4]。成骨细胞是体内骨形成的主要细胞也是骨代谢的重要功能细胞，对维持骨的代谢平衡非常重要[5]。成骨细胞功能障碍或数量减少，都会导致骨组织代谢异常、骨质疏松等多种疾病的发生。骨质疏松症在中医学上被认为是肾气虚衰所致，因此近年来越来越多的研究利用补肾中药来治疗骨质疏松症。
本研究发现，不同浓度组的补肾中药均可促进骨髓间充质干细胞的增殖， 增强碱性磷酸酶的活性。碱性磷酸酶是骨髓间充质干细胞成骨分化的主要特征性酶，也是最早出现的指标，其由成骨细胞产生并可反映分化程度的高低。目前比较普遍的观点认为，碱性磷酸酶在体外的钙化中起着关键的作用[6]，碱性磷酸酶活性的高表达标志着成骨细胞的分化成熟[7]。相较于碱性磷酸酶，矿化结节为骨形成的标志，它的形成代表了细胞进一步成骨分化成熟[8]。本实验结果显示，不同浓度的补肾中药在不同程度上能刺激骨髓间充质干细胞的增殖分化成骨。
传统医学认为“肾主藏精”，肾精可以生骨养髓的。本方剂所涵盖的多味补肾中药中部分作为单味中药在体外有促进向骨髓基质干细胞成骨分化的作用。殷晓雪等[9]的研究发现淫羊藿可以上调BMP-2基因的表达，促进成骨细胞的增殖和分化。徐展望等[10]的研究发现补骨脂能促进大鼠成骨细胞的增殖。张立等[11]的研究发现杜仲也能通过刺激成骨细胞的增殖分化促进骨的重建。此外，Wang等[12]的研究指出骨碎补能促进人成骨细胞增殖作用。本实验中的补肾中药是在上述单味补肾药物的基础上经过组合构成，它能够促进大鼠体外骨髓间充质干细胞增殖及其向成骨细胞分化。
通过本实验可以发现，补肾中药对骨髓基质干细胞增值的影响。在低浓度不但没有毒害作用，而且随着浓度的增加，细胞增值作用递增。中药具有诱导分化的作用，和空白组相比（空白组也加入了诱导成骨液），中药有诱导基质干细胞向成骨细胞分化的作用。中期的ALP和细胞分化成熟晚期的矿化结节表明，药物对细胞的分化成熟作用明显，特别是对成骨晚期的骨矿化，补肾中药显示出极佳的促成骨作用。
[参考文献]
[1] 金慰芳，朱文菁，王洪复，等. 补肾中药HUECS对培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响[J]. 中国骨质疏松杂志，2001，7（8）：9-10.
[2] 补肾方剂对大鼠骨髓基质干细胞增殖与分化的影响[J]. 中国药物与临床，2007，7（5）：329-331.
[3] 张荣华，舒晓春. 中药复方补肾活血液对成骨细胞影响的实验研究[J]. 中国病理生理杂志，2003，19（6）：769-772.
[4] Mahmood A，Lu D，Wang L，et al. Intracerebral transplantation of marrow stromal cells cultured with neurotrophic factors promotes functional recovery inrats subjected to traumatic brain injury[J].Neurotrauma，2002，9（12）：1609-1617.
[5] Iwamoto J，Sato Y，Takeda T，et al. Bone quality and vitamin K2 in type 2 diabetes：Review of preclinical and clinical studies[J]. Nutrition Reviews，2011，69（3）：162-1676.
[6] Hwang R，Lee EJ，Kim MH，et al. Calcyclin，a Ca2+ ion-binding protein，contributes to the anabolic effects of simvastatin on bone[J]. J Bio Chem，2004，279（20）：21239-21247.
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[9] 殷晓雪，陈仲强，党耕町，等. 淫羊藿苷对人成骨细胞增殖与分化的影响[J]. 中国中药杂志，2005，30（4）：289-291.
[10] 徐展望，张建新，谭国庆，等. 中药骨碎补提取液对兔骨髓基质细胞体外成骨分化的影响[J]. 中医正骨，2006，18（6）：15-17.
[11] 张立，葛焕琦，白立纬，等. 杜仲叶醇防治糖尿病合并去势大鼠骨质疏松症的实验研究[J]. 中国老年学杂志，2003，23（6）：370-372.
