肌球蛋白范例6篇

肌球蛋白范文1

【摘要】

目的： 探讨3羟基3甲基戊二酰辅酶A（HMGCoA）还原酶抑制剂辛伐他汀对心肌梗死后心肌细胞内α肌球蛋白重链（αMHC）， β肌球蛋白重链（βMHC）及骨骼肌α肌动蛋白（Sk αactin）表达的影响. 方法： 结扎Wistar大鼠冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型，24 h后存活大鼠随机分为心肌梗死组（MI组）、辛伐他汀（Sim）20 mg组和40 mg组，另设假手术组（SH组）. Sim 组分别予20 mg/kg·d和40 mg/kg·d灌胃，MI组和Sham组以等量等浓度溶剂灌胃. 8 wk后检测各组血流动力学指标，RTPCR检测大鼠非梗死区心肌αMHC和βMHC mRNA表达，免疫组化法测定Sk αactin表达. 结果： MI组左室舒张末压高于SH组，左室收缩压低于SH组；两个Sim组左室舒张末压低于MI组，左室收缩压高于MI组. MI组αMHC mRNA表达低于SH组，βMHC mRNA表达高于SH组（均P

【关键词】 心肌梗塞；肌球蛋白类；肌动蛋白类；斯伐他汀

【Abstract】 AIM: To assess the effects of Hydroxymethylglutaryl coenzyme A reductase inhibitor simvastatin (Sim) on cardiac function， cardiomyosin heavy chain（MHC） and actin expression in rats with myocardial infarction. METHODS: The myocardial infarction (MI) models were induced by ligation of anterior descending coronary artery in Wistar rats. Twentyfour hours later， the survivals were randomly pided into 3 groups: MI group， 20 mg Sim group and 40 mg Sim group， the rats with sham ligation formed into sham group. The rats in the two Sim groups received intragastric administration of Sim 20 and 40 mg/kg·d. Respectively for 8 weeks. The rats in MI group and sham group were treated with the same quantity of solvent as placebo. After 8 weeks， the hemodynamic parameters were examined. The α and β MHC mRNA expressions in noninfarcted zone were detected by RTPCR. The skelecton αactin (Sk αactin) expression was detected by immunohistochemistry. RESULTS: Compared with sham group， in MI group， left ventricular enddiastolic pressure (LVEDP) was increased and left ventricular systolic pressure (LVSP) was depressed significantly. Compared with MI group， LVEDP was depressed and LVSP was increased in the two Sim groups. The αMHC mRNA expression was lower and the β MHC mRNA expression was higher in MI group than in Sham group. Compared with MI group， the α MHC mRNA expression was enhanced and the β MHC mRNA expression was lessened in both Sim groups. The expression of Sk αactin was weak in sham group and strong in MI group， and the expression decreased in both Sim groups. CONCLUSION: Simvastatin attenuates the mRNA expression of αMHC and enhances βMHC mRNA expression. It also decreases the Sk αactin expression in rats after MI. It may play some roles in the restraint of cardiac hypertrophy and the improvement of myocardial remodeling.

【Keywords】 myocardial infarction; myosins; actins; simvastatin

0 引言

心肌肥大是心肌梗死（myocardial infarction， MI）后心室重塑的主要表现，始于MI后早期，贯穿于心室重塑全程，使心脏逐渐发展为心力衰竭. 有研究表明，“胚胎基因”（fetal genes）的重启和心肌细胞蛋白表型改变在心肌细胞肥大过程中发挥重要的作用［1］. 离体实验表明，他汀类药物（statins）能阻断AngII， NA， ET1等刺激因子诱导的成体或胎心细胞肥大［2］. Statins能否在体内抑制心肌肥大、延缓心力衰竭发生，报道较少，其机制更不清楚. 我们的前期实验已提示辛伐他汀（Sim）具有改善MI后心功能作用［3］，本研究旨在观察Sim对MI后心肌细胞内α， β肌球蛋白(α， βMHC)及骨骼肌α肌动蛋白(Sk αactin)表达的影响，探讨他汀类逆转心室重塑的机制.

1　材料和方法

1.1　材料

Wistar雄性大鼠，体质量185~225 g，第三军医大学附属大坪医院实验动物中心提供；RTPCR引物由北京华大中生科技发展有限公司合成；AMV逆转录酶（日本TaKaRa）；Taq plus DNA聚合酶（日本TaKaRa）；Tru9I 限制性内切酶（美国Promega）；兔抗大鼠骨骼肌 αActin mAb（美国Santa Cruz）；生物素标记羊抗兔IgG和免疫组化ABC试剂盒（武汉博士德公司）；辛伐他汀（批号N1001， 杭州默沙东制药有限公司），戊巴比妥钠（美国Sigma）、琼脂糖（美国Promega）、多聚甲醛、羧甲基纤维素钠及其他常用试剂购自北京北方同正生物试剂有限公司.

