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不同品种的禽白血病ELISA检测探析

2021-07-26 16:27 来源:白血病论文 人参与在线咨询

摘要:旨在对重庆武隆区某鸡场种用鸡群进行禽白血病检测,并开展病原净化工作。分别采集鸡场种用鸡群的泄殖腔试子、鸡蛋和精液样本,利用ELISA检测技术对禽白血病感染性抗原进行检测,对比分析不同样本对检测结果的影响以及禽白血病在不同品种中的检出率,评价种用鸡群的禽白血病感染情况,并制定合理的病原净化措施。检测结果表明,该鸡场种用鸡群中存在禽白血病,总检出率为18.9%,其中,母鸡阳性率为16.88%,公鸡阳性率为30.07%。建议对该鸡场扩大检测规模,重点对种用鸡群不同世代进行禽白血病监测,及时淘汰阳性感染病例。

关键词:种用鸡群;禽白血病;ELISA检测;感染性抗原;检出率

0引言

禽白血病(AvianLeukosis)是由反转录病毒科,甲型反转录病毒属的禽白血病、肉瘤病毒群中的病毒引起的禽类多种肿瘤性疾病的统称,可感染所有种禽群和商品鸡群[1-2]。该病毒为反转录病毒科,病毒粒子呈20面体对称,有囊膜,病毒抵抗力较差,对高温、强碱和强酸较为敏感。依据禽白血病病毒的宿主范围和抗原性可将其分为多个亚型,其中,鸡外源性禽白血病病毒主要包括A、B、C、D和J亚群,以及内源性的E亚群[3]。鸡群感染禽白血病后,易出现免疫力下降、肿瘤性疾病、产蛋率降低等症状,严重者引起死亡,对家禽业发展造成严重威胁[4-5]。该病尚无有效疫苗和特效药物,主要防控措施是加强疫病监测,淘汰阳性病例,切断垂直传播途径,优化种用鸡群,加强饲养管理。目前,重庆地区偶有禽白血病的发生,基于此,针对重庆武隆某养鸡场开展种用鸡群的禽白血病检测,为该场疫病防控提供科学依据。

1材料与方法

1.1试验动物

武隆区某种鸡场鸡群,包括武隆黑鸡、大宁河鸡、青脚麻鸡、石柱土鸡、凤羽鸡、罗曼粉+麻鸡杂交6个品种,6~7月龄。

1.2主要试剂和仪器

DF-1细胞,由重庆市畜牧科学院实验室提供;IDEXX禽白血病p27抗原检测试剂盒,购自美国IDEXX公司;CO2培养箱,购自艾利特生物科学(上海)有限公司。

1.3方法

1.3.1样本的处理泄殖腔拭子:采样前在样本管中加入1mL样本稀释液,专用无菌棉签采集种鸡泄殖分泌物,置于样本管后-80℃保存备用。蛋清:收集种用母鸡新鲜鸡蛋,75%酒精棉球消毒鸡蛋和打孔器,打孔器在鸡壳上钻小孔,5mL注射器吸取约1mL蛋清至无菌样本管中,-80℃保存备用。精液:采集公鸡精液50μL于1.5mL离心管中,离心管中含150μL灭菌的PBS溶液,混匀后,反复冻融3次,12000r/min离心10min,取上清接种于DF-1细胞中,37℃,5%CO2培养箱中连续培养7d,反复冻融3次,收集上清,-80℃保存备用。1.3.2不同样本的禽白血病抗原检测分析随机选取100只母鸡和100只公鸡,采集2次泄殖腔拭子、鸡蛋和精液样本,时间间隔1d。参照试剂盒说明书,吸取不同样本100μL,加入到ELISA反应板中,并分别加入阴性对照和阳性对照100μL各2孔,盖好反应板,在25℃条件下孵育60min;350μL蒸馏水洗板3次,最后一次洗板后将液体拍干;每孔加入100μL酶标抗体,在25℃条件下孵育60min;重复洗板操作;每孔加入100μLTMB底物,盖好板在25℃条件下避光孵育15min后,每孔加入100μL终止液终止反应;酶标仪测定650nm吸光值,通过计算检测样本与阳对照比值(S/P)进行样本的阴、阳性判定。S/P>0.2判定为阳性,S/P≤0.2判定为阴性。同时,对比分析不同样本检测结果的重复性。1.3.3不同品种的的禽白血病抗原检测分析依据不同样本的检测结果,选用合理的样本采集方式,针对该鸡场不同品种种用鸡群进行抗原检测,检测方法参照1.3.2,并对不同品种的禽白血病感染情况进行对比分析。