补肾中药范文6
关键词：血瘀证大鼠；补肾活血中药；血管内皮细胞功能
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673－7717(2007)09－1920－03
随着社会发展，人口老龄化趋势加快，防治老年病已成为医学界的重要研究领域。本实验是对实验性血瘀证大鼠内皮细胞功能进行研究，验证补肾活血中药对老年病的防治作用，为临床防治老年性疾病提供有价值的治疗方法。
1 材料与方法
1．1 实验动物
采用Wistar大鼠，雄性，12个月龄，48只，体重250－300g，由山东省医学科学院实验动物研究所提供，一级动物。动物观察室为清洁级。
1．2 实验试剂
胆固醇、甘油三酯、载脂蛋白试剂盒，上海长征一康仁医学科学有限公司提供；高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇试剂盒，北京中生生物工程高技术公司提供；内皮素、6－酮－前列腺素F1α。补血栓素B2放免药盒、NO试剂盒，总医院科技开发中心放免所提供；t－PA试剂盒，上海医科大学分子遗传学研究室提供。
1．3 中药制剂
补肾活血液主要药物为：熟地、枸杞、仙灵脾、菟丝子、当归、丹参、桃仁、郁金、毛冬青。将药物放入多功能提取罐中，用65％乙醇热回流提取2次，第1次加8倍量65％乙醇，提取3h，放出药液；第2次加6倍量65％乙醇，提取2h，放净药液。两次药液一并滤出，70－75℃回收乙醇，回收后再减压浓缩(700C，0.06mPa)至0.8g／mL，真空包装备用。
1．4 动物高脂餐的制备
取猪油300g，加热融化，徐徐加入250g胆固醇，不断搅拌，待溶解后，慢慢加入50g胆盐和20g丙硫氧嘧啶(用前研术)，充分搅匀，再加入190mL吐温80和190mL丙二醇，不断搅拌至完全溶解，冷却，如不足1000mL，加蒸馏水补足。冰箱保存，用时加热化开。
1．5 实验分组及给药方法
将实验Wistar大鼠在实验环境下给予基础饲料常规饲养1周。随机分4组，各组比例为1:1，均为10只，各组均加20％脱落率，共48只。A－空白对照组(基础饲料+5mL／kg蒸馏水灌胃)，其余大鼠高脂餐饲养2周后再随机分3组，B－模型对照组(高脂饲料+5mL／kg蒸馏水灌胃)，C－中药大剂量组(高脂饲料+实验药物40mL／kg灌胃)、D－中药小剂量组(高脂饲料+实验药物20mIMkg灌胃)，给药加天后，各组动物均在腹腔麻醉后下腔静脉取血，备实验室化验测定各观察指标，然后处死，取各组实验动物的主动脉血管进行组织病理学检测。
1．6 标本检测
1．6．1 一般状态 每日观察动物外观变化，包括皮毛色泽、疏密、粪便形态、精神状态、实验前后体重变化变化等。
1．6．2 实验室 检查测定血液流变学、血小板聚集性和黏附性；测定血脂、血浆内皮功能(TXB2，6－keto－PGF1α，NO，ET－1)和PAI－1、t－PA等各项指标。
1．6．3 病理形态学观察 取主动脉血管壁组织进行检测，观察普通光镜血管内膜及电镜下内皮细胞的变化。
1．7 统计学处理
用Excel软件进行t检验，以x±s表示结果。
2 结 果
2．1 一般状况
实验结束时，治疗组与对照组比较无显著性差异，模型组精神萎靡、懒动、毛发稀松、大便溏稀、舌质紫黯。
2．2 指标测定
对实验大鼠血液流变学、血小板聚集性和黏附性、血脂、血浆内皮功能(TXB2，6－keto－PGFIα，NO，ET－1)和PAI－1、t－PA等各项指标的测定。
2．3 组织形态学检测
2．3．1 光镜下检测 取正常组、模型组、大剂量组和小剂量组大鼠各8只，在完成其他实验后处死，将主动脉取出10mm，放入中尔马林液中24h，做石蜡包埋，以主动脉血管横切面做常规切片，苏木素－伊红染色。在光镜下观察动脉血管内皮细胞损伤程度、血管壁增厚情况、泡沫细胞沉积及内弹力膜中断情况，将其分为轻(+)、中(++)、重(+++)3级。
2．3．2 透射电镜下检测 实验动物模型组细胞核凹陷不平，常染色质边聚，成团块状，核固缩，细胞器减少，胞浆溶解，线粒体呈空泡样、肿胀，嵴减少。内质网肿胀，细胞膜破裂，有调亡小体形成。补肾活血组内皮细胞排列较整齐、紧密，细胞完整，无肿胀，未见有调亡小体形成。
3 讨 论
随着社会老龄化，一些常见的老年病如高脂血症、心脑血管疾病、糖尿病、慢性肾功能不全等逐渐发生，严重危害着老年人的身体健康。根据中医辨证除了它特征性的原发病症以外，几乎都共同存在不同程度的肾虚血瘀证候。现代医学分析提示不同的疾病，在神经内分泌、免疫、合成代谢、氧自由基代谢方面发生紊乱，导致血液流变学异常，微循环障碍，血液浓、黏、凝、聚，血流缓慢，流态异常等病理改变。因此笔者认为老年人诸病源于肾虚，血瘀也可责之于肾虚，故治疗上采取补肾活血法治之。通过临床观察，以补肾活血法治疗多种老年病有确切疗效，故而提出从肾虚血麝论治老年病的观点。本实验通过复制大龄血瘀证大鼠模型，从血脂、血流变、内皮功能、凝血纤溶系统的影响各方面进行实验观察，以便从中年起即进行预防性治疗，防治老年病的发生发展，起到延缓衰老的作用。
所选处方为临床常用补肾活血中药，方中有熟地、枸杞、淫羊藿、菟丝子、当归、丹参、桃仁、郁金、毛冬青等。熟地与枸杞补血滋阴，益精填髓。现代药理研究证明其补血作用可以增强机体免疫功能，并有抑制血小板凝集，激活纤维蛋白溶酶原，对纤溶系统有活化作用，从而抑制血栓形成。并有抗肿瘤及延缓衰老的作用。淫羊藿与菟丝子有补肾壮阳、强筋健骨之功效。现代药理研究其具有扩张血管作用，促进骨生长，提高机体免疫活性，抗氧化作用；还有抑菌抗病毒、强心、降压等作用。当归、丹参、桃仁、郁金、毛冬青诸药，主要功效为补血活血、化瘀解毒等，药理研究表明均具有抗血小板聚集作用，抗血栓作用，改善微循环，抗氧化损伤作用和多途径发挥心肌保护作用。还具有调整、改善血脂代谢作用，通过保护或提高抗氧化酶的活力，减少脂类过氧化物的产生，发挥抗自由基损伤的作用。通过这些作用可以有效保护血管内皮细胞的损害，防止血管硬化闭塞和血栓形成。诸药配伍阴阳相济，则肾中精气充足，气血运行通畅，此方功效是补肾活血，标本兼顾。