1.2　方法

1.2.1　动物模型建立与分组

按Pfeffer等［4］方法结扎冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型，在相同部位只穿线不结扎，为假手术组(n=8). 术后24 h存活大鼠随机分为3组：心肌梗死组（MI组，n=10）；辛伐他汀20 mg组（20 mg Sim组，20 mg/kg·d，n=10）；辛伐他汀40 mg组（40 mg Sim组，40 mg/kg·d，n=10）. Sim组均于术后第3日起灌胃给药，连续8 wk；MI组和Sham组每日以等量等浓度溶剂20 mL/L羧甲基纤维素钠灌胃，连续8 wk.

1.2.2　血流动力学测定

25 g/L戊巴比妥钠35 mg/kg腹腔注射行全身麻醉，分离右颈总动脉和左股动脉，经右颈总动脉插入聚苯乙烯PE20导管至左心室，导管另一端经能量转换器连接MPA2000多导生理记录仪，测定左室收缩压（LVSP）、左室舒张末压（LVEDP）、左室压力变化最大上升和下降速率（±dp/dtmax），同时经股动脉插管同步记录动脉收缩压（BPs）和动脉舒张压（BPd）.

1.2.3　心脏形态学检测和标本

留置经股静脉注入100 mL/L氯化钾 2 mL处死大鼠，分离左、右心室，分别称取左、右心室质量（LVW， RVW），计算左、右心室质量与体质量（BW）之比，即为左、右心室质量指数（LVWI， RVWI， mg/g）. 称质量后于左室冠状面梗死区中部切取厚约3 mm左室截面，40 g/L多聚甲醛固定，石蜡包埋切片，切片厚度3~4 μm，HE染色后观察心肌组织结构. 按Taylor等［5］的方法用Image Pro Plus 4.0图像分析系统计算心肌梗死面积. 梗死面积(%) ﹦瘢痕组织弧长/［(左室截面外周长+左室截面内周长) /2］×100%. 剩余心肌按梗死区和非梗死区分开，留取非梗死区心肌50~100 mg，液氮冷冻48 h后存于-70℃冰箱.

1.2.4　RTPCR检测αMHC和βMHC mRNA表达

① 引物： 北京华大中生科技发展有限公司合成. α MHC和βMHC cDNA具有高达96 %的同源性，采用同一引物扩增，扩增长度310 bp. 上游引物序列为：5′GCA GAC CAT CAA GGA CCT′3′；下游引物序列为：5′GTT GGC CTG TTC CTC CGC C3′. βactin引物上游序列为：5′TTG TAA CCA ACT GGG ACG ATA TGG3′；下游引物序列为：5′ GAT CTT GAT CTT CAT GGT GCT AGG3′，扩增长度764 bp. ② 反应体系和反应步骤：苯酚/氯仿法提取心肌组织总RNA，AMV逆转录酶( TaKaRa )逆转录cDNA， PCR反应由Taq plus DNA 聚合酶（TaKaRa）催化. PCR反应体系包含cDNA 2 μmol/L和dNTP 2 μmol/L， 10×Buffer 3 μmol/L， Taq酶(TaKaRa) 0.2 μmol/L， Mgcl2 2 μmol/L，上/下游引物各0.3 μmol/L (5 pmol/L)，加去离子水22.2 μmol/L至总量30.0 μmol/L. 94℃解链2 min， 94℃变性30 s， 59℃退火30 s， 72℃延伸30 s， 38个循环；末次循环后72℃ 延伸5 min，内参βactin反应体系及条件与所测指标相同. ③ 结果分析：反应结束后，参照Barbato等［6］方法，将PCR扩增产物稀释到60 μmol/L，加50单位Tru9I 限制性内切酶37℃消化120 min，得到 αMHC（310 bp）和 βMHC（257 bp + 53 bp）的混合产物，混合产物与βactin同时在40 g/L琼脂糖凝胶中电泳，用Quantity One 4.40 图像分析系统进行图像扫描和分析，分别计算αMHC/βactin， βMHC/βactin A值，代表其相对表达量.

1.2.5　SABC免疫组化法检测

Sk αactin表达石腊切片（3 μm）常规脱蜡、水化，30 mL/L H2O2阻断内源性过氧化酶，滴加复合消化液室温10 min，滴加兔抗大鼠Sk αactin mAb，37℃孵育120 min；生物素标记羊抗兔IgG， 37℃ 20 min，DAB显色2 min，蒸馏水冲洗终止显色；苏木素复染核1 min，酸乙醇浸泡2 s，常规脱水、透明、封片. 图像用Image Pro Plus 4.0软件分析.

统计学处理：实验数据均以x±s表示，应用SPSS10.0 软件包进行统计学处理，组间比较采用单因素方差分析，多重比较采用q检验，以P

2　结果

实验完毕，获得大鼠38只，剔除MI面积55 %大鼠5只，获完整资料大鼠33只：Sham组，MI组，40 mg Sim组各8只，20 mg Sim组9只. 3个心肌梗死组间梗死面积无统计学差异（P>0.05），平均梗死面积为45.3 %（表1）.