2结果

2.1公、母鸡不同样本

ALV-p27抗原检测结果ELISA检测100份鸡群泄殖腔拭子,23份样本为阳性,阳性率23%。对应的蛋清样本中,25份为阳性,阳性率25%。结果显示,蛋清ALV-p27抗原阳性检出率高于泄殖腔拭子。而公鸡的精液阳性率(26%)高于泄殖腔拭子的阳性率(24%),如表1所示。

2.2不同样本检测结果的重复性分析

对各样本检测结果的重复性分析,发现母鸡泄殖腔试子和蛋清样本的重复率差别较小,分别为95%和96%;公鸡的泄殖腔试子和精液样本的重复率分别为96%和100%,精液的重复性高于泄殖腔试子,结果如图1所示。

2.3不同品种的种鸡禽白血病

ALV-p27抗原检测结果基于各样本检测结果和样本处理的复杂程度,对于种群较大的鸡群选择泄殖腔拭子作为样本进行ELISA检测,共计检测母鸡2322只,ALV-p27抗原阳性数量392只,阳性率16.88%。公鸡429只,p27抗原阳性数量129只,阳性率30.07%。不同品种种鸡ALV-p27抗原阳性率明显差异较大如表2、表3所示。

3讨论

通过对该鸡场禽白血病进行检测,发现该场存在禽白血病阳性病例,通过对种用鸡群不同样本的检测,发现泄殖腔试子、蛋清和精液均可获得较好的检测结果,其中,精液的检测结果重复性高于泄殖腔试子,但综合考虑检测时效性、准确性和重复性,泄殖腔拭子更适合种群的大规模检测,而蛋清和精液更适合少量样本的检测。此外,该种群中,青脚麻鸡的禽白血病检出率均远低于其他品种,其中母鸡阳性检出率为2.23%,公鸡为9.80%,该场地可加大青脚麻鸡的饲养量。结合其养殖品种、饲养模式和养殖规模,建议扩大检测规模,对各阶段鸡群进行抽样检测,及时淘汰阳性病例,重点对种鸡子代鸡群进行抗原检测,切断垂直传播途径,同时,加强饲养管理,对粪污及时处理,防止水平传播[6]。

参考文献:

[1]许国洋,付利芝,杨金龙,等.禽白血病病毒重庆株的分离鉴定及毒性分析[J].黑龙江畜牧兽医,2016(8):164-166+294.

[2]胡璇,温贵兰,张喜懿,等.禽白血病的研究进展[J].贵州畜牧兽医,2021,45(1):36-40.

[3]杨荣坤,许青荣,崔卫涛,等.地方鸡禽白血病病毒感染调查及主要流行亚群分析[J].华中农业大学学报,2020,39(3):89-93.

[4]潘金升.禽白血病的净化及防控[J].兽医导刊,2020(14):135.

[5]童洪生.鸡蛋和胎粪禽白血病病毒p27抗原检测试验[J].养殖与饲料,2020(2):11-14.

[6]张桂枝,龙瑞艳,徐明国,等.J亚型禽白血病病毒水平传播的试验[J].中国兽医杂志,2020,56(2):1-4+8.

作者:许国洋 付文贵 徐登峰 周雪 单位:重庆市畜牧科学院 重庆市兽用生物制品工程技术研究中心

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