2.1　辛伐他汀对MI后心脏形态学和血流动力学的影响

MI 组LVWI， RVWI高于Sham组（P

2.2　辛伐他汀对αMHC和βMHC mRNA表达的影响MI组βMHC mRNA表达高于Sham组，αMHC mRNA表达低于Sham组（均P

2.3　辛伐他汀对Sk αactin表达的影响Sham组胞质内Sk αactin表达呈阳性的心肌细胞少见；MI组梗死区周边区和非梗死区胞质内Sk αactin表达呈阳性的心肌细胞多于Sham组（P

2.4　相关性分析Sim组βMHC mRNA的表达与LVWI， RVWI均呈正相关，r分别为0.68， 0.74（均P﹤0.01）；与血流动力学指标LVSP呈负相关（r＝-0.65， P

近来发现他汀类药物对心肌细胞肥大存在有益影响，故利用心肌梗死模型进行观察. 因4S试验中采用Sim 20 mg和40 mg两个剂量观察，并发现他汀降脂作用随剂量增加而加强，为了解其非降脂作用是否与剂量有关，我们也采用20 mg/kg·d和40 mg/kg·d两个剂量观察. 前期研究证实：四组间血清总胆固醇、总甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇水平无统计学差异［3］. 本实验发现20 mg和40 mg Sim两组非降脂作用无显著性差异，他汀的非降脂作用是否与更小剂量范围内的给药相关，尚有待于进一步研究.

MI后8 wk，MI组αMHC mRNA表达低于Sham组，βMHC mRNA表达上调，Sk αactin表达明显增加，表明MI后心肌细胞发生分子重塑. 肌球蛋白重链与肌动蛋白是心肌细胞内的主要收缩蛋白. βMHC与Sk αactin是“胚胎型”收缩蛋白，在胎心中高度表达，出生后逐渐被αMHC与α心肌肌动蛋白取代. MI后神经体液因素及压力负荷变化，均能启动心肌细胞核内即早基因（cfos， cmyc， cjun及Egr1）的转录和翻译，促使αMHC表达下调，βMHC， Sk αactin等表达上调，导致心肌细胞内收缩蛋白含量发生变化，αMHC/βMHC比例也发生改变［7］. 由于MHCs同功型成分与心肌收缩力大小存在因果关系，MHCs成分和比例改变，最终会导致心肌收缩能力减弱，心脏功能受损. “胚胎型”收缩蛋白表达是心肌细胞蛋白质表型发生重塑的主要原因.

Sim干预8 wk，能上调MI后受抑制的 αMHC mRNA表达，并抑制 βMHC mRNA在心肌中的过度表达. 提示Sim能在转录水平抑制MI后病理刺激因素引起的“胚胎基因”βMHC在成体心脏的再度表达，减少心肌中“胚胎型”蛋白 βMHC的合成. 这与Bauersachs等［8］发现Sim能改变MI后 αMHC/βMHC比例相一致. 实验结果同时显示，Sim能减少Sk αactin表达. 提示Sim能抑制MI后心肌细胞Sk αactin的合成，逆转心肌蛋白质表型变化，改善心脏收缩功能. Sim的作用可能与阻断甲羟戊酸（MVA）通路，减少胆固醇合成通路的中间产物MVA、双香叶酯基焦磷酸盐（GGPP）、法尼酯焦磷酸（FPP）产生有关［9］， 中间产物减少，可抑制GTPase蛋白（Rac1， Ras， Rho等）的异戊二烯化修饰，影响小GTP蛋白的成熟、定位与激活，导致以细胞外调节激酶（ERK）通路为代表的各种肥大刺激因素诱导的信号转导通路受阻，从而抑制与肥大相关基因的转录和翻译，减少“胚胎型”蛋白合成，减轻细胞分化和增殖，改善心肌肥厚.

实验相关性分析显示，Sim组βMHC mRNA表达与LVWI， RVWI呈明显正相关，与反映左室收缩功能的LVSP呈负相关，与反映左室舒张功能的LVEDP呈正相关. 两种MHC的ATPase活性不同，水解ATP速度不同，αMHC水解ATP能力是βMHC的3~4倍以上［10］，MI后αMHC减少，βMHC增多，使肌小节ATPase活性降低，收缩速率减慢，心功能下降，与本实验相关性分析结果一致. 提示心肌细胞的收缩蛋白表型变化是MI后心脏功能减损的基础，而Sim抑制MI后编码“胚胎型”蛋白基因的表达可能是Sim改善心脏功能的原因之一.

参考文献

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肌球蛋白范文2

关键词：肌球蛋白重链；低氧；低氧运动

中图分类号：G804.2文献标识码：A文章编号：1007-3612(2008)07-0919-03

低氧环境已显示可引起骨骼肌形态学显著的改变，如毛细血管密度增加、平均肌纤维横截面积下降，同时线粒体数目、肌红蛋白明显增多，机体的有氧代谢能力得到改善。

伴随着代谢方式等一系列的改变肌纤维类型也可能会发生相应的调整。如Itoh［1］的研究表明雄性SD鼠置于模拟4 000 m低氧舱10周后，比目鱼肌快缩氧化糖酵解型肌纤维（FOG）增加，慢缩氧化型纤维（SO）减少；Bigard等对Wistar鼠4 000 m高度游泳训练14周的研究［2］显示，高海拔耐力练习引起快肌趾长伸肌（Extensor digitorum longus，EDL）和足底肌（Plantaris，PLA）Ⅱa型纤维增加，同时Ⅱb减少。

由于肌纤维分类方法的差异使得对于低氧及低氧耐力训练影响肌纤维组成的报道结果存在差异。现在常用的肌纤维分类方法有肌原纤维ATP酶（肌球蛋白ATP酶）、肌球蛋白重链(MHC)单克隆抗体免疫组化、肌球蛋白重链(MHC) 聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法。

肌原纤维ATP酶（肌球蛋白ATP酶）的方法一般只能区分出Ⅱa、Ⅱb和Ⅰ三种肌纤维［3］；免疫组化方法由于缺乏特异性的Ⅱx MHC抗体，目前还不能检测到Ⅱa与Ⅱx或Ⅱx与Ⅱb同时存在的纤维类型。肌球蛋白重链(MHC) 聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法可以清晰地看到四种纯合的肌纤维（Ⅱa-MHC、Ⅱb-MHC、Ⅱd/x-MHC和Ⅰ-MHC），依其敏感性好、特异性强、可重复的特点广泛用于分离MHC。

Talmadge［4］总结多人研究结果发现，由MHC确定的肌纤维最大收缩速度顺序为Ⅰ

1材料与方法

1.1实验动物与分组7周龄健康雄性Spraque Dawley(SD)大鼠30只，平均体重(210±20)g，购自河北医科大学实验动物中心，为国家二级卫生动物。饲养温度控制在(22±3)℃，动物自由进水进食，适应性喂养两天后，随机分为三组，每组10只:

常氧对照组（Normoxic Controls,NC）

低氧对照组（Hypoxic Controls,HC）

低氧训练组（Hypoxic Training,HT）

1.2训练方式HC组和HT组动物均生活在模拟海拔4 000 m高度的低氧舱中（氧浓度12.7％），每天至少保证22 h低氧时间。

低氧训练组经5 d跑台适应后，进入正式训练。训练在常氧条件下进行，训练方式为跑台练习：

跑台坡度＋10°，跑速20 m／min，每天1次，每次1 h，每周训练6 d，28 d后取材。

1.3取材腹腔注射戊巴比妥钠麻醉（45 mg/kg），迅速剥离两侧浅层胫前肌，去除结缔组织，锡纸包叠后置于液氮中冻存。

1.4主要测试方法和仪器

1) 骨骼肌肌球蛋白重链(MHC)蛋白组成：

十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳方法（SDS-PAGE）。参照Talmadge(1993)［5］

2） 骨骼肌MHCⅠ、Ⅱa、Ⅱx/d、Ⅱb四个亚型mRNA 基因表达：（RT-PCR方法 ）

低氧设备：HYPOXIC TRAINING SYSTEMS, Hypoxico Inc.(USA)

PCR引物设计：PCR引物由北京奥科生物技术有限责任公司设计、合成。

引物序列如下表：

1.5统计分析

采用SPSS11.5统计软件，利用多因素方差一般线性模型（GLM）LSD方法检验各组间是否有显著性差异，P

2结果

2.1低氧、低氧耐力训练对肌球蛋白重链(MHC)蛋白组成的影响

SDS-PAGE结果如图1所示，依各个亚型不同的电泳迁移速率由上向下依次为Ⅱa、Ⅱx、Ⅱb、Ⅰ。

由图1和表1，慢型MHCⅠ比例不受低氧和低氧训练的影响；低氧、低氧训练均显著降低了Ⅱa比例，其中低氧对照组下降幅度更明显（P

上述结果可以总结为：单纯低氧降低了Ⅱa MHC蛋白表达，取而代之的是Ⅱx和Ⅱb MHC表达升高，即低氧引起“慢型”MHC向“快型”转化；低氧训练的效果与单纯低氧变化趋势一致。

2.2低氧、低氧耐力训练对MHCs mRNA表达的影响

3讨论

3.1低氧、低氧耐力训练对肌球蛋白重链(MHC)蛋白组成的影响肌球蛋白是骨骼肌细胞中表达最多的蛋白，占总蛋白的25％，由两条重链和两对不同的轻链组成。因其具有ATP酶活性，所以又称肌球蛋白Ca2+-ATP酶，肌球蛋白Ca2+-ATP酶活性高低,直接决定肌纤维的收缩力量和速度。

成年骨骼肌有Ⅱa-MHC、Ⅱb-MHC、Ⅱd/x-MHC和Ⅰ-MHC四种类型，由MHC确定的肌纤维最大收缩速度顺序为Ⅰ

目前学者们对低氧的关注很多，但低氧对肌纤维和MHC组成的报道为数并不多，且研究结果也不尽相同。

如Bigard［6］将Wistar鼠置于模拟5 500 m海拔环境中4周，足底肌Ⅰ、Ⅱa型MHC显著下降，Ⅱb MHC增加；比目鱼肌Ⅰ型MHC显著下降，Ⅱa MHC增加。肌纤维转换方向与我们实验一致，一般来说，肌纤维的转换容易发生在快肌纤维间，Ⅰ和Ⅱ型间很难相互转变，Bigard的实验足底肌Ⅰ型MHC向Ⅱ型MHC转换可能由于低氧刺激严重引发的。

多数低氧影响比目鱼肌结果都是Ⅰ型MHC下降，Ⅱa增加，或者SO肌纤维下降同时FOG增加［7］。

尽管上述一些研究显示低氧引起慢型MHC向快型转化，但若形成缺氧不明显MHC和肌纤维组成不会改变。

如Perhonen［8］对于Wistar鼠2 250～2 500 m高度低氧跑台训练观察氧化酶活性增加的同时，体重下降，但肌原纤维ATP酶方法检测的肌纤维组成无明显变化。

低氧影响肌纤维和MHC组成受低氧高度的制约。模拟低氧高度低，造成组织缺氧不足，不能引起肌纤维和MHC改变。

慢性低氧引起肌组织中的氧压水平较低可能是引起肌纤维转化的一个有利因素。低氧一般会使快肌纤维表达增加，这些肌纤维多数在低氧压条件下工作，一方面是由于它们毛细血管供应不足，另一方面它们在高强度练习中易被募集。

慢性持续性低氧与运动引起的低氧不同，前者持续时间久，且造成缺氧程度高，这可能更适于Ⅱb等快肌纤维的表达，Ⅱb肌纤维以糖酵解为主，比氧化型纤维如Ⅰ或Ⅱa更易受局部低氧的影响。

耐力训练是一种增加负荷的训练，有研究报道负荷强度适宜、持续时间足够长的耐力训练会引起快型MHC向慢型转化。如有研究大鼠轮跑4周比目鱼肌Ⅰ型MHC显著增加。SD大鼠75％强度跑台训练10周的实验观察到训练时间大于60 min时比目鱼肌MHCⅠ显著增加，同时MHCⅡa下降［9］。Wistar鼠4周耐力练习（20 m/min,60 min/d,5d／周）［10］结果显示，足底肌MHCⅡb下降的同时MHCⅡa明显增加。

本实验中低氧耐力训练组MHCⅡa下降幅度低于低氧对照组，与此同时MHCⅡb升高幅度同样低于低氧对照组，这可能缘于耐力训练易引起快型MHC向慢型转化。

3.2低氧、低氧耐力训练对MHCs mRNA表达的影响RT-PCR方法测定的各种MHC mRNA是在转录水平观察MHC的变化。转录是蛋白合成的前提，转录水平的变化为蛋白水平的改变提供可能性。

低氧对MHC mRNA的影响表现为MHC－Ⅱa mRNA显著增加，MHC－ⅠmRNA不显著减少。许多关于低氧影响MHC蛋白组成的研究也表明低氧会使慢型MHC向快型转化。低氧影响MHC蛋白的结果显示MHC－Ⅱa向MHC－Ⅱx和MHC－Ⅱb转化，虽然低氧影响MHC蛋白和mRNA表达改变的具体MHC不同，但均显示快型MHC表达的增加。具体MHC不同的原因可能在于mRNA的增加能在刺激的即刻发生，其半衰期约为2～3 d，而相应蛋白的半衰期为2～3周［11］，MHC表型的表达可能是MHCmRNA与蛋白不同时机上调和下调的结果。因而MHC表型表达与MHCmRNA间会出现错配的现象。除此之外，翻译或翻译后机制的调控也妨碍mRNA准确地表达蛋白活性［12-15］。

4结语

低氧及低氧耐力训练作为一种剧烈的缺氧刺激，不仅能增加骨骼肌毛细血管的分布，改善局部血液供应，增加有氧氧化酶活性，还能引起骨骼肌微细结构的改变，本研究显示快型肌球蛋白重链表达增加，基因和蛋白表达均有表现。肌球蛋白是骨骼肌内主要的结构蛋白和收缩蛋白，其组成的改变直接会影响到肌肉的收缩速度、收缩力量及其他代谢特性。此实验必将会对低氧训练的深入研究提供一有益的启示。

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肌球蛋白范文3

[关键词] 环磷酰胺；免疫球蛋白；小儿；病毒性心肌炎

[中图分类号] R725.4 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2012）02（a）-0076-02

An observation on the clinical effect of a combine treament in Cyclophosphamide and immunoglobulin 90 pediatric cases with viral myocarditis

WU Jun

Pediatrics of Cili People's Hospital in Zhangjiajie City in Hunan Province, Cili 427200, China

[Abstract] Objective To explore the clinical effect of the treament which combines Cyclophosphamide and Immunoglobulin to Viral Myocarditis (VM) in child patient. Methods Ninety patients of treament were given combined treament of Cyclophosphamide and immunoglobulin, and compared with 95 patients of the contrast group in which Cyclophosphamide alone was used. Results Among the 93 patients in contrast group, there were 25 patients whose treament found significantly effective, 20 cases effective and 48 cases with no any significance. The significantly effective rate was 26.9% and total effective rate was 48.4%; in the control group, 35 cases of significant effect, 38 cases of effect and 17 cases of no significance. Significantly effective rate was 38.9% and total effective rate was 81.1%. There existed a statistic significance between two groups (P < 0.05). Clinical effect in control group excelled the contrast one. Conclusion The combined treatment of cyclophosphamide and immunoglobulin is a feasible method in tackling VM in child patients.

[Key words] Cyclophosphamide; Immunoglobulin; Child patient; Viral Myocarditis

病毒性心肌炎（viral myocarditis，VM）是儿科心血管常见疾病，且与扩张型心肌病的发生密切相关，近年来其发病率有增高趋势，严重危害患儿的身心健康，给家长和社会带来沉重负担。目前认为VM与病毒触发人体自身免疫反应而引起的心肌损害有关，治疗方面尚缺少特效高效的治疗方法，仍以营养心肌治疗为主。本院本科2005～2010年应用环磷酰胺联合免疫球蛋白治疗90例小儿病毒性心肌炎患者，取得了良好的疗效，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

2005年1月~2010年10月在本院儿科住院部接收病毒性心肌炎患儿185例。年龄最小4岁，最大10岁，多因胸闷、心悸，长叹气，心前区不适等症状前往门诊就诊。发病以秋季及春季为主，但全年均可有发病病例。8~10月发病61例，占总发病人数的32.9%；1~3月发病78例，占总发病人数的42.2%；其余月份发病46例，占总发病人数的24.9%。66例（35.7%）发病前1周有上呼吸道感染，其中12例（18.2%）入院时伴发热、流涕，21例（31.8%）出现肠道感染，有9例（13.6%）就诊时伴食欲不振，其余24例（36.4%）无明显感染症状。

1.2 诊断依据

参考1999年中华医学会儿科学分会心血管专业组昆明会议修订的诊断标准[1-2]：（1）心功能不全、心源性休克或心脑综合征；（2）心脏扩大（X线、超声心动图检查具有表现之一）；（3）心电图改变，以R波为主的2个或2个以上主要导联（Ⅰ、Ⅱ、aVF、V5）的ST-T改变持续4 d以上伴动态变化，窦房传导阻滞，房室传导阻滞，完全性右或左束支阻滞，成联律、多形、多源、成对或并行性早搏、房室结及房室折返引起的异位性心动过速，低电压（新生儿除外）及异常Q波；（4）CK-MB升高或心肌肌钙蛋白（cTnI或cTnT）阳性。

1.3 分组情况

患儿入院后进行详细的问诊、体格检查及实验室检查，明确诊断，并对其监护人详尽告知病情及治疗方法。95例患儿家属选择使用环磷酰胺外加心肌营养疗法，其余90例患儿家属选择在前组的基础上加用丙种球蛋白静滴治疗。环磷酰胺组患儿中有2例病情较其余儿童严重，不纳入此次研究范围，故进行筛选。环磷酰胺组93例，男34例，女59例，平均年龄（7.2±1.87）岁，联合治疗组90例，男32例，女58例，平均年龄（7.3±1.64）岁，两组患儿治疗前均未用任何影响免疫功能的药物，否认免疫缺陷病及严重感染，且性别构成、年龄、疾病程度差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。

1.4 治疗方法

环磷酰胺组患儿给予小剂量环磷酰胺4 mg/（kg・d），同时给予1，6二磷酸果糖，大剂量维生素C，泛癸利酮，维生素E和复合维生素B，纠正心力衰竭、休克和抗心律失常等对症治疗。联合治疗组在上述治疗基础上加用人丙种免疫球蛋白400 mg/kg，1次/d静脉滴注，连用5 d，疗程2周。出院后患者均获随访，随访时间为0.5~2.0年。

1.5 疗效标准

显效：主要症状、体征消失，胸片、心胸比例缩小、并发症缓解、心脏彩超正常或接近正常。有效：主要症状、体征改善，心电图正常或明显改善，胸片、心脏彩超好转。无效：上述检测均无明显改善或病情恶化。

1.6 数据处理

使用SPSS 13.0录入数据，采用两独立样本χ2检验比较两组患者疗效。P ＜ 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

两组患儿均未出现死亡病例，随访结果见表1。两组患儿治疗显效率及总有效率差异均有统计学意义（P < 0.05），联合治疗组疗效优于环磷酰胺组。

3 讨论

VM是小儿最常见的后天性心血管疾病，目前国内外发病均有逐年增多趋势，在病毒感染后发病人群多数呈轻中型临床表现，也可急性暴发而致猝死。部分呈慢性持续感染，出现顽固性心律失常，慢性心功能不全[3]。探索有效的治疗手段，减少后遗症的发生，是当前儿科医生的重要任务。VM的发病机制至今尚未明确，多数认为与病毒感染后所致的自身免疫对心肌细胞的损伤有关。环磷酰胺是目前应用较多的免疫抑制剂。小剂量4 mg/（kg・d）时主要抑制淋巴器官的B细胞区，大剂量300 mg/（kg・d）时能完全消除T、B细胞功能。据报告早期给予CVB3心肌炎小鼠大剂量100 mg/（kg・d）环磷酰胺虽然很少发生严重的心肌细胞浸润和坏死，但能增加小鼠病死率，系由于免疫抑制导致病毒滴度增加所致[4]。采用小剂量治疗，可抑制和减轻免疫反应而达到改善心功能的效果。而免疫功能受到抑制后，病毒在机体内繁殖的概率增加，有学者应用免疫球蛋白治疗后T淋巴细胞亚群和各细胞因子水平与治疗前比较均明显恢复（P < 0.05），提示IVIG治疗可促使过度活化的 CD+4细胞被抑制，而CD+8细胞数量相对增多，使CD+4/CD+8比值恢复，表明免疫球蛋白能调节T细胞亚群功能状态使细胞免疫过度活化下调，降低细胞毒活性，并迅速达平衡状态，并可抑制sIL-2R，TNF-α和IFN-γ的产生，其治疗VM的机制主要是通过调节细胞免疫，减少细胞因子的产生，降低细胞毒性T细胞向心肌组织黏附、浸润和攻击作用[5-7]。故使用免疫球蛋白可弥补因使用免疫抑制剂所导致的免疫功能降低的不足。本次研究对确诊病毒性心肌炎患儿在常规心肌营养及对症治疗基础上联合使用环磷酰胺和人丙种免疫球蛋白，患儿临床疗效明显优于单纯使用环磷酰胺和心肌营养治疗组，且未见明显不良反应，可在日后临床中推广使用，以提高临床疗效和患者的生活质量。然而由于免疫球蛋白价格较高，限制了经济困难的患儿家长对其的选择，故开发新型廉价的药物制剂，对于免疫球蛋白在治疗病毒性心肌炎上的临床推广，具有重要的意义。

[参考文献]

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[2] 沈晓明，王卫平.儿科学[M].7版.北京：人民卫生出版社，2008：300-301.

[3] 马秀梅，付会英，王风涛.病毒性心肌炎药物治疗研究进展[J].医学综述，2009，15（23）：3604-3608.

[4] 黄磊，马沛然.病毒性心肌炎治疗进展[J].实用儿科临床杂志，2005，20（7）：694-695.

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[6] 黄开明，杨波.36例小儿急性重症病毒性心肌炎临床分析[J].中国医药指南，2010，8（1）：106-107.

肌球蛋白范文4

肌原纤维粗丝中的肌球蛋白是最主要的肌原纤维蛋白。肌球蛋白由轻链与重链2个部分组成［6］。肌球蛋白轻链与重链具有不同的热稳定性，且不同种类之间差距较大，如白色石首鱼酶解肌球蛋白轻链在80℃形成二聚体，而白眼雪鱼的酶解肌球蛋白轻链则基本不形成二聚体［7］。ReedZ．H．等研究发现，鲑鱼肌球蛋白的表面疏水性在18．5～75．0℃范围内随温度的升高而升高，之后维持稳定［8］。罗非鱼肌球蛋白轻链与重链的表面疏水性在30～40℃范围内都呈上升趋势，其中重链到达70℃之后近似稳定，而轻链虽呈上升趋势，但变化不大［9］。箭齿鲽肌球蛋白的表面疏水性在20～65℃范围内持续增加［10］。蛋白质分子的表面疏水性可能与形成蛋白质分子的氨基酸残基的疏水性有关。肌球蛋白的表面疏水性发生变化说明分子内或分子间的疏水作用力发生了改变，达到一定程度后必然导致蛋白完全变性。VisessanguanW．等观察到肌球蛋白的α-螺旋在15℃条件下开始展开，并一直持续到65℃［10］。这与肌球蛋白表面疏水性的变化有相同变化趋势，可能是蛋白质结构的展开使得更多的氨基酸疏水性残基暴露的原因。鲑鱼肌球蛋白总巯基含量在18．5～50．0℃范围内保持稳定，超过50．0℃后开始下降。表面活性巯基含量则随着温度从18．5～50．0℃升高而逐渐增加，超过50．0℃后则表面活性巯基及总巯基含量均减少［8］。但箭齿鲽肌球蛋白表面活性巯基含量在20～30℃内显著减少，在30℃之后稳定［10］。肌球蛋白表面活性巯基含量在低温加热的条件下因蛋白质结构的展开可能会有所增加，在一定温度范围内可能因为表面活性巯基结合形成二硫键，从而造成其含量下降。

肌球蛋白与肌动蛋白在三磷酸腺苷ATP供能或死后僵直的情况下可结合形成肌动球蛋白。肌动球蛋白的热稳定性与肌球蛋白的热稳定有密切的联系，且在一定程度上又有所差异。肌动球蛋白的表面疏水性随加热温度的增加与肌球蛋白相类似，并可能都是由于蛋白质二级结构，如无规卷曲的展开造成的［11］，且其展开速率会因温度的升高而加快［12］。蛋白质结构的展开与凝聚可能导致其特性的改变。如马鲛鱼肌动球蛋白在加热过程中黏度与Ca2+ATP酶活性均显著降低［13］，罗非鱼的肌动球蛋白在42和45℃热处理条件下产生聚集物［14］，八线马鲅肌动球蛋白则在40℃以上条件下形成不溶性聚集物［15］。罗非鱼的肌动球蛋白在产生聚集物时表面活性巯基含量出现最大值，并在95℃加热条件下减少至50%。与此同时，总巯基含量随温度的升高而减少［14］。八线马鲅的表面活性巯基含量在50℃以下随温度的升高而升高，之后开始下降，在高于50℃条件下有二硫键形成［15］。在45℃以上的热处理中，肌动球蛋白多以非共价键形成聚集物，超过75℃则多以二硫键形式形成聚集物［14］。

肌浆蛋白的组成较为复杂，其中主要包括具有生化特性的各种酶类和赋予肌肉颜色特性的色素蛋白［16］等。在高温条件处理下酶会因变性失活，但在低温加热条件下，部分酶类将保留一定的催化活性，如55℃热处理后鱼肉中仍可检测出蛋白酶活性［17］;且经55℃加热10min，鱼肉中磷酸酶的活性仅降低为原来的10%［18］。低温加热处理过程中的酶催化反应必然会引起鱼肉组成和品质的变化。肌红蛋白是主要的色素蛋白。不同结构的肌球蛋白具有不同的热稳定性，ThiansilakulY等通过动电势分析测得东方小头鲔肌红蛋白的等电点为5．25，氧合肌红蛋白与高铁肌红蛋白的变性温度分别为61与60℃，即60℃以上的热处理会使肌红蛋白发生变性［19］。在达到肌红蛋白变性温度前，伴随温度的升高和加热时间的延长，氧合肌红蛋白变得更易氧化和构象变化，而高铁肌红蛋白却出现变稳定的趋势。此外，有研究表明肌红蛋白会引起肉制品中脂质氧化［20］，罗非鱼肌红蛋白具有促氧化能力，在45℃以下的热处理对其促氧化能力不受影响，但更高的温度则会导致其促氧化能力的降低。高铁肌红蛋白的促氧化能力在68和90℃条件下相差不大，而氧合肌红蛋白的促氧化能力受温度的影响则较大［21］。因此，低温加热不能有效防止因肌红蛋白引起的脂质氧化，反而可能因温度的提高加速脂质氧化。

肌基质蛋白是主要的结缔组织蛋白，其中最为重要的便是胶原蛋白。胶原蛋白的含量与鱼肉的质地有一定联系，低胶原蛋白的鱼肉较为柔嫩［22］。胶原蛋白会在加热过程中溶解或解链，对鱼肉质地产生影响［23］。

热处理必然导致鱼肉脂质的氧化，其中不同的热加工形式对鱼肉脂质具有不同的影响，如在油煎过程因C16∶0、C14∶0和C22∶0的损失造成饱和脂肪酸含量损失70%，罐装过程3种脂肪酸损失40%。在微波加热过程中因C24∶1含量的增加，使得单不饱和脂肪酸含量增加38%［24］。但微波加热过程中游离脂肪酸含量会显著减少，共轭二烯烃的含量增加，过氧化值减少［25］。ω-3不饱和脂肪酸在热加工过程中损失较大［24］。鱼肉脂质的过氧化值在烟熏过程中减少，在油煎、烘焙、烧烤加工中则会增加。在多种热加工中都会导致TBA(硫代巴比妥酸)值增加［26］。

肌球蛋白范文5

肌肉的构造可从其两个基本合成，其一是较粗的肌球蛋白微丝，其二是较细的肌动蛋白微丝。在肌球蛋白微丝上，有些细小的突出点，称为相久桥，它将肌球蛋白微丝和周围的肌动蛋白微丝相连接。相对而言，相邻的肌原纤维节形成肌原纤维，它们是所有肌肉的主要组成单位，成群的肌原纤维由肉膜包住而形成单条的肌纤维，许多条肌纤维又被肌柬膜捆住而形成肌束。

（来源：文章屋网 http://www.wzu.com）

肌球蛋白范文6

[关键词]骨骼肌；蛋白代谢；细胞培养；凋亡

[中图分类号]Q591.2[文献标识码]A[文章编号]1008-6455（2014）07-0541-04

The influence of caspase3 to the cultured skeletal muscle cells'proteolysis

WU Yan-qiu,CHAI Jia-ke,ZHANG Hai-long,GENG Yi-nan

(Burns Institute,The First Affiliated Hospital to the General Hospital of PLA,Beijing 100048, China )